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NADPH氧化酶活性不影响主动脉平滑肌细胞负荷胆固醇
NADPH氧化酶产生的活性氧促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移,与动脉粥样硬化的发生密切相关.为了观察NADPH氧化酶的亚基p47phox对血管平滑肌细胞胆固醇代谢的影响,把p47phox基因敲除小鼠的主动脉血管平滑肌细胞与10 mg/L水溶性胆固醇共孵育72 h,然后用0.3 mg/L凝血酶处理10 min,采用免疫组织化学和油红O染色、实时定量逆转录PCR、免疫蛋白印迹、细胞内胆固醇测定等方法,观察细胞内胆固醇的改变,与平滑肌细胞、巨噬细胞、炎症反应细胞内胆固醇代谢相关蛋白的表达.结果显示,与未孵育的对照组相比,水溶性胆固醇孵育过的主动脉血管平滑肌细胞内胆固醇明显增加,差别有显著性意义:细胞内中性脂滴明显增加;α-肌动蛋白的表达下降,半乳糖凝集素3表达升高,单核细胞趋化蛋白1及血管细胞黏附分子1的表达不变;ATP结合盒转运体A1、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达增加.但是,与野生型血管平滑肌细胞相比,敲除p47phox基因并不能使所测定的指标发生变化.结果提示,负荷胆固醇后,p47phox依赖的NADPH氧化酶并不能改变血管平滑肌细胞向泡沫细胞的转变.单纯敲除p47phox基因不能改变细胞内胆固醇代谢的状态.
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山葡萄多酚对高血压大鼠NADPH氧化酶活性的影响
目的 探讨山葡萄多酚对由血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起的高血压大鼠的治疗作用,并探讨其抗高血压的机制.方法 40只Wistar大鼠随机分成4组,即阴性对照组、试验对照组、山葡萄多酚治疗组、NADPH氧化酶抑制组,每组10只.每组大鼠均需要测血压以及NADPH亚单位p22phox、noxl和nox4 mRNA的变化.结果 大鼠NADPH氧化酶被抑制后血压明显下降,应用山葡萄多酚治疗AngⅡ引起的高血压组发现血压明显下降,NADPH氧化酶的亚单位p22phox、noxl以及nox4 mRNA表达也明显下降.结论 山葡萄多酚有降低由AngⅡ引起的高血压的效果,其机制是通过降低NADPH氧化酶的亚单位来实现的.
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老年白内障发病的氧化应激机制研究
白内障是临床上的常见疾病,严重影响患者的生活质量,给患者和家庭带来严重的经济和社会负担[1-2].白内障是由各种原因引起的晶状体代谢紊乱,如高糖、免疫或代谢异常等导致患者晶状体蛋白变性而出现浑浊,发生白内障3 5.但是,目前关于白内障的确切的发病机制尚不清楚.
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2型糖尿病患者外周血NADPH氧化酶表达和超氧阴离子的产生
目的 探讨2型糖尿病患者外周血NADPH氧化酶表达及外周血释放超氧阴离子(O2-)量与糖化血红蛋白(Hb)Alc、糖尿病肾病及糖尿病病程相关性.方法 细胞色素C还原法测外周血中性白细胞释放O2-的水平.Western blot检测NADPH氧化酶p47-PHOX和p67-PHOX因子磷酸化表达.并分析O2-的水平与其HbAlc、糖尿病肾病及糖尿病病程的关系.结果 2型糖尿病患者组外周血中性白细胞NADPH氧化酶p47-PHOX和p67-PHOX因子的磷酸化表达较对照组显著增强.2型糖尿病患者组中性白细胞释放O2-的水平与HbAlc、糖尿病病程正相关(r分别为0.798、0.774,P＜0.01),与糖尿病肾病呈负相关(r为-0.798,P＜0.01).结论 NADPH氧化酶p47-PHOX和p67-PHOX因子在糖尿病患者中表达增加.外周血中性白细胞释放O2-水平与HbAlc、糖尿病病程及与糖尿病肾病存在一定的关系.
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NADPH氧化酶介导的小胶质细胞活化在神经病理性疼痛和抑郁共病中的作用
目的 观察神经病理性疼痛和抑郁共病中磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶及小胶质细胞的变化,并探讨其相关机制.方法 采用保留性坐骨神经损伤模型(SNI模型).健康成年雄性SD大鼠44只,随机分为四组:假手术+溶剂组(SV组)、假手术+夹竹桃麻素(APO)组(SA组)、SNI+溶剂组(SNV组)、SNI+APO组(SNA组),每组11只.SA组和SNA组术前24 h及术前1 h腹腔注射APO 15 mg/kg,以后每天注射1次直至SNI术后14 d;其余两组在相同时点注射等容量溶剂.术前1 d和术后7、14 d进行机械缩足反射阈值(MWT)测试,术后14 d进行旷场实验、强迫游泳实验和糖水偏好实验等行为学测试.行为学后2 h取大鼠前额叶皮层组织,采用Western blot法检测gp91phox的含量,免疫荧光共标法检测Iba1和gp91phox的表达量.结果 与SV、SA、SNA组比较,SNV组MWT明显降低,强迫游泳不动时间明显延长,糖水消耗比例明显减少,gp91phox含量明显增多(P<0.05).与SV、SA、SNA组比较,SNV组Iba1和gp91phox表达量增多.旷场实验中,四组探索总路程差异无统计学意义;糖水偏好实验中,四组总液体消耗量差异无统计学意义.结论 神经病理性疼痛可导致抑郁样行为,并引起前额叶皮层的NADPH氧化酶活化;NADPH氧化酶抑制剂APO可减轻疼痛和抑郁样行为,其机制可能与抑制小胶质细胞活化有关.
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NADPH氧化酶与男性勃起功能障碍
勃起功能障碍是男性的常见病和多发病.目前认为氧化应激是引起阴茎勃起功能障碍的重要机制之一.NADPH氧化酶广泛存在于机体多个系统(包括阴茎组织),发挥重要的生理功能.在多种病理情况下,NADPH氧化酶可以在阴茎组织中催化合成大量活性氧,导致过度氧化应激,从而影响阴茎勃起功能.本文就NADPH氧化酶的组成、同源物、活性调节、生理功能、在勃起功能障碍中的作用以及在勃起功能障碍治疗中的应用作一综述.
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NADPH氧化酶与血管性认知损害
氧化应激在血管性认知损害(vascular cognitive impairment,VCI)的发病过程中起着重要的作用.越来越多的研究显示,NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)参与了VCI的氧化应激过程.文章对NOX与氧化应激和VCI之间的关系进行了探讨,期望为VCI的预防和治疗提供新的思路.
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NADPH氧化酶在缺血性卒中后氧化应激中的作用
氧化应激在脑缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用.NADPH氧化酶(NADPH oxi-dase,NOX)在缺血性卒中氧化应激中的作用日益受到关注,有可能会成为一个新的治疗靶点.文章归纳了NOX与脑缺血再灌注损伤的主要研究进展,讨论了各种同工酶的特点及其与卒中的关系,从NOX角度进一步探讨卒中的发病机制,为缺血性卒中的防治提供了新的思路.
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NADPH氧化酶与脑缺血再灌注损伤
NADPH氧化酶类是一个多亚基酶复合体家族,催化活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生.大量研究显示,氧化应激在脑缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用.而一些关于NADPH氧化酶在脑缺血后表达改变的发现,为缺血性卒中的防治提供了新的思路.NADPH氧化酶有可能会成为一个新的治疗靶点.
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NADPH氧化酶与动脉粥样硬化和缺血性脑血管病
活性氧(reactive oxygen species,ROS)导致的氧化应激在动脉粥样硬化发生和发展过程中起着重要作用,并与缺血性脑血管病发生相关.文章对NADPH氧化酶在动脉粥样硬化和缺血性脑血管病中的作用机制以及NADPH氧化酶抑制剂的神经保护作用进行了综述.
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上海地区汉族人群NADPH氧化酶p22phox编码基因CYBA-A930G多态性与高血压性脑出血的相关性
目的 研究上海汉族人群中NADPH氧化酶p22phjphox亚基-A930G基因多态性与高血压性脑出血的相关性.方法 纳入高血压性脑出血患者和正常对照者,采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性技术检测NADPH氧化酶p22phox亚基-A930G基因型和等位基因.结果 共纳入高血压脑出血患者128例和对照组151例.高血压脑出血组收缩压、舒张压、血糖和三酰甘油水平以及吸烟和饮酒的患者构成比显著性高于对照组(P均＜0.05),AA、AG和GG基因型(42.2％、44.5％、13.3％对63.6％、27.8％、8.6％;x2=12.757,P=0.002)以及A、G等位基因(64.5％、35.5％对77.5％、22.5％;x2=8.734,P=0.001)频率与对照组均存在显著性差异.多变量logistic回归分析显示,收缩压≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)[优势比(odds ratio,OR) 13.952,95％可信区间(confidence interval,CI)7.242 ～ 26.879;P＜0.001]、载脂蛋白A≥0.99 mmol/L(OR 3.139,95％ CI 1.012 ～9.733;P=0.048)和AG+GG基因型(OR 2.333,95％ CI 1.253 ～4.342;P=0.008)为高血压性脑出血的独立危险因素.结论 在中国上海地区汉族人群中,NADPH氧化酶p22phphox亚基-A930G多态性是高血压性脑出血的独立危险因素.
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NADPH氧化酶对培养的小鼠血管平滑肌细胞Toll样受体4介导的炎症表型的影响
目的 探讨NADPH氧化酶对培养的小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)介导的炎症表型中的作用.方法 分别采用NADPH氧化酶激动剂血小板衍生生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)和抑制剂夹竹桃麻素(apocynin)处理培养的C57BL/6J和TLR4-/-小鼠胸主动脉VSMC.分别采用荧光探针二氯荧光素双醋酸盐染色法检测VSMC内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,酶联免疫吸附法检测VSMC白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-o,TNF-α)表达,四甲基偶氮唑蓝染色法和Boyden小室检测VSMC的增殖和迁移.结果 PDGF-BB处理可显著增高C57BL/6J和TLR4-/-VSMC内ROS含量,而夹竹桃麻素可抑制ROS生成.PDGF-BB处理可使C57BL/6J VSMC IL-6[(52.69±3.49)ng/ml对(35.04±2.74) ng/ml,P=0.001]、IL-1β[(79.68±2.33) ng/ml对(62.38±0.54)ng/ml,P=0.000]和TNF-α[(218.35±5.42)ng/ml对(124.74±4.59) ng/ml,P=0.000]表达显著上调,增殖(1.69±0.53对1.04±0.40,P=0.000)和迁移(42.ll±4.05对1.69±0.53,P=0.000)能力均显著增强,而夹竹桃麻素预处理则可显著抑制VSMC IL-6[(42.11±4.05) ng/ml对(52.69±3.49) ng/ml,P=0.010]、IL-1β[(67.57± 1.36)ng/ml对(79.68±2.33) ng/ml,P=0.000]和TNF-α[(156.18±6.98) ng/ml对(218.35±5.42) ng/ml,P=0.000]表达以及增殖(1.23±0.42对1.69± 0.53,P=0.000)和迁移(42.11±4.05对52.69±3.49,P=0.000).TLR4-/-VSMC经PDGF-BB和夹竹桃麻素处理后,IL-6、IL-1β和TNF-α表达以及增殖和迁移能力均无显著变化.结论 NADPH氧化酶衍生的ROS参与了TLR4介导的VSMC炎症表型以及增殖和迁移,可能是其影响动脉粥样硬化发生和发展的重要机制.
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环孢素A通过下调NADPH氧化酶4改善慢性脑低灌注大鼠空间记忆能力
目的 观察环孢素A对慢性脑低灌注大鼠空间记忆的保护作用及其可能机制.方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、赋形剂组以及环孢素A干预小剂量组、中剂量组和大剂量组.采用双侧颈总动脉永久结扎法制备慢性脑低灌注模型.模型制作后第46天起,假手术组和赋形剂组给予橄榄油1 ml/d灌胃,小剂量组、中剂量组和大剂量环孢素组分别给予环孢素A 3 mg/kg、6 mg/kg和12 mg/kg灌胃,1次/d,连用14 d.采用Morris水迷宫实验检测空间记忆能力,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大脑皮质NADPH氧化酶4(NADPHoxidase 4,NOX4) mRNA表达,免疫组化染色和蛋白质印迹法检测大脑皮质NOX4蛋白表达.结果 Morris水迷宫实验显示,各环孢素组逃避潜伏期均显著短于赋形剂组(P均＜0.05).免疫组化染色显示,假手术组、赋形剂组、小剂量、中剂量和大剂量环孢素A组NOX4阳性细胞百分比分别为(4.43±0.37)％、(37.44±4.76)％、(18.05±2.91)％、(12.51±3.4)％和(11.06± 1.74)％ (F=262.021,P＜0.001),其中赋形剂组显著高于假手术组(P＜0.01),各环孢素A组均显著少于赋形剂组(P均＜0.01).RT-PCR显示,假手术组、赋形剂组、小剂量、中剂量和大剂量环孢素A组大脑皮质NOX4 mRNA相对表达水平分别为0.36±0.03、1.04±0.04、0.58±0.02、0.49±0.01和0.40±0.02(F=1 324.941,P＜0.001),各环孢素A组均显著低于赋形剂组(P均＜0.01).蛋白质印迹分析显示,假手术组、赋形剂组、小剂量、中剂量和大剂量环孢素A组大脑皮质NOX4蛋白表达水平分别为0.02 ±0.01、0.27±0.04、0.09±0.02、0.06±0.02和0.06±0.01(F=222.692,P＜0.001),各环孢素A组均显著低于赋形剂组(P均＜0.01).结论 环孢素A可能通过下调NOX4改善慢性脑低灌注大鼠空间记忆能力.
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热应激反应对中性粒细胞NADPH氧化酶活性及呼吸爆发功能的影响
目的:观察体外诱导热应激反应对中性粒细胞凋亡及呼吸爆发功能的影响.方法:将健康人中性粒细胞分成3份,1份作为对照组,其余2份应用热休克或氯化镉诱导热应激反应后与培养液共同孵育,并分别作为热休克组、氯化镉组.各组(n=18)于热应激反应诱导后0、2、3、4、6 h分别测定中性粒细胞热休克蛋白(HSP)70的表达、NADPH氧化酶活性及呼吸爆发功能.结果:热休克与氯化镉均可诱导热应激反应,细胞内HSP70表达增加;热应激反应抑制中性粒细胞NADPH氧化酶活性并降低其呼吸爆发功能.结论:热应激反应通过抑制中性粒细胞NADPH氧化酶活性减少O2-释放,提示热应激反应可能参与机体的抗炎作用机制.
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血管紧张素Ⅱ对鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞氧化应激的影响
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对多巴胺能细胞损伤的影响及其机制.方法:体外培养CATH.a细胞,鱼藤酮和(或)AngⅡ处理细胞24 h.采用噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞存活率,蛋白印迹技术检测血管紧张素Ⅱ-1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)和血管紧张素Ⅱ-2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,荧光定量PCR检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶亚基gp91岫和p67phox基因表达,免疫荧光检测gp91phox蛋白表达.结果:AngⅡ通过AT1R导致鱼藤酮诱导的CATH.a细胞存活率降低(P＜0.05).AngⅡ使NADPH氧化酶亚基gp91phox和p67phox表达增加(P＜0.05),并呈剂量依赖性促进细胞内ROS产生.AT1R阻滞剂氯沙坦和NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素使AngⅡ诱导的ROS产生减少(P＜ 0.01).结论:AngⅡ作用于AT1R,通过NADPH氧化酶产生ROS,促进鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤,参与帕金森病的发生与发展.
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关附甲素抗氧化和抗房颤作用
研究关附甲素(Guanfu base A,GFA)的抗房颤和抗氧化作用.大鼠尾静脉注射乙酰胆碱-氯化钙混合液(CaCl210 mg/mL,Ach 66 μg/mL),连续7d建立房颤模型.SD大鼠分为正常组、模型组、GFA治疗组(6 mg/kg,12 mg/kg)、胺碘酮(Amiodarone,Ami)治疗组(50 mg/kg)以及洛伐他汀(Lovastatin,Lov)治疗组(10 mg/kg).测定大鼠房颤持续时间和有效不应期(AERP),用实时荧光定量PCR方法和Western blot方法测定氧化应激相关基因表达,试剂盒测定抗氧化酶的活性.结果显示:与模型组相比,GFA (6 mg/kg,12 mg/kg,po)治疗4d后能缩短房颤持续时间,延长AERP,超氧化物歧化酶的活力提高,丙二醛含量明显下降.心房肌p22phox、p47phox、p67phox、gp91 phox表达下调,膜Rac-1与胞浆Rac-1比值显著下降,缝隙连接蛋白(connexin40)表达升高.提示GFA(6 mg/kg,12 mg,/kg)能有效抑制房颤引起的大鼠心房氧化应激损害,抑制房颤发生.
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CPU0213对内皮素-NADPH氧化酶介导H2O2损伤心肌细胞的改善作用
心肌细胞中NADPH氧化酶活性增强和内皮素系统过度激活,是造成心肌细胞损伤的重要机制.本文旨在探讨内皮素受体拮抗剂CPU0213能否通过抑制ET-NADPH氧化酶的过表达,减轻心肌细胞氧化损伤.将SD乳大鼠心肌细胞分成7组:对照组、H2O2组、PKA/PKC阻断剂H89/Bis干预组、,NADPH氧化酶阻断剂APO/DPI组和CPU0213治疗组.结果表明,H2 O2组钙调蛋白FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2表达明显下调,pPKCε/PKCε,NADPH氧化酶亚基及ETA R/ETBR明显上调,提示:H2O2激活NADPH氧化酶须依赖PKC活性,CPU0213通过抑制ET-pPKC-NADPH氧化酶通路逆转FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2的下调.
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缬沙坦对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞氧化应激水平的影响
目的 观察缬沙坦对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞氧化应激水平的影响.方法 高糖(20 mmol·L-1)体外培养大鼠肾小球系膜细胞,不同浓度缬沙坦(10-7,10-6,10-5和10-4 mol·L-1)干预,以RT-PCR技术检测细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基p22phox的mRNA表达的变化,并以DCFH-DA和HE标记细胞内活性氧(ROS),流式细胞术检测细胞内ROS相对浓度.结果 高糖时间相关性诱导系膜细胞超氧阴离子(O2-)与过氧化氢(H2O2)明显升高,并引起p22phox的mRNA表达显著上调,缬沙坦对高糖引起系膜细胞p22phox的mRNA表达增加有下调作用,明显降低细胞内O2-和H2O2浓度,并呈浓度依赖性.结论 缬沙坦抑制高糖引起肾小球系膜细胞氧化应激可能和下调p22phox 的mRNA表达有关.
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苯那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA、NOX4表达的影响
目的:观察苯那普利对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1、α-SMA、NOX4表达的影响,探讨苯那普利对肾间质纤维化的作用机制.方法:将54只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、苯那普利组,每组18只.苯那普利组予1.6 mg/kg苯那普利灌胃给药,每天1次,模型组、假手术组予10 mL/kg 0.9%氯化钠溶液灌胃,每天1次.模型组和苯那普利组大鼠均结扎左侧输尿管制备单侧输尿管梗阻肾纤维化模型.各组分别于造模第7、第14、第21天随机处死6只大鼠,取左侧肾脏组织做病理检测,Masson法观察肾纤维化程度,免疫组织化学染色检测肾组织TGF-β1、α-SMA、NOX4的表达,PCR检测NOX4的表达情况.结果:与假手术组比,模型组大鼠肾间质纤维化程度加重,且随着输尿管梗阻时间延长而加重(P<0.05);与模型组比较,苯那普利组大鼠肾间质纤维化程度减轻(P<0.05).免疫组织化学染色与PCR结果显示:与假手术组比,模型组肾组织TGF-β1、α-SMA、NOX4表达明显增多(P<0.05);与模型组比,苯那普利组大鼠TGF-β1、α-SMA、NOX4表达降低(P<0.05).结论:苯那普利能下调单侧输尿管梗阻大鼠肾小管TGF-β1、α-SMA、NOX4的表达,可能是其抗肾纤维化作用的机制之一.
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转化生长因子-β1在大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用及机制
目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)转分化中的作用及机制.方法 体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24h后,随机分为正常对照组(不加TGF-β1处理)及TGF-β1(10ng/ml)刺激组.采用RT-PCR法及Western blotting检测TGF-β1处理后不同时点NADPH氧化酶亚单位p67phox、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘素(E-cadherin)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)mRNA和蛋白的表达情况.结果 TGF-β1刺激RPMCs能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,p67phox、α-SMA、CollagenⅠmRNA和蛋白表达上调,呈现一定的时间依赖性.结论 TGF-β1诱导了大鼠腹膜间皮细胞转分化,NADPH氧化酶可能在其转分化过程中发挥重要作用.
