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NADPH氧化酶在酒精性肝病发病机制中的作用
酒精性肝病(ALD)的发病机制有利有人提出以氧应激和脂质过氧化为中心的"二次打击"假说[1],NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)与自由基形成有着密切关系,参与ALD的多个环节.
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依达拉奉注射液用于下肢皮肤撕脱伤患者清创术后的疗效观察
目的:研究依达拉奉对下肢皮肤撕脱伤患者的保护作用.方法:将因各种外伤导致下肢皮肤撕脱伤的住院患者62例随机分为治疗组与对照组.入院后,所有患者均在急诊下行清创缝合术,术后对照组仅进行常规的抗凝、抗炎、抗痉挛及营养支持对症治疗,治疗组在此基础上加用依达拉奉注射液30 mg(加入生理盐水250 ml中静脉滴注,30 min滴完,每日1次,14d为一个疗程).所有患者均在术后24 h内给药.分别测定患者血浆中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶、蛋白质羰基化(PC)、超氧化物歧化酶(SOD)在再灌注前、后的含量变化,记录两组患者进行清创缝合术后张力水疱面积、瘀血斑面积、皮肤坏死面积、经换药后伤口逐渐愈合例数、皮肤坏死例数及深度、经游离植皮术后痊愈例数.结果:下肢皮肤撕脱伤患者NADPH氧化酶、PC的含量在使用依达拉奉后升高,SOD的含量在使用依达拉奉后降低；治疗组与对照组比较,再灌注后24h及14d后的血液中NADPH氧化酶、PC、SOD的含量差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者张力水疱面积、瘀血斑面积、皮肤坏死面积、经清创换药后伤口逐渐愈合例数、皮肤坏死例数及深度、经游离植皮术后痊愈例数差异有统计学意义(P＜0.05).结论:依达拉奉能减轻下肢皮肤撕脱伤患者的缺血再灌注损伤,提高撕脱皮肤的存活率.
关键词： 依达拉奉 外周神经缺血再灌注损伤 自由基 NADPH氧化酶 蛋白质羰基化 -
扇贝糖胺聚糖对OX-LDL诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用机制研究Δ
目的：研究扇贝糖胺聚糖（SS-GAG）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤的抑制作用机制。方法：试验分为阴性对照组、模型组与SS-GAG高、中、低浓度（质量浓度分别为200、100、50 mg/L）组，后3组以不同质量浓度SS-GAG培养细胞12 h后，以50μmol/L氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）培养细胞24 h。以MTT法检测细胞活力；测定乳酸脱氢酶（LDH）活性；流式细胞仪测定活性氧（ROS）水平；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）mRNA表达；Western blot测定NOX4蛋白表达。结果：与阴性对照组比较，模型组细胞活力减弱，LDH活性增强，ROS水平升高，LOX-1 mRNA表达增强，NOX4蛋白表达增强，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，SS-GAG高、中、低浓度组细胞活力增强，LDH活性减弱，ROS水平降低，LOX-1 mRNA表达减弱，NOX4蛋白表达减弱，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：SS-GAG有一定的保护血管内皮细胞作用，其机制可能与经LOX-1/NOX4途径抑制ROS产生、减轻氧化应激损伤有关。
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氧化应激标志物在房颤患者心房结构重构中的变化及意义
目的 通过分析多种氧化应激标志物在血清及组织中的动态变化,观察其在心房结构重构中的表达,探讨房颤(atrial fibrillation,AF)的发生机制.方法 选择我中心44例2014年2-5月行单纯二尖瓣置换手术的风湿性心脏病患者,根据病史及术前动态心电图记录分为2组:持续性房颤(AF)组26例,窦性心律(SR)组18例.术中取部分右心耳组织,行Masson染色观察纤维化情况,采用免疫组化、免疫荧光染色法观察右心耳组织NOX2蛋白表达,用ELISA法测定右心耳组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、晚期氧化蛋白产物(advanced oxidative protein products,AOPP)浓度以及血清中ROS、AOPP含量.结果 AF组心房组织中MDA[(15.41±1.69) μmol/mg]、SOD[(13.32±1.25) μmol/mg]、ROS[(18.53±3.47)μmol/mg]、AOPP[(29.69 ±2.09) μmol/mg]含量与SR组MDA[(11.46±1.83) μmol/mg]、SOD[(10.65±1.15) μmol/mg]、ROS[(13.65 ±3.29)μmol/mg]、AOPP[(21.94±1.94) μmol/mg]比较差异有统计学意义(P＜0.05),AF组血清中ROS含量[(34.6 ±2.61) μmol/L]明显高于SR组[(17.8±1.03) μmol/L],2组患者血清中AOPP含量差异无统计学意义(P＞0.05).与SR组相比,AF组右心耳组织胶原纤维增生明显,NOX2蛋白表达呈强阳性.结论 房颤时发生以间质纤维化改变的心房结构重构,氧化应激参与了房颤发生和结构重构过程.
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熊果酸对肝星状细胞NADPH氧化酶-Hedgehog信号通路的影响
目的 探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的NADPH氧化酶(NOX)-Hedgehog(Hh)信号通路的影响.方法 将处于对数生长期的HSC-T6细胞分为6组:正常对照组、瘦素组(100 ng/mL)、熊果酸自身对照组(50 μmol/L)、DPI自身对照组(20 μmol/L)、熊果酸干预组(瘦素+熊果酸)、DPI干预组(瘦素+DPI).在药物作用12 h后,提取总RNA,采用RT-PCR法检测Shh、Smo、Gli1/2的表达;药物作用HSC-T6细胞24 h后,提取总蛋白,采用Western blot分别检测Rac1和Gli2的表达;药物作用12、24、48 h后,采用MTT法检测HSC-T6细胞的增殖情况.结果 RT-PCR分析显示,瘦素刺激HSC-T6细胞12 h后Smo mRNA表达较正常对照组升高(P＜0.05);Shh、Gli2 mRNA表达稍高于正常对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05);熊果酸干预后Shh、Smo和Gli2 mRNA表达明显低于瘦素组及正常对照组(均P＜O.05);瘦素对HSC-T6细胞Gli1 mRNA的表达无影响,而熊果酸及DPI干预也不影响HSC-T6细胞Gli1mRNA的表达.瘦素刺激HSC-T6细胞24 h后,Rac1和Gli2蛋白的表达较正常对照组升高(P＜0.01);熊果酸干预后Rac1和Gli2蛋白的表达明显低于瘦素组(P＜0.01).MTT分析显示瘦素促进HSC-T6细胞增殖,熊果酸干预12 h后HSC-T6细胞的生长抑制率均显著高于瘦素组(P＜0.01),随着作用时间延长,熊果酸对细胞生长的抑制作用进一步增强.结论 熊果酸能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞Hh信号通路Shh、Smo、Gli2 mRNA和Gli2蛋白表达.熊果酸通过抑制NOX亚基Rac1蛋白表达进而抑制Hh信号通路可能是它抑制肝星状细胞生长增殖的机制之一.
关键词： 熊果酸 肝星状细胞 Hedgehog信号通路 NADPH氧化酶 Rac1 -
白藜芦醇对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用
目的 探讨白藜芦醇对高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生上皮-间充质细胞转分化(epitheliamesenchymal transition,EMT)的抑制作用及机制.方法 体外培养HK-2细胞,分为正常对照组(NG,5.5 mmol/L)、高糖组(HG,30 mmol/L)、白藜芦醇组(RES,10 μmol/L)、高糖(30 mmol/L)+白藜芦醇(10 μmol/L)组(HG+ RES)、二苯基碘(diphenyleneiodonium)组(DPI,10 μmol/L)、高糖(30 mmol/L)+ DPI(10 μmol/L)组(HG+ DPI).倒置显微镜下观察高糖对细胞形态的影响.免疫荧光检测上皮细胞标志物波形蛋白(cytokeratin)及间充质细胞标志物波形蛋白(vimentin)的表达变化,Western blot检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、NADPH氧化酶亚基(NOXs)的表达变化,DCFH-DA法检测细胞内ROS水平.结果 与正常对照组相比,高糖处理后的HK-2细胞失去原有形态,呈长梭形改变,上皮细胞标志物cytokeratin及E-cadherin表达明显减少,间充质细胞标志物vimentin及α-SMA表达明显升高(P＜0.01),同时NADPH氧化酶亚基NOX1、NOX4表达明显升高(P＜0.01),NOX2无明显变化,ROS产生明显增多[(1 723.82±303.97) vs(2 579.36±353.76),P＜0.01],而加入白藜芦醇或NADPH氧化酶抑制剂DPI预孵育后,均能抑制高糖诱导的HK-2细胞EMT(P ＜0.01)和ROS[(1 803.36±199.54)或(1 837.45±266.83) vs(2 579.36±353.76),P＜0.01]产生增多,并且白藜芦醇可以明显抑制高糖诱导的NOX1以及NOX4表达升高(P＜0.01).结论 白藜芦醇可能通过抑制NADPH氧化酶降低肾小管上皮细胞ROS生成,进而抑制高糖状态下HK-2细胞EMT的发生.
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C242T基因多态性与大动脉粥样硬化型脑梗死的相关性研究
目的 研究还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与上海松江地区汉族人群大动脉粥样硬化型脑梗死(LAACI)的相关性.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、基因测序等技术对310例上海松江地区汉族人群LAACI患者(LAACI组)和330例对照组的C242T基因多态性位点进行基因型、等位基因频率检测,分析C242T基因多态性与LAACI的相关性.结果 LAACI组丙二醛(MDA)水平、NADPH氧化酶活性明显高于对照组(P＜0.05);LAACI组吸烟率、饮酒率、高血压率、收缩压、舒张压,以及血糖、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化高密度脂蛋白(ox-HDL)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平均比对照组高(P＜0.05),HDL-C水平比对照组低(P＜0.05);LAACI组较对照组有更高的杂合子(CT)+纯合子(TT)基因型频率及T等位基因频率(P＜0.05);Logistic回归分析显示,吸烟、血糖、高血压、收缩压、舒张压、脂蛋白a[Lp(a)]、ox-HDL水平、MDA水平、NAD-PH氧化酶活性、基因型是LAACI的独立危险因素.结论 NADPH氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与LAACI有相关性,可能是高血压、吸烟和脂氧化之外的另一个独立危险因素.
关键词： NADPH氧化酶 C242T基因多态性 动脉粥样硬化 脑梗死 -
p47phox介导活性氧产生与疾病的关系
活性氧（reactive oxygen species）是指氧自由基和氧化作用较强的非自由基含氧产物。主要包括超氧阴离子（· O2－）、羟自由基（· O H ）、过氧化氢（H2 O2）和单线态氧（1 O2）等［1］。活性氧在机体的免疫过程和细胞信号转导中起着重要的作用。然而当活性氧过多积聚，超过抗氧化酶系统的清除能力，就会产生氧化应激。引发脂质过氧化反应损伤细胞膜、引起蛋白质变性、酶活性丧失等损害作用［2‐3］；诱导或加重心血管疾病、高血压、肿瘤、炎症及肺部疾病的发生和进展［4］。机体有多种酶体参与活性氧的生成，如烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ nico‐tinamide adenine dinucleotide phosphate ，NADPH ）氧化酶（NADPH oxidase ，NOX）、线粒体呼吸链复合酶、黄嘌呤氧化酶、细胞色素P450、一氧化氮合成酶等［1，3］。其中 NADPH氧化酶是体内活性氧生成的重要来源。而 p47phox 对于激活NADPH氧化酶起着至关重要的作用。本文主要从 p47phox介导活性氧产生及与疾病的关系方面的进展作一综述。
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心肌缺血再灌注损伤大鼠中20-HETE对ROS生成及NADPH氧化酶活性的影响
目的探讨20-羟二十烷花生四烯酸（20-HETE）加重大鼠离体心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的作用机制，即20-HETE对活性氧簇（ROS）生成及还原型辅酶Ⅱ（NADPH）的影响。方法将78只雄性Wistar 大鼠随机分为正常对照组（Con组）、缺血再灌注模型组（IR组）、IR+不同剂量20-HETE（10、30、50 nmol/L）组、IR+20-HETE（50 nmol/L）+夹竹桃麻素（APO）组，每组13只。建立大鼠离体心脏MIRI模型，缺血前在灌流液中加入相应剂量的20-HETE。采用Power-Lab/8sp生理记录仪实时监测心肌血流动力学指标；氯化三苯基四氮唑（TTC）法检测心肌梗死面积；二氢乙锭（DHE）荧光探针法检测心肌组织荧光强度表达ROS水平；Western blotting检测NADPH氧化酶亚基p47phox磷酸化水平；细胞色素 C还原法检测过氧化物生成的产物量表达 NADPH 氧化酶活性。结果20-HETE 剂量依赖性地加重了再灌注后心肌损伤，IR+不同剂量20-HETE组大鼠心肌血流动力学指标较IR组显著下降，心肌梗死面积较IR组显著增加，ROS的生成较IR组进一步增加，差异均有统计学意义（P<0.01或0.05）。而灌流液中加入NADPH 氧化酶抑制剂APO后，ROS显著减少，与IR+20-HETE（50 nmol/L）组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。与IR组比较，IR+20-HETE（50 nmol/L）+APO 组大鼠心脏中p47phox亚基磷酸化水平及NADPH氧化酶活性均有显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。结论20-HETE可通过激活NADPH氧化酶诱导过量ROS的生成，加重MIRI。
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FMLP刺激HL-60细胞NADPH氧化酶激活的信号转导途径
目的澄清中性粒细胞中[Ca2+]i及某些激酶在NADPH氧化酶激活中的作用和NADPH氧化酶激活的信号转导途径.方法利用中性粒细胞样HL-60细胞,研究[Ca2+]i和某些激酶对fMLP刺激NADPH氧化酶激活的影响.结果用10 μmol/L BAPTA-AM去除[Ca2+]i后使O-2生成明显减少;8 μmol/L的PKC抑制物GF109203x显著地抑制了O-2产生;50 μmol/L的p38抑制物SB203580、50 μmol/L的ERK抑制物PD098059和0.1 μmol/L的PI3K抑制物Wortmannin使O-2产生受到不同程度抑制;PKC、PI3K、p38和ERK激活对[Ca2+]i升高没有影响;[Ca2+]i、PKC和PI3K对p38激活有一定作用,而ERK和Akt激活主要受PI3-K的调控.结论试验说明[Ca2+]i依赖途径(PKC)和[Ca2+]i非依赖途径(PI3K、p38和ERK)对NADPH氧化酶激活都起着重要作用.
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埃索美拉唑抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO和PGE2
目的 研究埃索美拉唑对LPS诱导RAW 264.7小鼠巨噬细胞一氧化氮(nitric oxide,NO)和前列腺素E2(prostaglandinE2,PGE2)的影响.方法 体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,LPS刺激前先用15 μg/ml埃索美拉唑处理2h,ELISA检测NO和PGE2的产生.荧光分光光度计检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生；RT-PCR检测P-ATP的表达情况；比色法测定NADPH氧化酶活性.结果 埃索美拉唑能显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO和PGE2,但对P-ATP酶的表达无明显影响.此外,埃索美拉唑也能显著抑制ROS的产生,并抑制NADPH氧化酶活性.NADPH氧化酶抑制剂DPI可减少NO和PGE2水平,ROS抑制剂NAC处理能抑制NO的产生.结论 埃索美拉唑通过抑制NADPH氧化酶活性以及ROS产生从而抑制LPS诱导RAW 264.7细胞分泌NO.虽然埃索美拉唑也能抑制PGE2产生,但与ROS关系不大.
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溶酶体膜蛋白-2抗体诱导中性粒细胞胞外捕网形成的实验研究
目的 研究溶酶体膜蛋白-2抗体(LAMP-2-antibody)诱导中性粒细胞胞外捕网形成(NETosis)的作用,为进一步探讨这种新型细胞死亡模式在系统性小血管炎中的作用及机制奠定基础.方法 采用PolymorphprepTM进行密度梯度离心法分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞,抗LAMP-2抗体刺激中性粒细胞,以及通过NADPH氧化酶抑制剂二甲苯基碘(DPI)阻断活性氧簇的产生,电镜、免疫荧光观测胞外捕网的形成,激光共聚焦检测自身抗原LAMP-2、PR3、MPO的表达.结果 LAMP-2抗体促进中性粒细胞胞外捕网NETs形成,自身抗原MPO、PR3及LAMP-2包含在NETs内,抑制NADPH氧化酶的活性可以阻断NETs形成.结论 LAMP-2抗体可能通过诱导中性粒细胞异常死亡,释放内源性危险信号,激活自身免疫反应等来维持血管炎的恶性持续状态.
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Roux-en-Y胃旁路术对2型糖尿病大鼠肾脏早期损害的保护作用
目的 探讨胃转流术对2型糖尿病大鼠肾脏早期损害的保护作用及其可能的作用机理.方法 采用高脂饮食加腹腔注射小剂量(35mg/kg)链脲佐菌素(streptozocin,STZ)方法建立2型糖尿病大鼠模型.将造模成功的糖尿病大鼠按数字表法随机分为3组:糖尿病对照组(n=8)、假手术组(n=8)和Roux-en-Y胃旁路手术组(n=14);另取正常SD大鼠作为正常对照组(n=8).分别于术前和术后8周检测各组大鼠的空腹血糖、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和游离脂肪酸(FFA)水平;于术前和术后4及8周测定各组大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr);于术前和术后8周测定各组大鼠24 h尿微量白蛋白和尿8-羟基脱氧鸟酐;于术后8周取肾组织进行病理组织学观察,计算肾重指数、肾小球平均截面积(MGA)及肾小球平均体积(MGV),并采用免疫组化方法检测肾组织纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(CoⅣ)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 (NOX4)和Bcl-2蛋白的表达.结果 Roux-en-Y胃旁路术能显著降低糖尿病大鼠血糖、血脂、肾重指数、MGA和MGV (P＜0.05),改善肾脏病理形态和肾脏功能(P＜0.05),减少FN及CoⅣ蛋白的表达,降低TGFq1、NOX4和ICAM-1在肾脏皮质的表达,同时增加Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论 胃旁路术可改善糖尿病大鼠的肾脏功能,改善其病理损害,其机理可能与抑制TGF-β1、NOX4和ICAM-1蛋白的表达和上调Bcl-2蛋白的水平有关.
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NADPH氧化酶及其检测方法的研究进展
NADPH氧化酶是一种与胞浆膜相关的多酶复合物,主要分布在胚层来源的细胞中,其以胞质NADPH为电子供体,催化胞外的O2生成超氧阴离子(O2-).NADPH氧化酶早在吞噬细胞中被发现,由 gp91phox、p22phox、p47phox、p67phox、p40phox和Rac 6种亚基组成.后来在非吞噬型细胞,如成纤维细胞(fibroblasts)、内皮细胞(endothelial cells)、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscles,VSMC)、肾小球系膜细胞(mesangial cells)、肾小管细胞(renal tubular cells)中发现有类似吞噬细胞型的NADPH氧化酶.由于NADPH氧化酶生成的低量ROS可作为第二信使影响氧化还原敏感信号通路(redox-sensitive signal transduction pathways).
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NADPH氧化酶与心血管疾病
活性氧类是生物的有氧代谢的产物，有着强氧化和还原的性质，其在体内水平受抗氧化剂的调节而维持平衡。心血管系统中，活性氧类主要来源于NADPH氧化酶，其包含了7种亚型。生理状态下的活性氧参与了细胞功能的维持，而病理状态下，大量产生的活性氧则对核酸、蛋白、脂等产生氧化破坏。 NADPH氧化酶与心血管疾病密切相关，包括心衰，缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化，高血压等。 NADPH氧化酶有着复杂的调控机制和多种检测方法。抗氧化治疗在临床研究中收效甚微，而NADPH氧化酶抑制剂的应用逐渐受到关注。这篇综述将系统阐述活性氧类及NADPH氧化酶对心血管的影响以及临床治疗指导意义，以及NADPH氧化酶的调节和检测方法。
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血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的 观察血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧物质信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法 用培养的二至四代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为标本;以四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别测定细胞增殖率、细胞内活性氧及p22phox蛋白mRNA的表达.结果 ①加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、活性氧物质量、p22phox蛋白mRNA的表达均明显高于空白对照组,差异统计学意义(P＜0.05).②细胞增殖与活性氧物质的生成量、p22phox蛋白mRNA的表达成明显正相关关系,相关系数分别为0.92、0.967.结论 血管紧张素Ⅱ在浓度为10-6mol/L时,促进人肠系膜动脉平滑肌增殖、细胞内活性氧物质的生成、细胞内的p22phox蛋白的表达,推测血管紧张素Ⅱ促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用部分机制是通过血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧通路来实现.
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NADPH氧化酶源性ROS在乳鼠心肌细胞肥大中的作用
目的 探讨NADPH氧化酶来源的活性氧(ROS)在TNF-α诱导乳鼠心肌细胞肥大中的作用.方法 采用体外乳鼠心肌细胞培养,给予TNF-α、APO单独或联合作用细胞24h,以BCA法测定心肌细胞蛋白合成,共聚焦显微镜测量心肌细胞ROS含量,RT-PCR法测定心肌细胞心钠素ANP mRNA的表达.结果 TNF-α可明显增加心肌细胞蛋白合成,心肌细胞体积增大,ROS生成增多,ANP mRNA表达水平显著增加,以上作用可被APO明显抑制.结论 TNF-α通过增加心肌细胞NADPH氧化酶来源的ROS生成,促进心肌细胞肥大.
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20-HETE对大鼠心肌缺血再灌注损伤中NADPH氧化酶活性及ROS生成的影响
目的 探讨20-HETE加重大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的作用及机制.方法 雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(Con组),缺血再灌注模型组(IR组),IR+ 20-HETE合成酶抑制剂(HET0016)组,Con+ HET0016组,每组12只,通过Langendorff灌流系统建立大鼠离体心肌缺血再灌注模型,全心缺血35 min再灌注40 min,PowerLab/8P系统实时监测心肌力学指标;灌流结束后取心肌组织TTC法检测心肌梗死面积;DHE荧光探针法检测活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;Western blot检测NADPH氧化酶亚基p47 phox磷酸化水平;细胞色素C的还原法检测NADPH氧化酶活性.结果 离体心脏缺血再灌注后,加入20-HETE合成酶抑制剂HET0016(1μmol/L)后明显改善了IR导致的心肌力学指标下降,LVDP由IR组的(48.6±3.4)％升至(71.7±3.5)％,+dP/dtmax由(51.9±2.1)％升至(69±3.2)％,-dP/dtmax由(47.1±3.6)％升至(64.1±3.8)％(P ＜0.05);IR+ HET0016组心肌梗死面积比IR组减小了37.2％ (P ＜0.05).DHE荧光探针检测发现IR+ HET0016处理组心肌组织中ROS含量比IR组降低了45.8％ (P ＜0.05);后通过对NADPH氧化酶活性检测发现,HET0016显著减少了IR引起的NADPH氧化酶p47phox亚基磷酸化水平及全酶活性的升高(P＜0.05).结论 20-HETE通过激活NADPH氧化酶诱导过量ROS的生成,加重心肌缺血再灌注损伤.
关键词： 20-羟二十烷花生四烯酸 大鼠 心肌缺血再灌注损伤 活性氧簇 NADPH氧化酶 -
转录因子CHOP参与了同型半胱氨酸诱导的活性氧物质产生
目的 探讨在血管平滑肌细胞(VSMC)中,同型半胱氨酸诱导活性氧物质(ROS)产生的途径.方法 用[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞DNA合成率;用DCF-DA荧光探针测定细胞内ROS;CHOP基因表达升高测定采用RT-RCR.结果 (1同型半胱氨酸诱导VSMC的DNA合成增加,这与和ROS水平升高有关;(2同型半胱氨酸激活的NADPH氧化酶;抑制该酶活性可以显著地抑制细胞内ROS产生;(3)同型半胱氨酸上调VSMC的CHOP基因表达;(4)在没有同型半胱氨酸存在下,通过转染过表达CHOP基因可诱导细胞内ROS水平升高.结论 NADPH氧化酶激活和CHOP基因表达上调都参与了同型半胱氨酸诱导的ROS产生.
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烟曲霉感染时NADPH氧化酶通过诱导活性氧活化巨噬细胞自噬
目的 研究NADPH氧化酶(NOX)参与烟曲霉孢子诱导巨噬细胞自噬及其作用机制.方法 取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为3组:以烟曲霉孢子刺激的处理组、烟曲霉孢子联合NOX抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)的处理组和无处理的空白组.细胞作用2h后荧光显微镜观察细胞内二氯荧光黄亮度以检测活性氧(ROS)水平,免疫印迹法检测微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达量,免疫荧光技术观察LC3的表达与定位.结果 烟曲霉孢子刺激后RAW264.7细胞的ROS与LC3BⅡ表达水平显著升高,同时LC3呈斑点状聚集并与烟曲霉孢子共定位;以DPI抑制后ROS与LC3 BⅡ表达量与空白组相比无明显变化,并且LC3在细胞内弥散分布.结论 烟曲霉感染时NOX通过产生ROS活化巨噬细胞自噬.
