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脂多糖对小鼠巨噬细胞TREM-1表达的影响
目的:初步探讨脂多糖(LPS)应激下小鼠巨噬细胞TREM-1的表达.方法:以小鼠巨噬细胞为研究对象,分别加入不同浓度的LPS(0.04、0.2、1、5和25μg/mL)作用后,采用RT-PCR法检测不同时间点LPS应激的巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达.结果:LPS呈时间依赖性地上调巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达,且在LPS作用6h达到峰值；LPS呈剂量依赖性地上调巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达,且在1μg/mL达到峰值.结论:LPS可上调小鼠巨噬细胞TREM-1 mRNA的表达.
关键词： 髓样细胞表达的触发受体-1 急性肺损伤 巨噬细胞 脂多糖 -
髓样细胞表达的触发受体-1研究进展
髓样细胞表达的触发受体-1(TREM-1)具有激发和放大炎症反应的作用,初发现于脓毒血症,一直以来被看作是诊断感染性疾病的标志物.但近研究显示TREM-1在感染及非感染性炎症中表达均增高,而且认为TREM-1的阻断可成为治疗急、慢性炎症性疾病的一种新的方法 .因而对TREM-1的结构功能、表达情况、信号转导机制、可溶性形式及与全身性炎症反应的关系和以其为靶点的治疗作用等进行研究有重大意义.
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血管活性肠肽对RAW264.7小鼠巨噬细胞TREM-1功能的影响
目的 观察血管活性肠肽(VIP)对RAW264.7小鼠巨噬细胞髓样细胞表达的触发受体-1(TREM-1)功能的影响.方法 以小鼠巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,细胞接种于培养板后采用TREM-1的单克隆激动抗体激活TREM-1,VIP预处理组采用10nM的VIP进行干预.lh后采用Western blot法检测胞内PLC-γ磷酸化改变,采用DCFH-DA荧光探针检测胞内活性氧簇(ROS)的含量;6h后,采用real-time PCR法检测巨噬细胞TREM-1受体激活后下游靶基因肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)的基因表达;12h后,采用ELISA法检测细胞培养上清液TNF-α和MCP-1的蛋白含量.结果 采用TREM-1单克隆激动抗体处理小鼠巨噬细胞后,可显著增高胞内PLC-γ磷酸化水平、ROS含量,以及TNF-α和MCP-1的mRNA与蛋白水平,而VIP预处理可明显抑制单克隆激动抗体所诱导的上述反应.结论 VIP可抑制RAW264.7小鼠巨噬细胞TREM-1激活后诱导的功能改变,从而发挥抗氧化抗炎的作用.
关键词： 血管活性肠肽 髓样细胞表达的触发受体-1 巨噬细胞 炎症 -
髓样细胞表达的触发受体1抑制LPS应激下巨噬细胞的自噬
目的 观察髓样细胞表达的触发受体1 (TREM-1)对脂多糖(LPS)应激下巨噬细胞自噬相关基因表达的影响.方法 观察LPS应激下的巨噬细胞TREM-1蛋白的表达.分别选用TREM-1的激动剂(MAB1187)和TREM-1的拮抗剂(LR12)作用于巨噬细胞,利用qPCR检测巨噬细胞自噬相关基因ATG7、ATG5、ATG12及自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)mRNA的表达;采用Western Blot检测巨噬细胞TREM-1、LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白的表达;采用免疫荧光检测在LPS应激与TREM-1激活的情况下,巨噬细胞的自噬标志蛋白LC3表达.结果 LPS (400 ng/mL、1000 ng/mL)应激下巨噬细胞TREM-1蛋白表达明显增加;LPS(1000 ng/mL)作用巨噬细胞24h,巨噬细胞TREM-1蛋白表达达到峰值.LPS应激的巨噬细胞自噬基因ATG7、ATG5、ATG12及自噬标志分子LC3 mRNA表达均降低;当给予TREM-1拮抗剂后,巨噬细胞的ATG7、ATG5、ATG12、LC3 mRNA表达均升高,而采用TREM-1激动剂后,自噬基因表达被抑制.Western Blot检测结果显示,TREM-1可抑制LPS应激下巨噬细胞LC3Ⅱ/Ⅰ、ATG7蛋白的表达.免疫荧光检测表明TREM-1激动剂可使巨噬细胞胞内的LC3蛋白表达量减少.结论 巨噬细胞胞膜上TREM-1激活后,可使巨噬细胞自噬减弱,提示LPS应激下的巨噬细胞TREM-1可能通过抑制巨噬细胞的正常自噬从而发挥炎症放大作用.
关键词： 髓样细胞表达的触发受体-1 巨噬细胞 脂多糖 自噬 -
地塞米松对急性肺损伤中TREM-1表达的影响
目的：探讨地塞米松（Dexamethasone，Dex）对脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）诱导的急性肺损伤(acute lung injury, ALI)小鼠肺组织中髓样细胞表达的触发受体1（triggering receptor expressed on myeloid cells-1,TREM-1）表达的影响。方法以昆明小鼠为研究对象，腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立ALI模型，30 min后给予不同浓度的Dex（5、10、20、40 mg/kg）处理6 h；选用Dex(10 mg/kg)处理不同的时间（6、12、24、36 h）。HE染色法观察肺组织病理损伤程度；RT-PCR检测肺组织TREM-1mRNA的表达；ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液中可溶性TREM-1（sTREM-1）蛋白水平。结果 Dex可减轻肺病理损伤；Dex呈时间依赖性地下调ALI小鼠肺组织的TREM-1 mRNA的表达，且在6 h即可降低；Dex呈剂量依赖地下调ALI小鼠肺组织中TREM-1 mRNA的表达，并在10 mg/kg时开始降低。Dex可降低ALI小鼠支气管肺泡灌洗液中sTREM-1的蛋白水平。结论 Dex可呈剂量及时间依赖性下调ALI小鼠肺组织中的TREM-1mRNA的表达，并减少肺内髓样细胞胞膜TREM-1的脱落，提示Dex可能通过调节TREM-1的表达，从而抑制ALI早期的炎症级联反应，参与保护肺组织。
关键词： 髓样细胞表达的触发受体-1 急性肺损伤 地塞米松 脂多糖 -
包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因的克隆和原核表达
目的 为研究包含CDRl在内的小鼠TREM-1分子保守区功能及TREM一1分子的活化方式奠定基础.方法 从正常成年昆明小鼠组织中提取细胞基因组DNA,利用PCR技术扩增出包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区基因片断.构建PET-30a(+)-CDR1原核表达载体,并转化到BL21(DE3)plysS大肠杆茵中通过IPTG诱导表达,将表达产物进行Tricine-SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析.结果 从小鼠组织中成功获得包含CDR1在内的小鼠TREM-1分子保守区的目的基因片断并定向克隆到原核表达栽体中.克隆菌表达的蛋白电泳分析见一新的条带,相对分子质量在1.0X 104左右,Westen Blot检测显示其有与Anti-His单克隆抗体特异性结合的能力.结论 成功构建了包含CDR1在内的小鼠TREM-1保守区基因的原核表达载体,并在BL21(DE3)plysS大肠杆茵中稳定大量表达.
关键词： 小鼠 髓样细胞表达的触发受体-1 包含CDR1在内的保守区 原核表达 -
髓样细胞表达的触发受体-1分子的功能与信号转导机制研究进展
髓样细胞表达的触发受体-1(TREM-1)是新近发现的一种与炎症级联放大密切相关的免疫球蛋白超家族成员,主要表达于中性粒细胞及成熟的单核细胞、巨噬细胞表面.多种细菌性成分以及创伤等能使其表达增加,并能与其位于血小板表面的内源性配体一起激活该受体,从而激发炎症因子、趋化因子的产生及中性粒细胞的脱颗粒、呼吸暴发和吞噬作用.TREM-1分子在脂多糖(LPS)所致的内毒素血症中尤其具有显著放大炎症反应的作用,近年来对其信号转导机制的研究取得了大量新的进展.另外,TREM-1与Toll样受体-4(TLR4)在LPS所致炎症反应的放大中存在协同作用,但具体机制目前还不太明确.血浆中还存在TREM-1的可溶性形式,由金属蛋白酶使膜上TREM-1分子外功能区脱落而形成,可作为炎症性疾病早期诊断和预后判断的新指标.
关键词： 髓样细胞表达的触发受体-1 信号转导 炎症
