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补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响
目的 探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响.方法 以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理.结果 Pso、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者.电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构.可见明显的凋亡形态学改变.PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者.结论 PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PS0及UVA照射.PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平.
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槲皮素精氨酸复合物的制备研究
目的制备水溶性槲皮素精氨酸复合物(QAC),拓宽槲皮素的给药途径.方法取一定量槲皮素(QUE)和L-精氨酸在乙醇中回流制备QAC,通过胶束纸色谱,紫外吸收光谱、红外吸收光谱和X射线衍射图谱对QAC进行结构鉴定.结果摩尔比为1:1的QUE和L-精氨酸形成了QAC,并且QAC常温下稳定存在.与QUE比较,QAC的水溶性明显增大,仍然对抑制细胞生长具有较强的活性.结论该制备方法简捷实用,有助于提高QUE的生物利用度.
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昆明山海棠诱导HL-60细胞凋亡的初步研究
目的探讨中药昆明山海棠(THH)诱导急性白血病细胞凋亡的规律及发生机制.方法应用染料排除法、活细胞荧光染色、DNA电泳、流式细胞仪、斑点杂交、原位杂交和荧光Ca2+指示剂进行检测和观察.结果HL60细胞在THH作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变、DNA梯状带以及亚G1峰,并且存在明显的量效和时效关系.进一步研究表明,Bcl-2基因在凋亡过程中的表达持续下调,细胞内游离Ca2+浓度未发生明显变化.结论 THH有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,其作用机制与下调Bcl-2基因表达有关.
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蟾蜍灵诱导白血病HL-60细胞分化及相关基因表达
目的研究中药蟾酥中蟾毒成分蟾蜍灵(bufalin)的抗癌机制.方法以早幼粒白血病HL-60细胞为靶细胞,应用电镜技术观察bufalin诱导的细胞分化,免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p21WAF1的表达.结果0.001 μ.mol/L bufalin作用HL-60细胞,细胞向粒细胞方向分化,p21WAF1表达显著升高,而PCNA表达显著下降,二者呈显著负相关(P<0.01).结论bufalin诱导HL-60细胞分化,与其上调p21WAF1的表达、下调PCNA表达有关.
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灵芝复方诱导HL-60白血病细胞凋亡的研究
应用体外集落与液体培养、细胞形态学观察、DNA片段凝胶电泳及DNA片段百分率测定等方法观察灵芝复方对人骨髓CFU-GM生长及HL-60细胞增殖和凋亡的作用.发现灵芝复方在一定浓度范围内对人骨髓CFU-GM生长有促进作用,而对白血病细胞系HL-60细胞集落生长则表现出剂量依赖性抑制;细胞形态学结果表明,灵芝复方对HL-60细胞凋亡具有剂量和时间依赖性诱导作用.8和16 mg/mL 灵芝复方作用48 h,可使HL-60细胞DNA片段百分率明显升高;DNA片段凝胶电泳显示有明显的细胞凋亡"梯形"表现.提示灵芝复方可通过选择性诱导白血病细胞凋亡来发挥抗白血病作用.
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昆明山海棠根部水提液诱导HL-60细胞凋亡及对c-Myc基因表达的调控
目的研究昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Celastraceae)(THH)根部水提液对早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用及机制.方法通过特征性的形态学观察,Annexin-V标记,以及流式细胞仪检测中次G1峰的形成确定THH的诱导细胞凋亡作用;应用Western Blotting研究THH对c-Mye蛋白表达的影响.结果THH根部水提液可诱导早幼粒白血病HL-60细胞凋亡.在浓度高于18μg/mL时,THH对HL-60细胞的诱导凋亡作用呈现浓度与时间的相关性.在THH处理2～4 h后,癌基因蛋白c-Myc表达降低99%以上.结论THH抑制了c-Myc蛋白的翻译或后翻译过程,从而降低了c-Myc在细胞周期运转中的作用,导致大量细胞凋亡.
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阿糖胞苷联合光动力疗法对人白血病HL-60细胞作用的研究
目的 探讨阿糖胞苷(Ara-c)在癌光啉(PSD-007)介导的光动力疗法(PDT)杀伤人早幼粒白血病HL-60细胞中的联合作用.方法 实验分为空白对照组、PDT单独作用组(PDT l～4组,为光敏剂剂量(5、7.5μg/ml)和激光能量密度(1.2、2.4 J/cm2)的两两组合)、Ara-c单独作用组(Ara-c A组和Ara-c B组中Ara-c质量浓度分别为0.3 μg/ml和1.2μg/ml)和联合作用组即上述PDT单独作用组和Ara-c单独作用组的两两组合.所有分组分别按3种时序即P24A时序(PDT作用24h后再加入Ara-c共同作用24h)、A24P时序(Ara-c作用24h后进行PDT再共同作用24h)和PA24时序(PDT作用的同时加入Ara-c再共同作用24h)进行处理.采用CCK-8法检测各组细胞活性,用金氏公式分析联合效应,并用流式细胞术检测细胞周期变化.结果 小剂量PSD-007介导的PDT和Ara-c联合时,3种时序的联合作用均表现为协同效应;而大剂量PSD-007介导的PDT和Ara-c联合时,P24A和A24P 2种时序的联合作用效应为协同或相加,PA24时序则主要为相加或拮抗.流式细胞仪检测细胞周期变化结果显示,Ara-c和PSD介导的PDT均能引起细胞周期G0/G1期阻滞.结论 Ara-c与PSD-007介导的PDT联合作用对HL-60细胞的杀伤有协同作用,其协同作用与剂量和作用时序相关,小剂量比大剂量协同效果明显,且Ara-c和PDT间隔24h作用比2者同时作用于该细胞的协同效果明显.
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载体介导RNAi技术对HL-60细胞hTERT基因和细胞生长影响
目的：探究靶向人端粒酶逆转录酶（hTERT）的核糖核酸干扰（RNAi）对白血病HL-60细胞生长及hTERT基因的作用。方法用已经构建好的表达针对pSilencer1.0-U6/hTERT siRNA质粒载体，经RNAi-Mate转染试剂转染HL-60细胞。将转染细胞分为对照组（3亚组）和实验组（3亚组），即pSilencer1.0-U6空质粒组、RNAi-Mate转染试剂组及生理盐水空白对照组为3个对照组，pSilencer1.0-U6/ hTERT质粒转染后24 h组、pSilencer1.0-U6/ hTERT质粒转染后72 h组、pSilencer1.0-U6/ hTERT质粒转染后120 h组为3个实验组。用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测细胞hTERT基因mRNA的表达，Western blot法检测细胞hTERT蛋白的表达，Annexin V-FITC/PI流式细胞仪双染法检测细胞凋亡情况，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖抑制率。结果实验组（3亚组）HL-60细胞hTERT蛋白表达水平（0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08）、mRNA（0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06）低于对照组（3亚组）（0.73±0.14、0.76±0.15、0.75±0.11，0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19）；实验组（3亚组）细胞增殖抑制率[（23.7±4.0）%、（35.1±5.9）%、（29.6±3.8）%]及凋亡率[（11.95±3.61）%、（14.61±2.97）%、（12.82±3.01）%]均高于对照组（3亚组）（P <0.05），但实验组各亚组间、对照组各亚组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术在体外能抑制HL-60细胞hTERT蛋白和基因的表达，能抑制细胞增殖，增加细胞凋亡。
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新生牛肝中三种低分子化合物牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60细胞凋亡的诱导作用
目的:研究三种新生牛肝源低分子化合物:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用并探讨其调控机理.方法:用MTT法分别检测三种活性成分作用后HL-60细胞和正常人淋巴细胞的存活率.分别用琼脂糖凝胶电泳,顺磁共振ESR技术,免疫组化法测定其对HL-60细胞的核DNA、氧自由基活性和细胞周期蛋白水平的影响.结果:三种化合物能够有效地抑制HL-60细胞的增殖,而对正常的人淋巴细胞的生长没有抑制作用;三种化合物使HL-60细胞的核DNA产生30 kb片段,使HL-60细胞内的氧自由基活性降至痕量水平,并下调HL-60的p45/skp2的水平,而上调p27/kip的水平.结论:牛磺酸、鸟氨酸、肌肽能够通过调控细胞周期蛋白的水平而选择性的抑制肿瘤细胞的增殖.
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β-榄香烯增强阿克拉霉素对HL-60细胞诱导凋亡作用及其机制研究
目的 研究β-榄香烯增强阿克拉霉素对白血病细胞系HL-60细胞的诱导凋亡作用,探讨β-榄香烯联合阿克拉霉素抗白血病的作用机制.方法 以不同浓度阿克拉霉素(0.05、0.10、0.25 μg/ml)单独作用HL-60细胞,和以不同浓度β-榄香烯(10、20、40 μg/ml)联合小剂量阿克拉霉素(0.10 μg/ml)作用20 h,分别用流式细胞术、Western blot法、竞争ELISA法等检测细胞凋亡率,环氧化酶(COX)-2、NF-κB和前列腺素E2(PGE2)的表达.结果 小剂量的阿克拉霉素(0.05～0.10 μg/ml)对HL-60细胞的凋亡及其COX-2、NF-κB和PGE2的表达均无明显影响.小剂量的阿克拉霉素与β-榄香烯联合作用后,可促进HL-60细胞的凋亡,β-榄香烯10～40 μg/ml联合阿克拉霉素0.10 μg/ml处理后,HL-60细胞凋亡率为(8.97 ± 0.14)%～(34.90 ± 2.72)%,明显高于40 μg/ml β-榄香烯单独作用组的(8.07±0.36)%,并抑制COX-2、NF-κB和PGE2的表达,这种作用与β-榄香烯浓度呈正相关.结论 β-榄香烯可增强阿克拉霉素对HL-60细胞的诱导凋亡作用,并抑制COX-2和PGE2的表达,这种作用可能是通过抑制NF-κB活性而实现.
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去铁胺单独及联合三氧化二砷对裸鼠HL-60细胞移植瘤的抑制作用及其可能机制
目的 探讨去铁胺(DFO)单独及联合三氧化二砷(As2O3)对裸鼠HL-60白血病细胞移植瘤的抑制作用及机制,为临床采用铁螯合剂治疗或辅助治疗白血病提供实验依据.方法 用高致瘤性HL-60细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组:50 mg/kg DFO单药组、3 mg/kg As2O3单药组、联合用药组(50 mg/kg DFO+1.5 mg/kg As2O3)及生理盐水对照组;HL-60细胞接种当天即开始给药,均采用腹腔注射给药,每日注射1次,连续10 d;比较上述药物对裸鼠移植瘤的抑制作用,并对移植瘤组织NF-κBp65表达进行免疫组化检测(末次给药后24 h).结果 ①全部裸鼠于接种后第7～8天成瘤,出现肉眼可见的瘤块,直径0.5～1.0 cm,成瘤后瘤体生长迅速.②DFO单药组、As2O3单药组、联合用药组的移植瘤重量分别为(2.55±0.82)、(2.34±0.79)、(1.95±0.39)g,抑瘤率分别为2.67%、10.69%、25.57%;生理盐水对照组的移植瘤重量为(2.62±0.54)g;DFO单药及DFO联合As2O3均能抑制移植瘤生长,其中以联合用药效果好,且未引起重要脏器损害.③代表移植瘤组织NF-κBp65表达的吸光度(A)值:对照组>As2O3单药组>DFO单药组>DFO联合As2O3用药组,4组两两相互比较差异均有统计学意义(P值均<0.05).结论 ①采用高致瘤性HL-60细胞在裸鼠皮下接种,可成功建立移植瘤模型;②DFO和As2O3单药均对高致瘤HL-60细胞移植瘤裸鼠有抗瘤作用,二者联合作用显著;③荷瘤裸鼠对DFO联合As2O3应用能较好耐受,DFO可降低As2O3用量,促进其杀伤肿瘤作用,且可降低As2O3的不良反应;④DFO和As2O3均可降低移植瘤组织NF-κBp65的表达水平,二者联合作用更加明显.
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HL-60细胞中ICAT基因沉默对Wnt信号通路及NSC67657诱导细胞分化的影响
目的 探讨β-catenin相关蛋白I(ICAT)沉默对Wnt信号通路及甾醇类新药NSC67657诱导HL-60细胞单核系分化的影响.方法 NSC67657诱导HL-60细胞分化,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD14的表达,检测细胞分化程度;构建慢病毒LV-ICAT-RNAi载体,感染HL-60细胞,采用荧光实时定量PCR和Western blot技术检测感染前后ICAT基因和蛋白表达情况,判断干扰效果;采用免疫共沉淀技术检测β-catenin与ICAT蛋白在细胞内的相互作用;采用Western blot技术分析NSC67657诱导非感染HL-60细胞(HL-60v组)和LV-ICAT-RNAi载体感染HL-60细胞(HL-60i组)前后Wnt/β-catenin通路下游靶点Cyclin D1、TCF-1和c-Jun的表达情况;NSC67657分别作用HL-60v组和HL-60i组细胞24 h,采用瑞氏染色、透射电子显微镜、流式细胞术观察细胞分化情况.结果 10 μmol/LNSC67657可以诱导HL-60细胞向单核系分化,连续诱导5d后,CD14+细胞比例为(92.30±5.14)％;HL-60i细胞ICAT mRNA表达(0.07±0.01)明显低于HL-60v组(1.00±0.08)(P=0.002)(平均敲减效率为93.2％),Western blot结果与PCR结果一致(P=0.001);免疫共沉淀结果显示,ICAT与β-catenin蛋白在细胞分化前后都存在相互作用,药物诱导细胞分化后两者相互作用条带吸光度明显增加.药物作用HL-60i细胞Wnt信号通路下游靶蛋白Cyclin D1、TCF-1和c-Jun表达明显高于HL-60v组,但低于非药物处理组.NSC67657作用HL-60i细胞CD14+细胞比例为(8.33±3.14)％,明显低于HL-60v组的(19.08±4.73)％,但仍高于非药物处理非感染HL-60细胞组(0.60±0.03)％(F=119.24,P=0.010),细胞形态和超微结果符合细胞表面分化抗原检测结论.结论 ICAT蛋白参与了NSC67657诱导HL-60细胞的单核系分化,Wnt/β-catenin信号通路可能起到桥梁作用.
关键词： HL-60细胞 β-catenin相关蛋白1 分化 Wnt信号通路 -
硼替佐米对全反式维甲酸和蟾蜍灵诱导的HL-60细胞分化过程中黏附功能的影响及其机制研究
目的 观察在低剂量蟾蜍灵联合全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60细胞向粒-单核细胞分化过程中细胞黏附功能的变化,检测黏附相关蛋白Pyk2及其底物蛋白Paxillin表达的变化,并探讨蛋白酶体通路对细胞黏附功能以及Pyk2和Paxillin表达的影响.方法 采用流式细胞术检测细胞CD11b的表达;采用MTT法检测细胞黏附能力;采用Western blot技术检测Pyk2、Paxillin和微管蛋白(Tubulin)的表达水平.结果 低剂量蟾蜍灵+ATRA联合用药以时间依赖性的方式诱导HL-60细胞分化,CD11b阳性率在处理2 d和4 d分别为(20.0±2.8)%和(75.0±5.3)%,并伴有细胞黏附功能苘的上调.同时Pyk2和Paxillin表达水平的上调也呈时间依赖性.蛋白酶体抑制剂硼替佐米以剂量依赖性的方式抑制细胞黏附能力,0、1和10 nmol/L硼替佐米处理的HL-60细胞的黏附水平分别为(9.4±0.8)%、(7.8±0.1)%和(5.3±0.3)%,硼替佐米处理组同时伴有Pyk2表达水平的下调,但Paxillin的表达不受影响.结论 Pyk2参与细胞黏附功能的调节;蛋白酶体通路抑制剂PS-341可能通过下调Pyk2表达,抑制HL-60细胞黏附功能.
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硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱、三氧化二砷对耐药白血病细胞增殖、凋亡的影响
目的 探讨硼替佐米单独或联合三尖杉酯碱(HT)、三氧化二砷(As2O3)对HL-60/ADM多药耐药细胞株和难治、复发急性白血病原代细胞增殖、凋亡的影响.方法 以HL-60/ADM白血病细胞株及难治、复发急性白血病患者原代细胞为研究对象,采用硼替佐米单独或联合HT、As2O3,处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,Hoechst33342染色、流式细胞术检测细胞凋亡率及检测胞内阿霉素荧光阳性率,进一步分析硼替佐米逆转耐药能力.结果 10～50 nmol/L硼替佐米能够抑制HL-60/ADM细胞增殖并引起凋亡,其中40 nmol/L处理48 h达大抑制效果;应用15 μmol/L As2O3和752nmoL/L HT分别与不同浓度硼替佐米联合处理HL-60/ADM细胞,其对HL-60/ADM细胞的增殖抑制率和凋亡率均高于硼替佐米单药处理组(P值均<0.05).10 nmol/L硼替佐米能使HL-60/ADM细胞对阿霉素的蓄积作用大大提高.硼替佐米对难治、复发急性白血病患者原代细胞的增殖抑制作用与HL-60/ADM细胞一致.结论 硼替佐米能够抑制HL-60/ADM细胞及难治、复发急性白血病原代细胞增殖并诱导其凋亡,与HT或As2O3联合具有相加作用.
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中枢神经系统白血病小鼠白血病细胞对血脑屏障的破坏作用
目的 通过建立中枢神经系统白血病(CNSL)小鼠模型及体外血脑屏障模型,观察白血病细胞对血脑屏障的影响,探讨白血病细胞浸润中枢神经系统的发病机制.方法 对10只BALB/c 裸鼠进行切脾、环磷酰胺腹腔注射、全身亚致死剂量照射等预处理,经尾静脉注射含1.2×107个SHI-1细胞的0.2 ml PBS,观察小鼠的活动、饮食等一般状态,应用RT-PCR、组织病理切片、骨髓细胞涂片等检测裸鼠脑组织中SHI-1细胞的浸润生长情况,用激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1、纤维蛋白原的表达.将人脑微血管内皮细胞(BMVEC)接种于铺有Matrigel胶的Transwell小室系统中建立体外血脑屏障模型.将HL-60、SHI-1细胞接种于血脑屏障模型的Transwell小室上层,在倒置显微镜下观察BMVEC的形态变化,采用激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1的表达,计算白血病细胞的穿膜率.结果 ①接种SHI-1细胞后30～35 d有50%的小鼠先后发生CNSL,出现肢体瘫痪、失明等症状,骨髓及脑组织有不同程度的白血病细胞浸润;骨髓和脑组织中同时检测到人MLL-AF6融合基因的转录;在被浸润的脑组织中检测到纤维蛋白原的渗出及ZO-1表达降低.②与HL-60和SHI-1细胞共培养后,BMVEC失去紧密相连的致密单层结构,细胞呈分散、单个生长,ZO-1表达明显下调,SHI-1细胞对BMVEC的形态改变较HL-60明显,SHI-1细胞穿透率为(40.33 ±1.53)%,较HL-60细胞[(11.83 ±1.44)%]明显增高(P<0.05).结论 白血病细胞通过破坏血脑屏障而浸润中枢神经系统是CNSL的发病机制之一.
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白血病细胞株分泌的基质金属蛋白酶在中枢神经系统白血病发病机制中的作用
目的 观察白血病细胞分泌的基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9对脑微血管内皮细胞(BMVEC)紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5、occludin表达及对血脑屏障(BBB)通透性的影响,探讨MMP-2和MMP-9在中枢神经系统白血病(CNSL)发病机制中的作用.方法 ①实时定量PCR检测SHI-1、HL-60、U937细胞MMP-2、MMP-9基因的转录水平;明胶酶谱法检测细胞培养上清中MMP-2和MMP-9蛋白表达;体外穿膜实验观察各白血病细胞株的侵袭能力.②将原代人BMVEC接种于铺有Matrigel胶和纤维黏连蛋白包被的Transwell小室系统中,建立体外BBB模型.将蛋白酶抑制剂GM6001处理或未处理的SHI-1、HL-60、U937细胞或MMP-2/MMP-9基因沉默的SHI-1细胞接种于BBB模型的Transwell小室上层与BMVEC共培养,倒置相差显微镜观察BMVEC的形态变化,激光共聚焦显微镜观察紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达,计算白血病细胞的穿膜率.结果 ①SHI-1细胞表达较高转录水平的MMP-2和MMP-9及酶活性,且侵袭能力强于HL-60、U937细胞(P＜0.01).②与HL-60、SHI-1和U937细胞共培养后,融合致密的BMVEC之间出现间隙、细胞呈单个生长,紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin的表达明显下调,各白血病细胞均不同程度地穿过体外BBB进入Transwell小室下层.其中SHI-1细胞对BMVEC的形态改变及3种紧密连接蛋白的下调为明显,穿膜率高.GM6001明显抑制白血病细胞分泌MMP-2和MMP-9,使BMVEC的形态有所恢复,同时上调ZO-1、claudin-5和occludin的表达,降低了BBB的通透性.③用siRNA分别沉默MMP-2和MMP-9基因后,SHI-1细胞分泌MMP-2和MMP-9被抑制,SHI-1细胞穿膜率较沉默前分别下降43.64％和57.30％(P＜0.01),ZO-1、claudin-5和occludin表达上调.结论 白血病细胞株分泌的MMP-2和MMP-9能通过降解BMVEC紧密连接蛋白ZO-1、claudin-5和occludin而破坏BBB.
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中性粒细胞碱性磷酸酶对中性粒细胞功能影响的体外研究
目的 探讨中性粒细胞碱性磷酸酶(neutrophils alkaline phosphatase,NAP)对中性粒细胞迁移、活性氧(ROS)生成以及凋亡的影响.方法 通过慢病毒感染人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60获得NAP高表达细胞株,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测感染后细胞NAP的基因转录及蛋白表达水平.HL-60细胞经1.5％ DMSO体外诱导分化为类中性粒细胞后进行相关实验:分别利用Transwell迁移实验和流式细胞术检测高表达NAP中性粒细胞的迁移及ROS生成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测高表达NAP中性粒细胞中凋亡相关蛋白Bax、caspase-3和caspase-9的表达情况.结果 经慢病毒感染的HL-60细胞通过嘌呤霉素筛选后80％以上细胞可见绿色荧光,且NAP在基因及蛋白水平表达均明显升高.HL-60细胞经1.5％ DMSO体外诱导分化5d后,细胞体积变小、表面出现许多突起,核质比例降低,核仁消失,核染色质由密集趋向疏松,细胞核扭曲折叠呈杆状或分叶,CD11b+细胞百分比明显升高.Transwell迁移实验结果显示,高表达NAP的中性粒细胞迁移细胞数多于阴性对照组[(15.30±3.65)×103对(8.00±0.78)×103,P＜0.001].流式细胞术检测结果表明,高表达NAP的中性粒细胞胞内ROS的平均荧光强度高于阴性对照组(355.70±20.10对103.22±4.71,P＜0.001);与阴性对照组比较,高表达NAP中性粒细胞胞凋亡率及凋亡相关蛋白Bax、active-caspase-3以及active-caspase-9的表达水平明显上调.结论 NAP具有促进类中性粒细胞迁移及ROS生成、加速细胞凋亡的生物学作用.
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上调CaMKⅡ抑制蛋白表达对HL-60细胞增殖的抑制作用及机制研究
目的 观察上调钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)抑制蛋白(CaMKⅡN)基因表达对急性髓系白血病(AML)细胞增殖的影响及机制.方法 以白血病细胞系HL-60细胞为研究对象,采用Lipofectamine 2000脂质体法将CaMKⅡN基因真核表达载体pcDNA3.1/CaMKⅡN和空载体pcDNA3.1/myc-His(-)B分别转染细胞;Western blot法检测转染后的HL-60细胞CaMKⅡN基因表达;MTT法检测转染CaMKⅡIN基因的细胞增殖情况;半固体培养法分析转基因HL-60细胞集落形成情况;Hoechst33342荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期分布.结果 人CaMKⅡN基因稳定转染HL-60细胞.过表达CaMKⅡN基因的HL-60细胞与空载体转染组及空白对照组相比,增殖受抑[(0.44±0.03)对(0.94±0.05)和(0.94±0.04),P＜0.01],细胞集落形成能力减低[(21.00±3.05)/500细胞对(111.00±4.58)/500细胞和(119.00±6.09)/500细胞,P＜0.01],转染72 h细胞凋亡率明显增高[(22.49±2.15)％对(7.17±0.72)％和(6.40±0.55)％,P＜0.01].过表达CaMKⅡN的HL-60细胞阻滞于G0/G1期[(82.97±2.90)％],明显高于空转组[(40.53+2.38)％]和空白对照组[(41.63+2.27)％](P＜0.05);转染CaMKⅡN基因的HL-60细胞Bcl-2表达水平明显降低.结论 上调人CaMKⅡN基因表达可有效抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡.
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二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的比较蛋白质组学研究
不同的诱导分化剂可诱导急性髓系白血病细胞系HL-60细胞向不同谱系的细胞分化[1].二甲基亚砜( DMSO)由于其溶解极性和非极性化合物能力极强而被广泛用作溶剂.目前,DMSO作为细胞低温保鲜剂(浓度一般在10％)可直接给患者注射[2].据新报道,DMS0可通过活化转录因子促进成骨细胞分化[3].我们采用比较蛋白质组学方法,研究DMSO诱导HL-60细胞分化过程中蛋白质的差异表达,并探讨其可能的分子机制.
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响
目的:研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞诱导凋亡作用及细胞周期的影响.方法:应用hTERT ASODN封闭HL-60细胞hTERT基因,RT-PCR方法检测目的基因的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期分析,TUNEL方法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞DNA梯带.结果:hTERT ASODN作用细胞72h后,hTERT基因表达明显受到抑制(P＜0.01).流式细胞仪检测显示:ASODN组细胞阻滞于G0/G1期,S、G2/M期细胞减少(P＜0.05);细胞增殖指数(PI)明显降低(P＜0.05);检测出早期凋亡峰.Annexin V/PI检测及TUNEL检测均显示:ASODN组凋亡细胞阳性率明显高于SODN组(P＜0.01).琼脂糖凝胶电泳显示:ASODN组出现凋亡DNA梯带.结论:hTERT ASODN能够封闭目的基因表达,阻滞HL-60细胞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,对治疗白血病具有潜在应用价值.
