首页 > 文献资料
-
转化生长因子β受体Ⅱ对微卫星不稳定结肠癌细胞凋亡和迁移的影响
目的 研究转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβ RⅡ)表达对微卫星不稳定(MSI)结肠癌细胞凋亡和迁移的影响.方法 选择野生型PIK3CA HCT116细胞(HCT116 wt)作为MSI结肠癌细胞模型.将TGFβRⅡ转染HCT116 wt细胞获得HCT116 wt-RⅡ细胞,并以HCT116 wt空质粒细胞作为对照.通过生长因子缺失应激(GFDS)诱导细胞凋亡.采用Western印迹检测磷酸化Smad2(TGFβ信号通路关键因子)、磷酸化AKT (PI3K/AKT信号通路关键因子)、Bim (TGFβ信号通路下游因子)和Ecadherin(诱导上皮向间质转化的标志物)表达.采用DNA碎片ELISA分析检测HCT116 wt-RⅡ细胞凋亡情况.通过Transwell实验检测HCT116 wt-RⅡ细胞迁移活力.结果 加入TGFβ后,HCT116 wt-RⅡ细胞的TGFβ信号通路得以启动,GFDS诱导的HCT116 wt-RⅡ细胞凋亡受到显著抑制(DNA碎片值:0.69±0.02比0.41±0.04,P＜0.01)；细胞迁移活力明显增强(2.10±0.15比4.03±0.48,P＜0.01).PI3K抑制剂(LY294002)可以逆转TGFβ对HCT116 wt-RⅡ细胞的凋亡抑制和迁移活力增强作用.TGFβ作用于HCT116 wt-RⅡ细胞后,Bim和E-cadherin表达明显减少.结论 TGFβRⅡ在MSI结肠癌细胞中的再表达可以增加MSI结肠癌细胞的存活能力和迁移活力,该作用依赖PI3K/AKT途径,从而为MSI结肠癌患者的良好预后提供了一个分子水平的解释.
-
葡萄糖调节蛋白78对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响
目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响.方法 构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV-shRNA GRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV-control,分别转染人结直肠癌细胞系RKO.四甲基偶氮唑盐法实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤能力.Affymetrix人全基因组表达芯片检测GRP78表达抑制后RKO细胞中基因表达谱的变化.Western blot技术验证部分差异基因以确定结果的可靠性.结果 转染pLV-shRNAGRP78后,RKO细胞增殖能力及克隆形成数目明显受到抑制(P＜0.05),但迁移能力没有明显变化(P＞0.05);流式细胞术检测结果显示,沉默GRP78导致G1期细胞比例显著增加,而S期细胞比例显著降低(P＜0.05);裸鼠成瘤实验结果显示,沉默GRP78导致肿瘤细胞在裸鼠皮下成瘤能力显著减弱(P＜0.05).基因芯片检测结果显示,GRP78表达抑制后,共有397个基因的表达发生改变(与对照组相比,变化表达倍数≥1.2),其中上调的基因258个,下调139个,这些基因主要涉及信号转导、细胞代谢、细胞凋亡等功能.通过生物信息学分析,筛选3个(CDKN2B、MTOR及BIRC3)特异相关的差异基因进行Western blot验证,验证结果与芯片结果相符.结论 沉默GRP78可通过抑制人结直肠癌RKO细胞周期G1/S期转换,从而抑制细胞的体内外增殖生长能力,但对细胞的迁移能力无显著影响.通过基因芯片技术能够筛选和鉴定与GRP78表达改变相关的基因.GRP78可能通过调控这些基因的表达从而影响结直肠癌细胞的增殖能力.
-
类表皮生长因子域7通过 ERK 信号通路促进内皮细胞迁移及血管生成
目的：探讨类表皮生长因子域7（EGFL7）对内皮细胞迁移和血管生成的影响。方法以人微血管内皮细胞为研究对象，构建EGFL7过表达载体，转染入细胞。应用即时定量PCR法检测EGFL7 mRNA表达水平及Western blot检测EGFL7蛋白表达水平。分别采用划痕实验法、Matrigel法观察EGFL7对内皮细胞迁移及血管生成的影响。 Western blot检测内皮细胞转染EGFL7过表达载体和空载体0、10、30和60 min后，p－AKT、AKT、p－ERK和ERK蛋白表达情况。结果 EGFL7过表达组可以显著促进内皮细胞的迁移、血管生成；EGFL7可以激活ERK信号通路，但对AKT信号通路几乎无影响；抑制 ERK 信号通路后， EGFL7对内皮细胞迁移和血管生成的影响均显著下降。结论EGFL7通过ERK信号通路影响内皮细胞迁移和血管生成。
-
MACC1在结直肠癌迁移及化疗耐药中的实验研究
目的：探讨MACC1在结直肠癌迁移及化疗耐药中的作用。方法采用SiRNA干扰技术沉默MACC1表达，利用Transwell迁移实验研究MACC1在结直肠癌迁移中的作用，应用MTT法研究MACC1在结直肠癌化疗耐药中的作用。 Western Blot 检测相关通路蛋白表达变化。结果SW480细胞系MACC1表达极低，而SW620细胞系中MACC1蛋白呈高表达状态。 SiRNA技术可显著抑制MACC1的表达水平。 MACC1干扰后，SW620细胞发生迁移的数目显著减少（P＜0．05）且对5-Fu处理表现更为敏感（P＜0．05）。下调MACC1表达后提示p-ERK及p-Met蛋白表达水平随之显著减少。结论 MACC1在结直肠癌转移及耐药过程中发挥重要作用，并有可能成为潜在治疗靶点。
-
miR-939-5p调控USP22基因表达对肝癌迁移和增殖的影响
目的 探讨miR-939-5p对泛素特异肽酶22(USP22)基因表达的调控作用及对肝癌迁移和增殖的影响.方法 采用荧光定量PCR (qPCR)检测肝癌细胞株(HepG2、MHCC-97H、SMMC-7721、BEL-7404和Huh7)和正常肝细胞株LO2中miR-939-5p的表达.以表达量低的肝癌细胞为实验对象,转染miR-939-5p(实验组)或miR-NC(对照组).qPCR检测miR-939-5p的转染效率.Transwell迁移实验和四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)增殖实验检测miR-939-5p对肝癌细胞迁移和增殖能力的变化.生物信息学软件预测miR-939-5p的靶基因.双荧光素酶报告基因验证miR-939-5p与靶基因的相互作用.qPCR和Western blotting检测高表达miR-939-5p后靶基因在mRNA和蛋白水平的表达.计量数据以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验.结果 肝癌细胞株中miR-939-5p的表达均明显低于正常肝细胞(P＜0.01),SMMC-7721细胞中miR-939-5p的表达低(P＜0.01).miR-939-5p可有效转染进入SMMC-7721细胞内[(1.01±0.07)比(20.12±1.27),P＜0.01].高表达miR-939-5p可抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移能力(P＜0.01)和增殖能力(P＜0.05).USP22基因可能为miR-939-5p的靶基因.荧光素酶报告基因证实miR-939-5p能与USP22 mRNA的3'-UTR特异性结合(P＜0.01).高表达miR-939-5p后USP22在mRNA和蛋白水平上表达降低(P＜0.01).结论 miR-939-5p在肝癌细胞株中表达降低,可抑制肝癌SMMC-7721细胞的迁移和增殖能力,其分子机制为靶向干扰USP22基因的表达.
-
siRNA沉默CHI3L1基因对人胆囊癌细胞增殖及侵袭的影响
目的 探讨siRNA沉默CHI3L1基因对人胆囊癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 采用慢病毒感染和siRNA干扰技术沉默人胆囊癌细胞GBC-SD中CHI3L1基因(siRNA组),同时设立阴性对照组(siRNA-NC组)及空白对照组(GBC-SD组).采用CCK-8法检测3组细胞吸光度值(A450),Transwell小室细胞迁移和侵袭实验检测穿膜细胞数.3组细胞数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 siRNA组24、48、72 h的A450分别为0.87±0.16、0.47±0.21、0.52±0.20,明显低于GBC-SD组的1.20±0.08、1.34±0.15、1.58±0.21(LSD-t=-4.061,-8.483,-7.698;P<0.05).Transwell小室细胞迁移实验显示siRNA组24 h的穿膜细胞数为(31.0±2.4)个,明显少于GBC-SD组的(92.0±7.2)个(LSD-t=-8.126,P<0.05).Transwell小室细胞侵袭实验显示siRNA组24 h的穿膜细胞数为(29.0±3.0)个,明显少于GBC-SD组的(76.0±5.2)个(LSD-t=-7.883,P<0.05).结论 siRNA沉默CHI3L1基因后可明显抑制人胆囊癌细胞增殖、迁移和侵袭能力.
-
青蒿素抑制胆囊癌细胞的迁移侵袭及其机制
目的 探讨青蒿素对胆囊癌细胞体外迁移、侵袭能力的影响及其机制.方法 20μmol/L青蒿素处理胆囊癌细胞GBC-SD(青蒿素组),同时设立未加青蒿素处理的对照组.采用划痕实验检测胆囊癌细胞迁移能力变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化,免疫荧光技术检测细胞形态变化.采用qRT-PCR和Western blot检测细胞中E-cadherin、Slug、Vimentin、MMP-2、MMP-9等基因的mRNA和蛋白水平变化.两组表达量比较采用t检验.结果 划痕24 h青蒿素组划痕宽(393±23)μm,明显大于对照组的(210±15)μm(t=13.415,P<0.05).青蒿素组GBC-SD穿膜细胞数为(93±8)个,明显少于对照组的(202±14)个(t=-17.037,P<0.05).青蒿素促使细胞形态从间质型向表皮型转化.青蒿素组GBC-SD细胞的Slug、Vimentin、MMP-2、MMP-9基因的mRNA分别为0.89±0.03、1.35±0.10、3.30±0.13、1.15±0.08,明显低于对照组的2.08±0.12、3.22±0.15、4.72±0.19、1.95±0.15(t=-19.812,-20.775,-12.259,-9.438;P<0.05);而E-cadherin mRNA为2.06±0.08,明显高于对照组的1.03±0.06(t=20.956;P<0.05).Western blot检测显示青蒿素下调Slug、Vimentin、MMP-2、MMP-9,上调E-cadherin蛋白.结论 青蒿素可抑制胆囊癌细胞迁移和侵袭,其作用可能与抑制Slug基因表达逆转上皮间质转化,进而降低MMP表达有关.
-
SIAH2蛋白在肝细胞癌发生、发展中的作用研究
目的：探讨SIAH2蛋白在肝细胞癌（肝癌）发生、发展中的作用。方法取对数生长期的人肝癌细胞Bel-7404，分别将空载体小干扰核糖核酸（siRNA）及SIAH2 siRNA转染至人肝癌细胞Bel-7404中，将转染后细胞分为control-siRNA组和SIAH2-siRNA组。以β-肌动蛋白（β-actin）为对照，采用蛋白质印迹法检测两组人肝癌细胞Bel-7404的SIAH2蛋白表达情况。采用噻唑蓝法检测两组细胞增殖情况，采用细胞划痕实验观察两组细胞迁移情况，采用Transwell实验观察两组细胞侵袭情况。两组间的数据比较采用t检验。结果 control-siRNA组和SIAH2-siRNA组的SIAH2蛋白平均相对表达量分别为0.71±0.02、0.33±0.01。与control-siRNA组相比，SIAH2-siRNA组的SIAH2蛋白相对表达量明显减少（t=-4.629，P<0.05），增殖速度亦明显下降。control-siRNA组的细胞迁移率为（45.3±0.4）%，SIAH2-siRNA组为（14.3±0.4）%，SIAH2-siRNA组明显低于control-siRNA组（t=-3.689，P<0.05）。control-siRNA组的穿膜细胞数为（563±10）个，SIAH2-siRNA组为（122±7）个，SIAH2-siRNA组明显少于control-siRNA组（t=-3.428，P<0.05）。结论 SIAH2蛋白能促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭，从而加速肿瘤的发生、发展。
-
体外稳定表达DMBT1对胆囊癌细胞系GBC-SD趋化迁移的影响
目的 建立稳定表达候选抑癌基因DMBT1(deleted in malignant brain tumours 1)的胆囊癌细胞系GBC-SD,研究其迁移能力并探讨分子机制.方法 以脂质体为介导在体外建立稳定表达DMBTl的胆囊癌细胞系.细胞分组:(1)GBC-SD/DMBT1为转染DMBT1组;(2)GBC-SD/Vector为转染空载体组;(3)GBC-SD为未处理组.免疫组化、Western blot及RT-PCR检测DMBT1蛋白、mRNA表达,确证转染成功,划痕法与Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot检测E-钙粘蛋白、CD44V6、CD15等黏附转移分子表达.统计学采用配对或独立样本t检验,P＜0.01为差异有统计学意义.结果 稳定转染后,实验组DMBT1蛋白及mRNA表达较对照组分别提高3.2倍、2.7倍;划痕法显示实验组细胞在迁移距离、迁移速率、迁移面积均显著小于对照组(P＜0.01);Tnmswell法表明转染DMBT1后,迁移细胞数亦显著少于对照组(P＜0.01);免疫印迹表明转染实验组较对照组E-钙粘蛋白表达上调,CD15表达量减少(P＜0.01),而CD44V6、α与β连环素、整合素α5在转染前后表达量无明显差异.结论 在体外成功建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞系;DMBT1在体外过表达显著抑制GBC-SD的迁移,至少部分依赖于上调E-钙粘蛋白表达,下调CD15表达.
-
反苯环丙胺对结肠癌细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨抑制赖氨酸特异性脱甲基酶1(lysine specific demet hylase 1,LSDl)活性对人结肠癌细胞迁移的影响.方法 本研究应用反苯环丙胺抑制LSD1酶的活性,通过划痕试验和Transwall实验在体外观察人结肠癌Lovo细胞迁移和侵袭的变化.用RT-PCR和Western blot法检测LSD1的表达和H3K4me2甲基化水平. 结果 经过不同剂量反苯环丙胺(40、60和80 μmol/L)处理后,细胞增殖实验结果显示对人结肠癌Lovo细胞增殖无影响(P＞0.05)；60μmol/L反苯环丙胺干预后,划痕试验结果发现Lovo细胞迁移明显受抑制.TranswaⅡ实验发现穿过小室的细胞数:60 μmol/L反苯环丙胺组为(69.7±2.5),而对照组为(222.7±11.0),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测显示Lovo细胞中的LSDl mRNA和蛋白水平的表达无改变,但H3 K4me2甲基化水平升高.结论 60μmol/L反苯环丙胺能抑制结肠癌Lovo细胞的LSD1酶活性,降低细胞的迁移和侵袭能力.
-
黏着斑激酶表达下调对肝癌细胞黏附迁移侵袭行为的影响
目的：研究下调黏着斑激酶（FAK）表达对人肝癌细胞HCC-LM3黏附迁移侵袭行为的影响及可能涉及的机制。方法根据处理方法不同，将人肝癌细胞HCC-LM3分为未处理组（肿瘤细胞未经处理）、对照组（肿瘤细胞转染空载体，FAK表达未改变）和FAK-shRNA组（肿瘤细胞稳定低表达FAK）。分别采用细胞黏附实验、划痕实验、Transwell实验检测3组肝癌细胞的黏附、迁移、侵袭能力，Western blotting检测细胞黏附侵袭相关蛋白paxillin、p130Cas以及基质金属蛋白酶MMP-2与MMP-9蛋白的表达及活化情况。结果 FAK表达下调后，细胞黏附能力显著受到抑制，细胞迁移能力和侵袭能力均明显下降；细胞黏附分子p130Cas、paxillin的蛋白总量表达无明显改变，而磷酸化水平明显降低，其活化形式p-paxillin和p-p130Cas表达则明显受到抑制；MMP-2、MMP-9蛋白表达水平则在下调FAK表达后明显降低（P<0.01）。结论在人肝癌细胞HCC-LM3中，下调FAK表达可以影响肝癌细胞黏附迁移侵袭能力，其机制可能是通过调节相关细胞黏附分子的表达或活化来实现。
-
上皮细胞钠离子通道在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其与子痫前期发病的关系
目的：上皮细胞钠离子通道(ENaC)在子痫前期患者胎盘中的表达及其与子痫前期(PE)发病的关系。方法选择2009年3月至2011年3月在四川大学华西第二医院行剖宫产分娩的92例产妇的胎盘组织为研究对象,根据孕妇是否患有重度子痫前期,将其分别纳入重度 PE 组(n =48,重度 PE 患者)和对照组(n=44,正常妊娠者)。此外,选择于早孕期(孕龄为8~11孕周)因计划外妊娠等因素要求行人工终止妊娠孕妇的胎盘组织纳入早孕期组(n=36)。早孕期组的胎盘组织取自选择性负压吸引人工终止妊娠术者。重度 PE 组和对照组产妇行剖宫产分娩待胎盘娩出后,立即取胎盘母体面的中央绒毛区组织。3组受试者的住院时间等比较,差异无统计学意义(P >0.05)。体外实验在正常人滋养层细胞株 HTR-8/Svneo 上进行。采用免疫组化技术(SP 法)检测 ENaC 在孕妇胎盘组织的定位。实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(qPCR)及 Western blotting 法检测胎盘组织ENaC mRNA 及蛋白的表达水平。此外,观察雌、孕激素对滋养细胞 HTR-8/SVneo ENaC 表达的调节作用。再利用小干扰 RNA(SiRNA/ENaC)干预 ENaC 的表达后,通过划痕实验及侵袭实验观察HTR-8/Svneo 细胞迁移及侵袭能力的变化。本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,标本的采集过程均征得受试对象同意,并与受试对象签署临床研究知情同意书。结果①重度 PE 组和正常妊娠组孕妇孕前体质指数(BMI)、孕期体重增加、基础收缩压、晚孕期收缩压、孕期收缩压增加、基础舒张压、晚孕期舒张压、孕期舒张压增加、新生儿出生体重等一般临床资料比较,差异均有统计学意义(t =2.586、2.16、2.139、15.817、13.078、4.896、16.600、11.11 9、8.456,P <0.05)。②免疫组化法结果显示,ENaCα亚基主要表达于早孕期胎盘合体滋养细胞及绒毛滋养细胞的细胞膜上。③ qPCR 结果表示：ENaC 各亚基在不同妊娠时期的胎盘组织中均有表达,但其表达水平存在差异,其中 ENaC α亚基主要在早孕期表达,而 ENaC β亚基主要在对照组表达。ENaCβ亚基在重度 PE 组的相对表达水平为0.48±0.17,显著低于 ENaC β亚基在正常妊娠组中的相对表达水平为0.89±0.20,并且差异有统计学意义(t =2.465,P <0.05)。④雌激素(1μmol/L)、孕激素(5μmol/L)可下调 ENaC mRNA 在滋养细胞 HTR-8/SVneo 上的表达水平,孕激素(5μmol/L)可下调 ENaC 在蛋白水平的表达水平。⑤ ENaC 蛋白水平的表达被 ENaCα亚基特异性小干扰 RNA (siRNA/ENaC)下调后,HTR-8/SVneo 细胞的迁移及侵袭能力减弱。结论晚孕期胎盘组织中以 ENaCβ亚基表达为主,重度 PE 患者 ENaC β亚基表达水平较正常妊娠者降低；下调 ENaC 的表达滋养层细胞侵袭与细胞迁移的能力减弱,推测 ENaC 可能通过影响滋养细胞的迁移及侵袭参与 PE 发病。
-
阿司匹林对HER-2阳性乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响
目的 探讨阿司匹林对乳腺癌细胞SKBR3侵袭和迁移能力的影响.方法 先采用MTT法检测不同浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L)阿司匹林及DMSO(对照组)对SKBR3细胞生长抑制的影响.然后,将乳腺癌细胞SKBR3分为3组,即2.5 mmol/L阿司匹林组、10.0 mmol/L阿司匹林组和对照组(DMSO 处理),采用 Transwell 实验、划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力,实验重复3次.Transwell实验和划痕实验结果数据比较,采用单因素方差分析,组间两两比较采用 LSD 法.结果 MTT结果显示,随着阿司匹林浓度的增大,SKBR3细胞生长抑制明显增加,其半数抑制浓度(IC50)为7.91 mmol/L.Transwell实验显示,对照组侵袭细胞染色570 nm吸光度值为2.232 ±0.054, 2.5 mmol/L 组为1.648±0.069,10.0 mmol/L组为0.372±0.019,3组间相比,细胞侵袭能力的差异有统计学意义(F=338.1,P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L和10.0 mmol/L阿司匹林组细胞侵袭能力明显受到抑制(P均<0.001).划痕实验显示,24 h后对照组细胞迁移愈合率为(69.78±2.87)%, 2.5 mmol/L阿司匹林组为(50.16±3.10)%,10.0 mmol/L阿司匹林组为(16.08±2.10)%,3组间相比,细胞迁移能力的差异也有统计学意义(F=100.8, P<0.001);并且,与对照组相比,2.5 mmol/L 和10.0 mmol/L 阿司匹林组细胞迁移能力均明显受到抑制(P均<0.050).结论 阿司匹林能够抑制乳腺癌细胞SKBR3的侵袭和迁移能力.
-
转录因子性别决定区Y框18对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的 探讨转录因子性别决定区Y框18(SOX18)对子宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其相关机制.方法 采用pCI-SOX18表达质粒转染HeLa细胞(实验组),设空白对照组和阴性对照组;Western blot法检测各组中SOX18和基质金属蛋白酶7(MMP-7)的表达情况.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SOX18对HeLa细胞增殖的影响;Transwell法观察SOX18对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 在增殖实验中,各时间点实验组细胞数目与阴性对照组、空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);实验组SOX18相对表达量为1.16±0.13,空白对照组为0.23±0.05,阴性对照组为0.28±0.07,差异具有统计学意义(F=218.14,P<0.05);实验组MMP-7蛋白相对表达量为0.95±0.09,空白对照组为0.71±0.07,阴性对照组为0.68±0.06,三组差异有统计学意义(F=116.84,P<0.05).迁移实验中,实验组迁出细胞数量为(175.71±17.17)个,阴性对照组为(95.19±8.18)个,空白对照组为(93.34±9.72)个,实验组与对照组差异均有统计学意义(t=75.47,t=77.35,均P<0.05).侵袭实验中,实验组细胞迁出的数量为(247.12±36.82)个,阴性对照组为(98.63±14.62)个,空白对照组为(96.57±13.95)个,实验组与对照组差异均有统计学意义(t=98.02,t=99.34,均P<0.05).结论 过表达SOX18对HeLa细胞增殖无影响,可促进细胞迁移和侵袭,该作用可能是通过SOX18正性调节MMP-7实现的.
-
不同剂量率X线照射对人非小细胞肺癌细胞株A549迁移的影响
目的 了解相同剂量不同剂量率X线照射对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移的影响,以期为临床制定放疗计划提供一定的实验依据.方法 将人NSCLC细胞株A549进行培养,采用直线加速器行X线单次照射,总剂量为6 Gy,剂量率分别为1、2、4、6 Gy/min,照射后立即将单层贴壁细胞划痕,分别于划痕后0、24 h在显微镜下进行拍照,测量痕道宽度.结果划痕后24 h,未照射对照组细胞的痕道宽度为(640.7±8.1)μm,不同剂量率X线照射后细胞的痕道宽度不同,以1 Gy/min和6 Gy/min剂量率X线照射细胞的痕道宽[(691.4±7.6)μm和(691.8±12.1)μm],4 Gy/min照射细胞的痕道宽度次之[(666.2±1.3)μm],与未照射对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.01),表明对A549细胞迁移运动能力的抑制作用明显;而2 Gy/min照射细胞的痕道宽度为(643.5±6.8)μm,与对照组比较差异无统计学意义(t=-0.336,P=0.742).结论X线照射对人NSCLC A549细胞迁移能力的影响与剂量率有关,相同剂量不同剂量率对细胞迁移的影响存在明显差异.选择适合的剂量率进行照射,可能有助于提高肿瘤的放疗效果.
-
三氧化二砷对尤文肉瘤细胞迁移和侵袭能力抑制作用的体外研究
目的 研究三氧化二砷在体外对尤文肉瘤细胞系迁移和侵袭能力的抑制作用.方法 通过噻唑蓝(MTT)实验选择对尤文肉瘤细胞系(A-673、RD-ES)无毒性的三氧化二砷浓度(＜2μmol/L)后,Transwell迁移和侵袭实验检测三氧化二砷作用下尤文肉瘤细胞的迁移和侵袭能力.Western blot实验及明胶酶谱实验检测PI3K-AKT通路相关作用蛋白及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化.结果 迁移和侵袭穿过Transwell基底膜的尤文肉瘤细胞的数量随着三氧化二砷浓度的增加而逐渐降低,经不同浓度三氧化二砷处理过的A-673迁移平均数量分别占未处理组的54.3％、49.0％和17.0％,差异有统计学意义(F=112.78,P＜ 0.01),在侵袭实验中分别为52.7％、32.3％和10.3％,差异有统计学意义( F=183.76,P＜ 0.01);经过不同浓度三氧化二砷处理后的RD-ES细胞迁移平均数量分别占未处理组的46.0％、39.0％和8.0％,差异有统计学意义(F=408.25,P＜0.01),在侵袭实验中分别为58.7％、22.3％和9.0％,差异有统计学意义( F=373.25,P＜ 0.01).PI3K-AKT通路相关蛋白和MMP-9表达水平下降.结论 低浓度三氧化二砷可以通过下调PI3K-AKT信号通路的表达来抑制尤文肉瘤细胞系的转移能力.
-
抗NRP-1 b1/b2单克隆抗体对胃癌BGC-823细胞侵袭及迁移的抑制作用及其机制
目的 观察自主研发的抗NRP-1 b1/b2 IgG1型特异性单克隆抗体(NRP-1mAb)对胃癌细胞BGC-823迁移及侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 实验室制备NRP-1mAb,利用流式细胞术检测抗体纯度.在实验室保存胃癌细胞株BGC-823的培养液中加入不同浓度的NRP-1mAb进行培养,采用Transwell法观察12h后BGC-823细胞的迁移、侵袭情况.利用蛋白印迹法分析NRP-1mAb作用后相关信号蛋白磷酸化情况.结果 利用专利技术制备的NRP-1mAb在作用于胃癌细胞BGC-82312h后,能减少BGC-823迁移、侵袭的细胞数量.对照组(不加任何试剂)与给药组(NRP-1mAb 25、100、400μg/ml)穿过基底膜的细胞数分别为(167±9)、(138±5)、(98±5)、(36±4)个,差异有统计学意义(F=22.6,P<0.01),穿过滤过膜的细胞数分别为(231±40)、(224±19)、(176±26)、(124±34)个,差异有统计学意义(F=26.63,P<0.01),其中100、400μg/ml给药组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001).高浓度NRP-1mAb(100μg/ml)作用BGC-823细胞10min后细胞液中Akt磷酸化水平明显下降,30min后很难检测到磷酸化Akt.结论 NRP-1mAb可能通过降低Akt磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC-823的迁移、侵袭,且与浓度呈正相关.
-
AG490抑制Jak2-STAT3信号通路调控骨髓间充质干细胞迁移、矿化及骨缺损愈合的机研究
目的 探讨Jak2-STAT3信号通路抑制剂AG490对骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSC)迁移、矿化及骨缺损愈合的调控机制.方法 应用甲基噻唑基四唑(methyl-thiazolyl tetrazolium,MTT)实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测AG490对小鼠来源的原代BMSC增殖和迁移能力的调控.荧光定量PCR和蛋白质印迹法研究AG490调控BMSC增殖和迁移的相关基因及通路机制.通过茜素红染色及碱性磷酸酶活性实验探究AG490对BMSC矿化及成骨向分化能力的影响.构建小鼠股骨缺损模型,研究AG490对骨缺损愈合的影响及机制.结果 细胞划痕实验中第1、2天实验组[(12.42±7.50)％,(41.8±2.6)％]的细胞迁移率均显著小于对照组[(55.5±9.9)％,(86.9±8.7)％](P=0.006,P=0.005),Transwell实验中实验组[(22.8±5.9)个]中单位视野细胞迁移数显著少于对照组[(58.3±6.6)个](P=0.000).实验组MMP-7(0.5±0.1)、MMP-9 (0.1 ±0.1)及CXCR4 (0.35±0.07)的相对基因表达量均显著少于对照组[(1.1±0.1),(1.06±0.33),(1.08±0.13)] (P=0.0000,P=0.0003,P=0.0000).蛋白质印迹法结果中实验组磷酸化Jak2、磷酸化STAT3的蛋白表达在AG490的作用下与对照组相比受到明显抑制.BMSC矿化诱导14d后,实验组的碱性磷酸酶相对活性(8.0±2.1)较对照组(35.7±1.8)受到显著抑制(P=0.0005),实验组较对照组矿化结节小且数量较少.体内实验中,术后第5周时,实验组的相对骨密度显著低于对照组(P=0.0004).HE染色及免疫组化染色可见实验组中骨缺损断端处磷酸化Jak2、磷酸化STAT3和碱性磷酸酶阳性细胞较对照组稍多.结论 AG490可通过抑制Jak2-STAT3信号通路抑制BMSC的增殖、迁移和矿化,从而调控骨缺损愈合.
关键词： 细胞迁移分析 Jak2-STAT3信号通路 骨折愈合 AG490 -
性别决定基因盒9的表达水平与口腔鳞状细胞癌转移相关性的研究
目的 观察分析性别决定基因盒9 (sex-determining region Y box 9,SOX9)的表达水平对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖、迁移和转移的影响.方法 纳入2008年1月至2012年9月上海市口腔颌面部肿瘤组织样本及生物信息学数据库共享服务平台OSCC患者的病理组织标本74例,免疫组化法检测OSCC组织中SOX9蛋白的表达水平并分析其与临床特征的关系;细胞计数检测细胞增殖和平板克隆实验观察SOX9的表达与OSCC细胞增殖的关系;Transwell和划痕实验检测不同SOX9表达水平的OSCC细胞迁移能力.结果 高表达SOX9的OSCC患者淋巴结转移风险显著提高(P=O.010).Transwell实验中HN6(671.0±57.4,P=0.000)细胞均较CAL27细胞(172.0±13.9)迁移到下室的细胞数多,而划痕实验中HN6[0 h:(97.3±2.1)μm;6h:(56.7±2.5)μm;12 h:(29.7±3.1)μm]较CAL27[0 h:(93.7±1.5) μm;6 h:(78.0±2.0)μm;12 h:(42.0±3.0)μm]迁移速度快(P＜0.05).高表达SOX9的OSCC细胞系(HN6)细胞的迁移能力显著高于SOX9低表达的细胞系(CAL27)细胞(P＜0.05)且不同SOX9表达水平对OSCC细胞增殖无明显影响(P＞0.05).结论 SOX9蛋白高表达可促进OSCC的迁移和淋巴结的转移能力,SOX9是OSCC淋巴结转移分子诊断和干预的候选分子靶点.
-
转录因子特异蛋白1在头颈部鳞状细胞癌中参与微RNA-92b转录调节的研究
目的 研究转录因子特异蛋白1(specificity protein 1,SP1)对头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞增殖、转移和侵袭的影响,以及SP1对微RNA(microRNA,miRNA)-92b的转录调节作用.方法 实验分为转染SP1干扰小RNA(small interfering RNA,siRNA)的实验组、转染阴性对照siRNA的阴性对照组和未做处理的空白对照组.应用生物信息学方法预测miRNA-92b的转录因子.采用染色质免疫共沉淀技术验证转录因子SP1与miRNA-92b基因启动子的结合位点.转染siRNA抑制SP1表达后,用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测SP1和miRNA-92b的表达变化.转染后进行细胞增殖实验、Transwell迁移和侵袭实验.结果 染色质免疫共沉淀技术表明miRNA-92b启动子区域有3个DNA片段位点与SP1结合.qPCR结果显示,实验组SP1在细胞PCI-4A和PCI-37A中的表达(分别为0.064±0.020和0.639±0.008)显著低于阴性对照组(均为1)(P<0.05),实验组miRNA-92b在细胞PCI-4A和PCI-37A中的表达(分别为0.215±0.033和0.497±0.104)均显著低于阴性对照组(均为1)(P<0.05).实验组SP1在细胞PCI-4A和PCI-37A中增殖的A值均显著低于阴性对照组(P<0.05).实验组SP1在细胞PCI-4A和PCI-37A中迁移细胞数(分别为37.0±4.6和40.7±2.1)均显著低于阴性对照组(分别为101.0±5.3和82.7±5.7)(P<0.05).实验组SP1在细胞PCI-4A和PCI-37A中侵袭细胞数(分别为31.3±10.8和37.0±4.6)均显著低于阴性对照组(分别为92.3±3.1和70.3±3.1)(P<0.05).结论 SP1是miRNA-92b的转录因子并直接参与miRNA-92b的转录调控;SP1可以促进HNSCC细胞增殖、迁移和侵袭的能力.
