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MicroRNA-21靶向PDCD4对胃癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 探讨MicroRNA-21对胃癌细胞中PDCD4表达、细胞增殖与凋亡的影响.方法 将MGC-803人胃癌细胞分为5组,分别为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染不相关siRNA),mir 21组(转染miRNA-21质粒),mir 21 Inhibitor组(转染miRNA-21抑制物)、PDCD4 siRNA组(转染PDCD4 siRNA).分别于转染后36、48、72小时收集细胞,采用实时定量PCR及细胞爬片免疫组织化学检测细胞中PDCD4基因及蛋白水平,运用MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 与空白、阴性对照组比较,mir 21组PDCD4表达量下降,细胞增殖能力增强(均P＜0.05);mir 21 Inhibitor组PDCD4表达量增多(P＜0.05),细胞增殖受到抑制(P＜0.01),细胞总凋亡比例增高(P＜ 0.05);PDCD4 siRNA组PDCD4表达几乎完全被抑制,细胞增殖能力增强(均P＜0.01),36小时时细胞总凋亡比例减少(P＜0.05).而阴性和空白对照组比较,细胞PDCD4表达量、细胞增殖与凋亡都无明显差异(P＞0.05).结论 MicroRNA-21能靶向调控PDCD4,抑制胃癌细胞MicroRNA-21的表达后可上调PDCD4表达,发挥抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用.
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miR-18a对肝癌细胞侵袭及迁移能力的影响及其机制
目的 探讨miR-18a对肝癌患者血清肝癌细胞侵袭及迁移的影响及其作用机制.方法 细胞经培养、传代、冻存、复苏后采用脂质体介导转染法进行转染.肝癌细胞株HepG2.2.15及HepG2分别转染miR-18a inhibitor和miR-18a inhibitor阴性对照24 h后,应用transwell侵袭和迁移实验测定肝癌细胞的侵袭和迁移能力.肝癌细胞株HepG2和HepG2.2.15分别转染miR-18a inhibitor、miR-1 8a inhibitor阴性对照、共转染miR-18ainhibitor和Dicer siRNA以及共转染miR-18a inhibitor和Dicer siRNA阴性对照48 h后,应用Western blot法比较各组Dicer1蛋白表达的差异,应用transwell侵袭和迁移实验比较各组细胞侵袭以及迁移能力的差异.结果 转染miR-18a inhibitor 后,HepG2和HepG2.2.15细胞的侵袭和迁移能力均降低,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).转染miR-18a inhibitor组Dicer1蛋白表达水平较转染miR-18a inhibitor阴性对照组升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).共转染Dicer siRNA+ miR-18a inhibitor组Dicerl蛋白表达水平较Dicer siRNA阴性对照+miR-18a inhibitor组降低,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞的侵袭和迁移能力均增强,差异均具有统计学意义(均P ＜0.05).结论 miR-18a 促进肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其机制可能与Dicer1蛋白表达抑制有关.
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骨质疏松发病过程中骨髓间充质干细胞差异性表达microRNA的筛选及其在干细胞多向分化中的功能
目的:研究去势小鼠骨质疏松模型中骨髓间充质干细胞( BMMSC) microRNA表达谱的改变,确定特异性改变microRNA的功能,明确其在骨质疏松发病中的作用.方法:通过微阵列芯片筛查,寻找在骨质疏松模型骨髓间充质干细胞中差异性表达的microRNA,并在成骨成脂分化诱导后行RT-PCR检测其表达水平,研究其在BMMSC多向分化中的作用.结果:本研究发现了10个在骨质疏松发病过程中有差异性表达的microRNA,其中5个microRNA在BMMSC成骨分化过程中,3个microRNA在成脂分化过程中表达出现明显改变.结论:microRNA表达异常可能导致骨质疏松发病过程中BMMSC的功能缺陷.
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微小RNA222靶向调控基质金属蛋白酶1促进增生性瘢痕组织成纤维细胞生长
目的:观察微小RNA(miR-)222在增生性瘢痕(HS)组织中的表达,并研究其调控成纤维细胞生长的机制.方法:采用实时定量RT-PCR检测36例患者HS和正常组织中miR-222的表达;MTT法、流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测成纤维细胞的增殖能力、生长周期、凋亡和相关蛋白表达.双荧光素酶报告分析确定miR-222的靶基因.结果:与正常皮肤组织相比,HS组织中miR-222表达显著上调(P<0.05).上调miR-222的表达可显著提高成纤维细胞的增殖能力,增加增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型和Ⅲ型胶原α1的mRNA和蛋白表达,上调S期细胞比例和细胞周期相关蛋白的表达,下调成纤维细胞的凋亡率和凋亡相关蛋白的表达.MMP1是miR-222的靶基因,miR-222通过绑定MMP1-3′ UTR 区负向调控MMP1在成纤维细胞的表达.MMP1可逆转miR-222的部分促纤维化作用.结论:miR-222通过负调控其靶基因MMP1的表达来实现其调控成纤维细胞的生长和凋亡.miR-222/MMP1信号通路可能成为HS诊断和治疗的生物学标志物和靶点.
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miR-369-3p通过调控VEGFC基因表达对膀胱癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 观察miR-369-3p对膀胱癌细胞EJ和5637中血管内皮细胞生长因子C(VEGFC)基因的调控作用,并观察其对细胞增殖及凋亡的影响.方法 转染miR-NC(对照组)或转染miR-369-3p(观察组)至膀胱癌细胞株EJ和5637;采用Targetscan靶基因预测软件预测miR-369-3p的靶基因;采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测VEGFC mRNA表达变化;Western blotting检测VEGFC、p-Raf-1和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)在蛋白水平的变化;采用细胞计数试剂盒(CCK-8法)和克隆形成实验检测miR-369-3p对膀胱癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测miR-369-3p对细胞凋亡的影响.结果 转染miR-369-3p后,EJ、5637细胞中VEGFC在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显下降(P＜0.05),p-Raf-1和p-ERK1/2蛋白表达明显降低,细胞的增殖能力明显降低(P＜0.05),细胞形成的克隆数明显减少(P＜0.05),细胞凋亡明显增加(P＜0.01).结论 miR-369-3p可通过干扰VEGFC基因的表达,抑制膀胱癌细胞的增殖及促进膀胱癌细胞的凋亡,可能为膀胱癌的生物治疗提供一个新的靶标.
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新型骨靶向纳米复合物抗前列腺癌骨转移细胞增殖作用研究
目的 通过构建可携带具有抗前列腺癌增殖作用的基因miR-15-a和miR-16-1的适体-去端胶原(APT-ATE),探讨载体系统的转染效率及其对前列腺癌细胞的抑制作用.方法 运用流式细胞仪,得出APT-ATE基因载体结构;利用粒径电位仪对APT-ATE/miRNA(适体-去端胶原/微小RNA)纳米复合物进行表征;利用基因转染考察APT-ATE/miRNA复合物在前列腺癌细胞(PC3和LNCaP)上的表达效果;CCK-8增殖抑制实验,考察APT-ATE/miRNA对前列腺癌细胞的抑制效果.结果 利用结构鉴定证明APT-ATE合成成功.定性定量转染效率实验证明APT修饰后的ATE对LNCaP细胞转染效率显著增加,证明APT的靶向作用.CCK-8细胞增殖实验证明,APT-ATE/miRNA可抑制前列腺癌细胞.裸鼠体内靶向性实验证明,APT-ATE/miRNA具有较好的骨靶向作用.结论 APT-ATE/miRNA有望成为今后靶向治疗骨转移性前列腺癌的基因药物.
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Let-7b对人黑色素瘤细胞增殖及有氧糖酵解的影响
目的 研究let-7b对人黑色素瘤细胞增殖及有氧糖酵解的影响.方法 将人工合成的microRNA单核苷酸let-7b mimics及inhibitor通过脂质体转染人黑色素瘤细胞株A375,上调或抑制let-7b在细胞内的表达水平,不同时相点检测细胞葡萄糖消耗和乳酸产量.MTT法检测细胞增殖.运用单因素方差分析探讨let-7b表达水平与黑色素瘤细胞有氧糖酵解及增殖的关系.结果 let-7bmimics组24、48 h时相点检测MTT吸光度值分别为0.396±0.030、0.525±0.037,低于其他组(P＜0.05),提示高表达let-7b抑制细胞增殖；各组黑色素瘤细胞24、48 h葡萄糖消耗及乳酸产量差异无统计学意义(P＞0.05),乳酸产量与葡萄糖消耗比值各组间差异无统计学意义(P＞0.05),其中空白组在24h和48 h内葡萄糖转化为乳酸效率约为57％和43％.结论 黑色素瘤A375细胞具有显著的有氧糖酵解表型,过表达let-7b可抑制人恶性黑色素瘤细胞A375增殖,但对于细胞的有氧糖酵解效率,尚未发现let-7b对其有显著影响.
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Let-7b和miR-199a对B16F10细胞增殖生长的影响
目的 研究let-7b和miR-199a对黑色素瘤增殖生长的影响.方法 设计靶向let-7b和miR-199a基因的过表达质粒和inhibitor干扰片段,将同一株系B16F10细胞分为七组:空白组、let-7b质粒组、miR-199a质粒组、空质粒组、let-7b inhibitor组、miR-199a inhibitor组、inhibitor对照组,运用基因转染技术将对应组别的外源基因导入B16F10细胞中,从RNA水平、蛋白水平和细胞水平三方面检测let-7b和miR-199a基因对B16F10细胞的影响.结果 let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞中对应基因的表达为3.8776±0.1372和2.8660±0.2821,明显高于空白组(P＜0.05);let-7b inhibitor组和miR-199a inhibitor组B16F10细胞中对应基因的表达为0.2057±0.0263和0.2656±0.0253,明显低于空白组(P＜0.05);B16F10细胞中cyclinD1的表达let-7b质粒组(2.023±0.315)和let-7b inhibitor组(1.857±0.377)明显高于空白组(0.997±0.041)(P＜0.05),而B16F10细胞中Met的表达中miR-199a质粒组(5.19±0.309)和miR-199a inhibitor组(4.87±0.044)明显高于空白组(2.2±0.198)(P＜0.05);let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞的生长趋势较空白组缓慢,尤其到转染后第3天,此生长趋势下降至低值(P＜0.05),此后又缓慢趋近正常;此外,let-7b质粒组和miR-199a质粒组B16F10细胞凋亡率分别为(11.8±1.19)%和(11.3±1.59)%,明显高于空白组(5.77±1.74)%(P＜0.05).结论 let-7b和miR-199a可负调控黑色素瘤细胞的增殖生长.
关键词： 微RNAs/药理学 黑色素瘤/病理学/药物疗法 细胞增殖 细胞生长过程
