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旋毛虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响
目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的影响. 方法 旋毛虫肌幼虫培养24 h,收集培养液,取上清,即为旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白.将人小细胞肺癌NCI-H446细胞(编号A054)随机分为3组,实验组(A组)和细胞凋亡组(B组)的NCI-H446细胞(5×106/ml)分别与旋毛虫排泄分泌蛋白(终浓度为0.3 mg/ml)和顺铂(6.4 μg/ml)共培养24 h,空白对照组(C组)的NCI-H446细胞培养24 h,不作任何处理.RT-PCR检测3组NCI-H446细胞中凋亡抑制基因Bcl-2、凋亡相关基因Fas和Fas配体(Fasl) mRNA的表达水平.以抗原癌基因C-myc标签鼠单克隆抗体为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)检测3组细胞C-myc蛋白的表达情况.免疫荧光检测3组NCI-H446细胞中C-myc蛋白阳性表达情况. 结果 RT-PCR结果显示,经旋毛虫排泄分泌蛋白处理的NCI-H446细胞(A组),Bcl-2 mRNA相对表达水平低,为(0.575±0.047),与B(0.850±0.073)、C组(0.975±0.069)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).A组Fas mRNA相对表达量高,为(0.975±0.115),B(0.817±0.121)、C组(0.769±0.061)相对较低(P＜0.05).A、B和C组细胞Fasl mRNA相对表达水平分别为0.669±0.051、0.787±0.124、0.875±0.125 (P＜0.05).A、B和C组细胞Fas/Fasl mRNA比值分别为1.475、1.038和0.878.Western blotting分析结果显示,A组C-myc相对表达水平低(0.566±0.054),B(1.074±0.069)、C组(1.172±0.026)相对较高(P＜0.05).免疫荧光定位结果显示,旋毛虫排泄分泌蛋白和顺铂作用后24h,C-myc蛋白在细胞浆/细胞核表达. 结论 旋毛虫排泄分泌蛋白可促进人小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞凋亡,可能是通过调节凋亡蛋白C-myc表达、进而抑制Bcl-2 mR-NA的表达并调节Fas/Fasl mRNA比例来实现的.
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金莲花黄酮对K562、HeLa、Ec-109、NCI-H446细胞增殖的影响
目的:观察金莲花黄酮对K562、HeLa、Ec-109、NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响.方法:①采用CCK-8法检测0.793、1.586、3.172、6.344、9.516、12.688 g/L金莲花黄酮对K562、HeLa、Ec-109、NCI-H446肿瘤细胞株增殖的影响.②采用流式细胞术观察0.793、1.586、3.172 g/L金莲花黄酮对K562细胞周期的影响.结果:①金莲花黄酮在0.793～12.688 g/L范围内对体外培养的K562、HeLa、Ec-109、NCI-H446肿瘤细胞生长均有明显的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性(F=6.72,9.81,8.54,4.83,P均＜0.05).②金莲花黄酮可使K562 G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(F=12.56,20.86,P均＜0.05).结论:金莲花黄酮对体外培养的K562、HeLa、Ec-109、NCI-H446肿瘤细胞株的增殖均有很强的抑制作用;金莲花黄酮可使体外培养的K562细胞周期阻滞在G0/G1期,可能是其抑制K562肿瘤细胞增殖的机制.
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白藜芦醇下调NF-κB介导的MMP-9表达抑制人NCI-H446细胞的侵袭迁移
目的 观察白藜芦醇对肺癌细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,用不同浓度的白藜芦醇刺激.小室侵袭实验检测NCI-H446细胞的迁移与侵袭；Western blot检测MMP-9表达以及NF-κB p65亚基核转位；荧光素酶报告基因分析MMP-9和NF-κB活性. 结果 50 nM白藜芦醇孵育24 h后,其迁移与侵袭率分别降低了37％和33％；Western blot显示,白藜芦醇能抑制p65核转位；此外,白藜芦醇能以剂量依赖性方式抑制MMP-9的转录活性,NF-κB突变后报告基因活性显著降低.结论 白藜芦醇可通过抑制NF-κB介导的MMP表达从而抑制NCI-H446细胞侵袭迁移.
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不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞诱导PBMC增殖和杀伤肿瘤细胞的影响
目的 研究不同IL-15基因转染对NCI-H446细胞诱导外周血单个核细胞(PBMC)增殖和杀伤肿瘤细胞的影响.方法 野生型NCI-H446细胞(Cw)和被3种IL-15基因分别转染的3种NCI-H446细胞(Cmp:被IL-15成熟肽基因转染;Cp:被原型IL-15基因转染;Csp:被信号肽换为IL-2信号肽的改型IL-15基因转染),用丝裂霉素(M)处理后(分别名为MCw、MCmp、MCp和MCsp)作为刺激细胞刺激健康志愿者的PBMC.对这些被刺激的PBMC,分别名为MCw-PBMC、MCmp-PBMC、MCp-PBMC和MC-sp-PBMC.台盼蓝拒染法计数细胞数,流式细胞术测定CD4+细胞和CD8+细胞百分率.在MCmp-PBMC,MCp-PBMC和MCsp-PBMC中,选择其细胞数和CD4+细胞和/或CD8+细胞百分率统计学上明显高于MCw-PBMC的作为效应细胞,MTT法测定它们对Cw的杀伤.结果 与MCw-PBMC相比,MCp-PBMC在细胞数、CD4+细胞和CD8+细胞百分率及对Cw的杀伤上,均显著提高(P＜0.05).结论 原型IL-15基因转染能提高NCI-H446细胞诱导PBMC增殖和杀伤野生型NCI-H446细胞的能力.
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不同IL-15基因转染对 NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响
目的 探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖的影响.方法 用本室已构建的3种转染不同IL-15基因(原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因)的NCI-H446细胞模型:CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp,以野生株NCI-H446细胞(Cw)为对照,台盼蓝拒染计数法测定细胞生长曲线、MTT法检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期的变化、RT-PCR法检测cyclin D1和cyclin E的表达.结果 与 Cw相比,CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp增殖速率依次减慢、G0/G1期细胞比例依次增加、S期细胞和细胞周期蛋白cyclin E表达依次减少、cyclin D1表达无变化.结论 3种IL-15基因转染均有使NCI-H446细胞增殖明显减慢的作用,强度依次为改型＞成熟肽＞原型;这种作用与降低NCI-H446细胞cyclin E的表达有关(r=0.953,P＜0.05),与cyclin D1的表达无关(r=0.155,P＞0.05).
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不同IL-15转染对NCI-H446 HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响
目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响.方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL-15成熟肽基因的NCI-H446/IL-15mp细胞、转染原型IL-15基因的NCI-H446/IL-15细胞和转染以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因的NCI-H446/IL-2sp-IL-15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescence-activated cell sorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性.结果野生株NCI-H446细胞表面阳性表达HLA的工类和Ⅱ类分子;转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL-15基因后,这两种分子的表达均被显著上调.5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCI-H446细胞的平均NK杀伤率低,对NCI-H446/IL-15、NCI-H446/IL-15mp和NCI-H446/IL-2sp-IL-15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高.结论转染不同形式IL-15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同.转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因,抑制NCI-H446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL-15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL-15基因均可增强NCI-H446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL-15者高,IL-15成熟肽者次之,原型IL-15者低.
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HA14-1联合顺铂诱导人小细胞肺癌细胞凋亡的研究
目的:观察HA14-1及其联合顺铂对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡诱导作用并探讨其可能的作用机制,探讨其对Bcl-2、Bax表达的的影响.方法:选用人小细胞肺癌NCI-H446细胞株为研究对象,分为空白组、DDP组、HA14-1组及DDP+ HA14-1组,分别作用24、48 h后,采用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,Real time PCR法比较细胞内Bcl-2、Bax表达变化.结果:随着HA14-1及DDP浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,细胞凋亡率增高,联合用药组较单独用药组细胞的抑制率,凋亡率均增高,HA14-1作用细胞后,Bcl-2表达水平下降,Bax表达水平增高.结论:HA14-1可以诱导人小细胞肺癌凋亡,并增加肺癌细胞对DDP的化疗作用.
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RC-160对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用
0 引言 RC-160是一种新兴的生长抑素的类似物，近年来由于它在抑制肿瘤细胞增殖及异常分泌等方面的作用而受到关注. 研究表明，人类小细胞肺癌（SCLC）细胞株NCI-H446表面富含生长抑素受体，通过该受体可介导RC-160对NCI-H446的抑制作用. 国内尚未见到有关报道. 我们应用细胞生物学方法评价RC-160对人SCLC.细胞株NCI-H446的作用及其作用特点，旨在为SCLC的临床治疗提供新的思路.1 材料和方法1.1 材料 ①细胞：NCI-H446细胞株引自中国科学院上海细胞生物研究所的细胞库. 细胞按常规培养； ②试剂：RC-160由美联（西安）生物科技有限公司合成，MTT试剂为Sigma公司产品.
