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尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估
本文就国产尿液NAG活力连续监测法试剂盒进行了评价.该试剂盒酶促反应延迟时间应选为3 min,监测时间选择60 s.线性0～150 U/L,r＝0 .99 98,线性误差小于7%.重复实验,水平Ⅰ批内为26.3±1.1 U/L,CV 4.2%,随机误差8. 2 %;批间s 1.77 U/L,CV 6.7%,随机误差13.2%.水平Ⅱ批内91.3 U/L±2.43 U/L,CV 2 .6%,随机误差5.2%;批间s 4.44 U/L,CV 4.9%,随机误差9.5%.平均回收率99.5% . 测定体检健康者尿样60例,经统计学分析,结果呈偏态分布,男女间差异不显著(P＞0.05) ,单侧95%上限为2.4 U/mmol Cr(37℃).
关键词： 尿液 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 连续监测法 -
566名健康人血清谷氨酰氨基转移酶测定结果及参考区间
血清谷氨酰氨基转移酶(ALT)是临床评价肝功能的一项重要指标,传统的赖氏法参考区间为＜40赖氏单位.目前很多单位采用酶偶联连续监测法,将该法的参考区间定为＜60 U/L.为使检验人员和临床医师更多了解ALT两种测定方法参考区间的差异,每个实验室都有必要确定自己的ALT参考区间.为此,本研究用日立7060全自动生化分析仪对本院566名健康人员进行血清ALT测定.
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半自动生化仪用连续监测法测定出现非线性原因探讨
我院使用威图半自动生化仪,使用北京中生公司试剂,用连续监测法测定ALT、AST、γ-GT、AKP等项目,工作原理是每2秒监测一次,然后将△A/2s换算为△A/min,取其均值计算结果(F×△A).
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以对乙酰基苯基磷酸二钠盐为底物的碱性磷酸酶连续监测法
目的 合成对乙酰基苯基磷酸二钠盐(PAP-PNa2),并建立以PAP-PNa2为底物的碱性磷酸酶(ALP)测定方法.方法 在半自动生化分析仪上采用连续监测法,建立实验参数.结果 本法测定对乙酰基酚(PAP)大吸收峰为325 nm;ALP的Km=0.376mmol/L;340 nm时PAP的ε为23 390 L·mol-1·cm-1,AMP缓冲液浓度为0.438 mol/L时,适底物浓度5.0mmol/L,适pH值为10.4,延迟期60 s,线性反应期15 min;线性范围为0～1 110 U/L.Hb<115.62 mg/L及胆红素浓度达171.0μmoL/L对测定结果无影响.本法总ALP的参考范围为:男63.1～118.3 U/L,女52.5～89.0 U/L.结论 该方法重复性好,线性反应期长,干扰因素少,适用于自动生化分析.
关键词： 对乙酰基苯基磷酸二钠盐 碱性磷酸酶 连续监测法 -
用新底物DCAP-P检测酸性磷酸酶方法的建立
目的合成酸性磷酸酶(ACP)的底物2,6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸(DCAP-P),并建立以DCAP-P为底物的一种新的ACP测定方法.方法在BTS-310型半自动分析仪和TBA-40FR型全自动生化分析仪上研究连续监测法,建立试验参数.结果本法测定DCAP吸收峰为326 nm;ACP的Km=0.139 mmol/L;340nm时DCAP的摩尔消光系数为14 440 L·mol-1·cm-1,缓冲液浓度0.1 mol/L,适pH5.4,底物浓度2.0 mmol/L,延滞期60 s,线性反应期15 min;线性范围为0～1 188 U/L;血红蛋白＜115.62 mg/L及胆红素对测定结果无影响;本法总ACP与PAP(前列腺酸性磷酸酶)的参考值范围分别为12.58～19.42U/L和2.52～9.04U/L.结论此方法重复性好,线性反应期长,线性范围广,干扰因素少,适用于自动化分析仪.
关键词： 2 6-二氯-4-乙酰基苯基磷酸 合成 酸性磷酸酶 连续监测法 -
全自动酶偶联法测定腺苷脱氨酶
目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%～5.4%,批间CV为4.7%～6.4%,回收率为99.7%.胆红素＜136.8μmol/L,血红蛋白＜3.5g/L,抗坏血酸＜284μmol/L和三酰甘油＜9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.
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血清胰弹性蛋白酶-I连续监测法实验探讨
目的建立简便、快速、准确的方法检测血清胰弹性蛋白酶-I(pancreatic elastase-I,PE-I).方法选择高敏感底物琥珀酰-(L-丙氨酸)3对-硝基苯胺(Suc-Ala-3pNA),在405 nm处测定产物吸光度的变化,得出PE-I的活性.结果适底物浓度为5.0 mol/L,Km为0.46 mmol/L,适pH为8.0,批内CV 2.81%,批间CV 4.59%,线性可达300 U/L.30例健康体检者此酶活性为(13±3) U/L,26例临床已确诊轻型胰腺炎(单纯水肿型)和18例重型胰腺炎(出血坏死型)此酶活性分别为(78±31) U/L和(139±45)U/L,胰腺炎各组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),单纯水肿型和出血坏死型胰腺炎比较有显著性差异(P＜0.01).PE-I诊断急性胰腺炎敏感性85%,特异性93%,阳性预期值94%,阴性预期值85%.结论该方法简便、快速、准确、灵敏,可用于自动化分析.
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2-氯-4-硝基苯-β-D-半乳糖-麦芽二糖苷作底物测定淀粉酶总活性
目的建立2-氯-4-硝基苯-β-D-半乳糖-麦芽二糖苷(GalG2-CNP)作底物测定淀粉酶的方法.方法用连续监测法对pH值,Km值及适底物浓度等反应条件进行实验研究,并对建立的方法进行评价.结果用双试剂连续监测法;试剂Ⅰ:含KSCN 200 mmol/L,CaCl2 6.7 mmol/L,NaCl 400 mmol/L;试剂Ⅱ:含GalG2-CNP 20 mmol/L;均用pH6.0 50 mmol/L MES缓冲液.线性范围达1200 U/L批内CV=2.77%,批间CV=3.56%,与参考方法(EPS-G7)有良好的相关性.结论本法操作简便,结果准确,可用于常规分析.
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连续监测法测定腺苷脱氨酶
目的建立连续监测法测定腺苷脱氨酶的方法。方法用连续监测法对pH值、腺苷浓度等反应条件进行实验研究，并对所建立的方法进行评价。结果用双试剂连续监测法；试剂Ⅰ:含α-酮戊二酸6 mmol/L,NADH 0.35 mmol/L,ADP 0.8 mmol/L,EDTA-Na2 0.1 mmol/L,谷氨酸脱氢酶1000 U/L；试剂Ⅱ:腺苷12 mmol/L;均用磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L);pH 7.2。线性范围达97 U/L,批内 CV=4.90%,批间CV=6.53%。与波氏显色法有良好的相关性(r=0.9902)。结论本法操作简便，结果准确，可用于常规分析。
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脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素
目的建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法.方法对pH、2-酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究,并对建立的方法进行评价.结果用双试剂连续监测法,试剂Ⅰ:100 mmol/L N,N-二乙醇胺基乙酸缓冲液(pH 8.80),含2-酮基异乙烯酸钠3.0 mmol/L、NADH 0.3 mmol/L、亮氨酸脱氢酶2.0 kU/L.试剂Ⅱ:试剂Ⅰ中加入脲酶70 kU/L.本法线性范围血清0.5～150 mmol/L,尿液8.0～650 mmol/L.血清和尿液的平均回收率分别为102.1%和101.5%.血清批内和批间平均CV分别为1.02%和1.70%;尿液批内平均CV为1.98%.本法(Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法(X)对比相关良好(血清Y=0.992X+0.040,r=0.993;尿液Y=0.990X+0.61,r=0.991).胆红素＜325 μmol/L、血红蛋白＜5 g/L、抗坏血酸＜800 μmol/L、三酰甘油(TG)＜7.5 mmol/L和NH+4＜0.5 mmol/L对测定无明显干扰.结论本法简便、准确、线性范围广,可用于常规自动分析.
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自动分析中高酶样品测定的结果核查
生化自动分析仪使用多点连续监测速率法测定酶的活性。这类仪器均通过对信号(吸光度)——时间反应曲线的监查，控制分析质量，一般设有检查反应的线性和监测底物耗尽的参数。但能使用通用试剂的仪器没有预先固定的参数设置，需要使用人员根据试剂和方法的不同自己去设置参数，如果未设置或设置不当会造成错误结果。虽然各家仪器设计的具体方法不同，但基本原理是一致的。本文以东芝(TOSHIBA)公司生产的TBA-40 FR生化自动分析仪测定ALT为例，介绍有关的参数设置方法。
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一种脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性检测方法的性能验证
目的 验证一种新的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)活性测定试剂的方法学性能.方法 验证苏州博源公司的Lp-PLA2检测试剂的正确度、精密度、线性范围、功能灵敏度(LOQ)、分析灵敏度(LOD)、携带污染率和参考区间,用上海德赛公司Lp-PLA2试剂作为参比试剂,对临床样品进行评价.结果 Lp-PLA2不同浓度水平血清样品的回收率分别为108.7％、96.1％、98.4％;Lp-PLA2低(394.1 U/L)、中(785.3 U/L)、高(1048.7 U/L)3个浓度样品的变异系数(CV)分别为0.90％、1.90％、2.30％;线性范围为44.4～1660 U/L(R2=0.9997);LOQ为4.22 U/L,LOD为0.89 U/L;携带污染率绝对值<3％;参考区间满足厂商声明的参考区间(≤670 U/L).收集体检者血清样品(n=40),分别用苏州博源公司(实验方法,Y)与上海德赛公司(参比方法,X)的Lp-PLA2试剂检测,Deming回归方程为Y=1.016X+3.90,r=0.987.结论 苏州博源公司Lp-PLA2试剂盒性能验证满足要求,样品检测结果与上海德赛公司试剂具有一致性.
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红细胞铜锌超氧化物歧化酶的连续监测法
采用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶系统与色原偶联,研制了红细胞铜、锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)测定试剂,并在Monarch 2000 Plus自动生化分析仪上,改进SO D活性测定的连续监测法.结果显示,该法批内CV 2.5%,批间CV 4.0%,回收率9 0%～105%,平均回收率98.5%;在标准品0.25～4.00 U/ml范围内呈线性(r≥0.990) ,方法精密度和准确性均佳.同时还可应用于手工操作的固定时间法.
关键词： 铜、锌超氧化物歧化酶 连续监测法 固定时间法 -
葡萄糖脱氢酶连续监测法的研究
目的:建立葡萄糖脱氢酶连续监测法,优化其检测条件. 方法:按酶连续监测法测定要求,对克隆的枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶表达酶液进行测定,确定反应体系的底物浓度、适pH、反应温度、延滞时间、测定时间、检测范围等. 结果:以葡萄糖和NAD+为底物时,用连续监测法检测葡萄糖脱氢酶是可行的.当葡萄糖、NAD+的终浓度分别为100 mmol/L和2 mmol/L时,在反应pH 7.4,37℃,延滞时间30 s,测定时间60 s等条件下,检测上限可达10 000 U/L. 结论:连续监测法能用于测定葡萄糖脱氢酶,快速简便,结果可靠.
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两种方法测定丙氨酸氨基转移酶的偏差评估
依据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件方案,每天随机选取临床标本8份,分别用两种方法测定样本丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性单位,共测定6 d,记录结果,并以酶活性连续监测结果(X)为比较对象,对干化学法测定结果(Y)进行评估.两种测定结果的回归方程为Y=0.9792X+1.4893,相关系数r2=0.9956.当ALT浓度为10 U/L、40 U/L、100 U/L时,干化学法的相对偏倚分别为13.11%、1.63%和0.67%.结果表明:酶活性连续监测法与干化学法在测定丙氨酸氨基转移酶活性时,有很好的相关性,但测定结果的相对偏倚随浓度下降而增加,因此,建议各临床实验室对不同方法建立不同的参考范围.
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血清谷氨酸脱氢酶测定在肝病患者中的意义
谷氨酸脱氢酶(GLDH)是含锌的金属结合酶,主要分布于肝、心、肾等器官,尤其以肝细胞含量丰富,大约为心肌的17倍,GLDH在肝细胞内的定位几乎全部集中于线粒体的基质内,当肝细胞受损并累及线粒体时可明显升高,可作为肝脏损伤严重程度及急性肝坏死的判断指标[1,2].用连续监测法对正常人和不同肝病患者血清GLDH进行测定,兹报告如下.
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微孔板丙酮酸氧化酶法在ALT检测中的价值
ALT活性是临床评价肝功能的一项重要指标,近年来,随着自动化分析仪的普遍应用,微板紫外连续监测法(微孔板速率法)以其快速、简便、便于批量自动化检测等优点,被血站系统广泛应用于献血员筛查,但由于比色波长(340nm)的限制,标本溶血、脂血都会影响检测结果.丙酮酸氧化酶法是在可见光(492nm)范围内比色,能较好地克服上述干扰,现将其与微板紫外连续监测法对不同标本的检测结果比较报告如下.
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无锡地区无偿献血者中ALT检测结果分析
目的 探讨分析献血者血液ALT检测的的可行性及筛查策略.方法 通过对2008年1月1日～3月31日期间8186例无偿献血者进行5年来献血情况的追溯调查,并将他们2008年献血的ALT检测结果与合计数进行统计分析.结果 前一次献血ALT不合格的献血者再次献血的不合格率(17.99%)与总体ALT不合格率(4.85%)相比具有显著的统计学意义.而前一次献血ALT合格再次献血的献血者与首次献血的献血者的ALT不合格率相近,且都与总体ALT不合格率(4.85%)相比无统计学意义.结论 不管献血者以前是否献过血,都应在献血前做ALT项目的筛查,同时要做好献血前的献血者征询工作,才能有效地降低血液的报废率.
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赖氏法检测丙氨酸氨基转移酶的试管法和微量法比较
《中国生物制品规程》1 995版规定,血浆(血清)丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定是供浆员每次供浆前的初筛和供浆后留样品复检的项目之一.ALT活性检测的方法有酮体粉显色法、固定时间法和连续监测法.
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终止分光光度法快速检测酪氨酸多巴氧化酶活性
目的 提高分光光度法检测酪氨酸多巴氧化酶活性(多巴氧化酶)的灵敏度、特异性和稳定性.方法 用高氯酸对分光光度法进行改进,并与多巴色素法和连续检测法比较.结果 终止分光光度法检测多巴氧化酶的灵敏度为多巴色素法10倍,为连续监测法的2倍,且稳定性强,可分析浊样和非浊样样本,并且每小时样本测定量为另两种的2倍.结论 建立的终止分光光度法检测多巴氧化酶活性敏感、快速和特异,是一种可靠的实验诊断手段.
