首页 > 文献资料
-
氧化应激对C2C12肌原细胞中KLF4表达的影响
.结论:细胞氧化应激反应能显著诱导C2C12肌原细胞中KLF4的高表达.
-
Kruppel样因子4过表达对C2C12肌原细胞中热休克蛋白25表达的影响
目的 观察Kruppel样因子4过表达对热休克蛋白25表达的影响.方法 运用稳定转染pcDNA3.1/myc-His(-)和Kruppel样因子4-pcDNA3.1/myc-His(-)两种细胞株,采用逆转录聚合酶链反应观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25 mRNA表达的影响;采用Western blot观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25蛋白表达的影响.结果 在正常状态下,两种细胞热休克蛋白25 mRNA及蛋白表达水平均较低.生理状态下,热休克恢复1 h及3 h Kruppel样因子4过表达细胞株热休克蛋白25 mRNA表达水平明显高于转空载体细胞;至热休克恢复6 h后两组细胞热休克蛋白25 mRNA表达无明显差异.在生理状态及热休克恢复不同时间后,Kruppel样因子4过表达细胞热休克蛋白25蛋白表达水平均较空载体组明显增加.结论 在生理状态下和热休克反应中,Kruppel样因子4过表达均能够促进C2C12肌原细胞中热休克蛋白25高表达.
-
乙醛脱氢酶2减轻多柔吡星所致细胞毒性作用的机制
目的:探讨乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)对多柔吡星(doxorubicin,DOX)所致肌原细胞毒性的保护作用及其机制.方法:以小鼠C2C12肌原细胞为研究对象,通过基因转染方式调节细胞内ALDH2表达水平,以流式细胞术检测细胞凋亡率,MTT法检测细胞增殖抑制率,化学荧光法检测组织活性氧(reactive oxygenspecies,ROS)、4羟壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)蛋白加合物含量及caspase-3/7活性,Western印迹检测Bcl-2,NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)、胞浆调节亚单位p-p47PHOX水平.结果:ALDH2过表达可显著降低DOX所致C2C12细胞凋亡及增殖抑制,而抑制ALDH2的表达则增加DOX对C2C12细胞凋亡诱导及增殖抑制作用;ALDH2过表达可下调p47PHOX磷酸化水平,抑制NOX2活化及ROS生成,而ALDH2低表达则上调p47PHOX磷酸化水平,促进NOX2活化及ROS生成;此外,NOX2活性抑制剂apocynin可抑制p47PHOX磷酸化、ROS生成及caspase-3/7的酶活性,同时增加ALDH2酶活性及其mRN水平.结论:DOX所致的肌原细胞毒性与NOX2依赖性细胞氧化应激增强、ALDH2酶活性及表达降低有关,而ALDH2通过抑制上述NOX2信号,减轻细胞凋亡而发挥保护细胞作用.
-
氧化应激对热休克蛋白70核仁分布的影响
目的:探讨氧化应激对热休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)核仁分布的影响.方法:采用热休克反应(42 ℃ 1 h,37 ℃恢复12 h)诱导C2C12细胞中HSP70的高表达;构建HSP70与增强绿色荧光蛋白(EGFP)的重组质粒.将重组质粒瞬时转染C2C12肌原细胞后,用免疫印迹技术分别检测热休克反应及基因转染诱导的HSP70表达;在分离纯化核仁和胞质蛋白组分后,分别采用免疫细胞化学、荧光技术及免疫印迹检测氧化应激(0.5 mmol/L H2O2)诱导的HSP70的分布改变.结果:免疫印迹显示,热休克反应和瞬时转染重组质粒,均能导致C2C12细胞中HSP70的高表达;荧光示踪显示,过氧化氢处理1 h后,可见胞核有较强的荧光;免疫细胞化学及细胞组分蛋白质免疫印迹显示,热休克处理的细胞暴露于过氧化氢1 h后,HSP70从细胞质向细胞核及核仁移位.结论: 氧化应激能导致HSP70从胞质向核仁移位.
-
核仁素表达下调对C2C12细胞增殖与凋亡的影响
目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响.方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制C2C12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24 h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的"梯状条带".而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响.结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡.
-
HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡
目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率.DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带.采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化.利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响.结果:HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显"梯状"条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放.结论:HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡.
