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苦参碱对K562细胞LIGHT基因表达的影响
[目的]利用凋亡相关基因芯片研究苦参碱对K562细胞基因表达谱的影响,以揭示苦参碱抗肿瘤作用的分子机制.[方法]苦参碱0.4mg/ml作用K562细胞48h后,分别提取对照组和处理组细胞总RNA,采用Superarray公司GEArray Q Series Human Apoptosis Gene Array(HS-002) 芯片(含96个凋亡相关基因)筛选出苦参碱作用细胞后的差异表达基因,并用RT-PCR验证其中的LIGHT基因表达的变化.[结果]0.4mg/ml苦参碱作用K562细胞48h后.芯片结果显示37个基因的差异表达在2倍以上,其中表达下调为32个,表达上调为5个.RT-PCR验证了苦参碱对LIGHT基因表达上调的影响.[结论]苦参碱作用K562细胞可上调LIGHT基因的表达.
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LIGHT、IFN-γ基因转染人肝癌HepG2细胞凋亡及其Caspase-3和survivin表达
目的 观察LIGHT、IFN-γ基因转染人肝癌细胞HepG2的凋亡及其Caspaae-3和survivin的表达变化. 方法 用LIGHT、IFN-γ真核细胞表达质粒pcDNA4C-LIGHT-cDNA、pcDNA4C-IFN-γ-cDNA及其转化的E.coli JM-109感受态大肠杆菌,经质粒提取后,转染人肝癌细胞HepG2,同时设对照组(未转染).分别于转染后12、24、48 h收集HepG2细胞.流式细胞仪检测细胞凋亡和Caspase-3、survivin. 结果 转染后细胞凋亡及Caspase-3表达量在对照组、LIGHT单转组、联合转染组呈逐渐递增趋势,survivin表达量呈递减趋势. 结论 LIGHT转染后能通过调节HepG2细胞Caspase-3及survivin的表达来发挥促细胞凋亡作用,INF-γ能增强LIGHT诱导的HepG2细胞凋亡,且显著上调其Caspase-3的表达.
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转基因LIGHT的人脐血间质干细胞对胃癌抑制杀伤作用的研究
目的 探讨转基因LIGHT脐血间质干细胞对胃癌的抑制杀伤作用.方法 采用慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-LIGHT,在脂质体Lipofectamine 2000介导下与结构质粒pHelper 1.0和包膜质粒pHelper 2.0共转染293T细胞获得慢病毒后分别感染人脐血间质干细胞,获得重组慢病毒感染的脐血间质干细胞(MSC-LIGHT)和空载体慢病毒感染的脐血间质干细胞(MSC).人胃癌细胞SGC-7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型.荷瘤裸鼠分为MSC-LIGHT组、MSC组和生理盐水组,每组5只,向3组裸鼠瘤周分别注射MSC-LIGHT、MSC及生理盐水,隔日1次,注射3次,第4周取材,观察注射前后瘤体生长情况.反转录PCR和ELISA法测定3组胃癌组织中LIGHT的mRNA和蛋白表达;病理切片观察瘤体的坏死面积.结果 MSC-LIGHT组、MSC组和生理盐水组裸鼠肿瘤体积分别为(0.45±0.25)cm3、(0.64±0.36)cm3和(1.21±0.79)cm3,3组比较差异有统计学意义(P＜0.05).3组LIGHT mRNA相对表达量分别为2.96±0.27,1.23±0.47和0.73±0.10,蛋白浓度分别为(167.89±2.31)、(73.22±5.74)和(49.66±5.25)ng/L;3组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).病理切片显示MSC-LIGHT组坏死面积大.结论 转基因脐血间质干细胞旁分泌LIGHT对胃癌细胞具有明显的抑制杀伤作用.
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LIGHT基因和干扰素-γ转染诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究
目的 探讨脂质体介导LIGHT基因和IFN-γ转染诱导肝癌HepG2细胞的促凋亡作用.方法 以脂质体介导LIGHT基因和IFN-γ转染肝癌HepG2细胞,设立转染组(单转、联合转染组)和对照组(未转染组).分别于转染后12、24、48 h检测肝癌HepG2细胞的凋亡率、Bcl-2及Caspase-8的表达量,并采用方差分析.结果 (1)细胞凋亡率:单转组转染后12、24、48 h为18.8%±3.5%、25.7%±2.8%、36.4%±3.6%;联合转染组为23.8%±2.4%、31.1%±2.1%、42.5%±4.5%;对照组为8.7%±2.1%、9.3%±1.6%、10.9%±1.2%.3组比较差异有统计学意义(F=15.69,53.33,48.28,P<0.01).(2)Bcl-2表达量:单转组在转染后12、24、48 h为16.4%±5.0%、13.4%±3.5%、8.6%±2.3%;联合转染组为14.7%±3.8%、9.1%±2.0%、4.6%±2.0%;对照组为25.3%±6.3%、19.8%±4.4%、10.1%±3.8%.3组比较差异有统计学意义(F=6.19.12.29,5.81,P<0.05).(3)Caspase-8表达量:单转组在转染后12、24、48 h为19.3%±2.4%、27.2%±1.9%、33.7%±3.0%;联合转染组为22.7%±2.2%、30.9%±3.1%、38.2%±3.2%;对照组为1.2%±0.8%、1.8%±0.6%、3.2%±1.5%.3组比较差异有统计学意义(F=71.54,112.78,101.61,P<0.01).结论 LIGHT基因转染肝癌HepG2细胞后通过调节Bcl-2及Caspase-8的表达来发挥促凋亡作用,IFN-γ能增强LIGHT基因诱导肝癌HepG2细胞的凋亡.
