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硫化镍对NF-KB基因表达的影响
目的 探讨硫化镍对核转录因子KB(NF-KB)基因表达的影响.方法 人支气管上皮细胞(16HBE)给予低、中、高剂量的硫化镍处理后,使用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测出人支气管上皮细胞(16HBE)中NF-KB的表达,分别在4、8、12和24 h后检测其NF-KB表达的动态变化.结果与生理盐水组比较,硫化镍(中、高剂量组)对NF-KB基因呈高表达,硫化镍(低剂量组)对NF-KB表达的影响与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论硫化镍(中,高剂量)能明显激活NF-KB的表达,可能是硫化镍致癌的分子机制之一.
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黄绿青霉素对肿瘤坏死因子α诱导的血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1和白细胞介素的影响
目的 观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1( MCP-1)、白细胞介素1β( IL-lβ)、IL-6和IL-8等细胞因子的影响,以及CIT上调肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的内皮细胞表达MCP-1、IL-lβ、IL-6和IL-8的作用.方法 体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),选择第5～6代进行试验,待细胞融合80％后随机分组,加入TNF-α (10μg/L)、CIT(2μmol/L)建立TNF-α组、CIT组、TNF-α+ CIT联合处理组和空白对照组,处理时间24h.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8及MCP-1的含量;免疫荧光染色法测定细胞核转录因子kB( NF-kB)的激活表达;RT-PCR检测各组MCP-1 mRNA表达.结果 在TNFα组和TNF-α+ CIT组,细胞上清液IL-lβ、IL-6、IL-8、MCP-1浓度,细胞MCP-1 mRNA 表达量,NF-kB P65蛋白表达量均高于空白对照组(P＜0.05);且TNF-α+CIT组均高于TNF-α组(P＜0.05).结论 CIT可明显上调TNF-α诱导的内皮细胞MCP-1、IL-lβ、IL-6、IL-8表达和NF-kB的激活.
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IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤B淋巴细胞刺激因子表达变化的调控研究
目的 探讨IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达变化的影响及相关机制.方法 采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、E1.ISA及Western blot方法 分析人MM肿瘤细胞KM3在IFN-γ和IL-6以及相关信号通路特异性抑制剂作用前后BLJys表达水平的变化.结果 lFN-γ和IL-6促进KM3细胞BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂能够抑制BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂BAY11-7082能够完全下调IFN-γ引起的BLyS表达的上调作用;抑制促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性能够下调BLyS的表达水平.结论 MAPK与NF-KB信号通路参与了Blys的表达调节.
关键词： 多发性骨髓瘤 B淋巴细胞刺激因子 核转录因子KB 促分裂原活化蛋白激酶 -
核转录因子kappa B在兔椎间盘退变中表达的相关研究
目的 通过建立兔退变模型,分析核转录因子kB(NF-kB)在其中表达的关系,观察在不同的时间点核转录因子kB表达情况,了解其在椎间盘退变的作用.方法 ①实验新西兰大白兔采用自体对照,12只前路行椎间盘穿刺,来建立动物椎间盘退变的模型.②通过应用免疫组化的方法检测在不同时间点退变椎间盘与自身对照椎间盘中核转录因子kB的表达情况.③应用Image pro plus 6.0图象分析免疫组化切片所得各数据经SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析.结果 经免疫组化染色分析NF-kB在椎间盘退变过程中在不同的时间表达的情况不同,在早期表达明显,随着时间及退变的加重表达在下降.结论 NF-kB在椎间盘退变的早期起促进作用.
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三羟异黄酮降低去卵巢大鼠外周血炎性因子和动脉张力
目的 已有实验证实三羟异黄酮(GST)对绝经后妇女具有较好的心血管保护作用.观察GST对去卵巢大鼠外周血白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子kB(NF-kB)表达以及主动脉张力变化的影响,旨在探讨GST对绝经后女性心血管保护作用的机制.方法 将40只成年雌性大鼠随机分成4组:假手术组(n=10),去卵巢组(n=10),雌激素组[20 μg/(kg·d),n=10],GST组[200μg/(kg·d),n=10].第8周末取标本,酶联免疫法测定大鼠血清IL-6、TNF-α和NF-kB水平.结果 去卵巢组炎症标志物水平显著高于对照组[IL-6(95.8±16.2)比对照组(40.2±2.8)ng/L;TNF-α(60.3±6.4)比对照组(18.3±3.3)ng/L;NF-kB(11.9±3.3)比对照组(2.6±1.2)ng/L,均P<0.01].补充GsT后IL-6(43.4±3.7)ng/L、TNF-α(19.9±3.2)ng/L和NF-KB(2.2±1.0)ng/L水平均显著降低(均P<0.01).去卵巢大鼠主动脉张力[大收缩力(4.58±1.36)g]明显高于对照组[大收缩力(1.83±0.95)g,P<0.01)],补充GST可明显降低动脉血管张力[大收缩力(1.99±0.39)g,P<0.01].结论 GST能显著降低去卵巢大鼠外周血中IL-6、TN-α和NF-kB水平和主动脉张力.
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厄贝沙坦通过核转录因子kB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡的研究
目的 探讨厄贝沙坦通过抑制核转录因子kB(NF-kB)的表达减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡. 方法 将H9C2细胞分为:对照(Con)组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、二甲基亚砜(DMSO)组(5.5 mmol/L葡萄糖+1‰二甲基亚砜)、高糖(HG)组(33 mmol/L葡萄糖)、厄贝沙坦(Ir)组(33 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L厄贝沙坦),每组3个细胞.检测细胞增殖抑制率;IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA;核转录因子kB(NF-kB)、caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率. 结果 Ir组低于高糖诱导的Bax[(50.31±2.18) vs (61.96±4.08)]、IL-6[(7.67±1.53) vs (25.33±4.16)]、MCP-1[(26.67±6.11) vs (43.33±3.06)]、TNF-α[(35.33±3.06) vs (44.67±4.16)]、NF-kB[(2.19±0.52) vs (3.58±0.53)]及caspase-3[(2.28±0.10) vs (2.86±0.12)]表达及细胞凋亡[(10.73±1.78) vs (16.46±2.24)],差异均有统计学意义(P<0.05);上调高糖抑制的Bcl-2[(0.62±0.04) vs (0.45±0.06)]的表达(P<0.05). 结论 厄贝沙坦通过NF-kB信号通路,可减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡.
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硫氧还蛋白系统研究进展
硫氧还蛋白系统(TRX SYSTEM)是由TRX、NADPH及TRXR三部分组成的氧化还原敏感的多功能小分子蛋白系统.近来的研究表明TRX参与了氧应激和氧应激诱导的细胞凋亡.但更重要的是,在该系统中TRXR是一个高效的蛋白二硫化物还原酶.因此在机体的抗氧化机制中,TRX系统和GSH系统共同建立了机体内主要的抗氧化系统.此外,TRX还能激活NF-kB及其相关的信号传导通路.
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核转录因子kB在牙周膜细胞中的激活及对IL-6合成的影响
目的观察核转录因子kB(NF-kB)在牙周膜细胞中活性的变化及对IL-6合成的影响,探讨NF-kB是否参与牙周疾病的调控及其途径.方法采用免疫组化染色法,观察NF-kB在牙周膜细胞中活性的变化;用酶联免疫测定法检测IL-6的合成.结果 LPS以10μg/ml作为有效刺激浓度,6h后NF-kB核转位达峰值;将LPS以不同的浓度作用,结果表明10μg/ml-100μg/ml的浓度都有可能是NF-kB激活的有效浓度;IL-6的合成随PDTC(NF-kB的抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂)浓度的增加而降低.结论 NF-kB可在LPS诱导的人牙周膜细胞中激活发生核转位;其可能通过调控细胞因子(如IL-6)合成的途径参与牙周疾病的调控.
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人瘢痕疙瘩成纤维细胞IKKβ特异性siRNA的筛选和载体构建
背景:近年来的研究表明核转录因子k B通过调控多种基因的表达,参与细胞生长、发育、凋亡等多种生理功能,并在细胞恶性转化、纤维化等方面起重要作用.核转录因子k B抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β是核转录因子k B 激活通路中的关键激酶,被抑制后可以阻断核转录因子k B的活化过程,通过siRNA干扰沉默IKKβ基因,下调核转录因子k B.目的:体外合成并筛选人瘢痕疙瘩成纤维细胞特异性IKK β-siRNA,并构建其表达载体.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2008-04/2008-10在解放军广州军区总医院中心实验室完成.材料:细胞来源为珠江医院整形外科25～40岁患者切除的瘢痕疙瘩标本,患者知情同意.方法:化学合成3条IKKβ.siRNA,分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术检测所合成的SiRNA对IKKβ表达的抑制,筛选出特异性IKKβ-siRNA,并采用PU6质粒构建载体.主要观察指标:①RT-Q-PCR检测结果.②载体基因连接产物酶切鉴定.③重组质粒测序鉴定.结果:经实时定量反转录-聚合酶链反应检测,合成的3条IKKβ-siRNA链中,IKKβ-siRNA-2有明显抑制IKKβmRNA表达的作用,IKKβ-siRNA-1、IKKβ-siRNA-3干扰效果不明显.并通过酶切鉴定和测序结果证明成功构建IKKβ-siRNA载体.结论:应用反转录-聚合酶链反应可筛选出针对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的特异性IKK β-siRNA=可构建具有干扰效果的IKKβ-siRNA表达载体.
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核因子-kB信号途径活化对川崎病冠状动脉损害作用的研究
目的 探讨核因子-kB(NF-kB)信号途径在川崎病(KD)冠状动脉免疫损害中的作用.方法 2004年10月至2005年12月武汉市儿童医院收治的KD患儿48例,将患儿分为两组:冠状动脉损害亚组(CALs亚组)11例,无冠状动脉损害亚组(Non-CALs亚组)37例.感染对照组:同年龄组感染发热住院患儿18例.健康对照组:同年龄组健康体检儿童12例.采用免疫印迹(Western blot)法检测外周血单个核细胞(PBMC)中NF-KBp65及IkBα蛋白表达;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、MCP-lmRNA表达.结果 (1)KD组NF-kBp65明显高于两对照组[(16.53±4.81 vs.(8.37±3.15,0.33±0.05)(P<0.001)].CALs亚组NF-kBp65显著高于Non-CALs亚组[(22.86±3.11)vs.(13.55±3.23)(P<0.05)].KD组NF-kBp65抑制物IKBa明显低于感染对照组及健康对照组[(5.69±2.03)vs.(21.22±4.37,28.58±7.89)(P<0.001)].CALs亚组中胞核NF-KBP65/IkBα比值与CALs的严重程度呈正相关(r=0.536,P<0.05).(2)KD组TNF-αmRNA、MCP-1mRNA较两对照组明显升高[(7.02±2.91)vs.(3.05±2.33,0.61±0.38)(P<0.01);(3.89±1.10)vs.(1.11±0.42.0.04±0.01)(P<0.01)]CALs亚组TNF-αmRNA、MCP-1mRNA明显高于Non-CALs组[(8.79±1.52)vs.(6.13±2.52)(P<0.05);(4.26±0.78)vs.(3.01±0.53)(P<0.05)].结论 NF-kBp65信号通路的活化参与KD急性期血管炎的发生机制,可能参与冠状动脉损害的形成.
关键词： 皮肤黏膜淋巴结综合征 核转录因子KB 冠状动脉 -
肝纤维化大鼠肝组织中NF-κB及ERK-1mRNA的表达
目的 探讨核转录因子-kB(NF-kB)及细胞外信号调节激酶(ERK)mRNA在CCl4致实验性肝纤维化大鼠肝组织中的表达及其与肝纤维化的关系.方法 建立CCl4致大鼠实验性肝纤维化的模型,用免疫组化法比较正常组,模型组的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,用RT-PCR法比较各组肝组织NF-kB以及ERK-1mRNA的表达.结果 模型组中,ERK-1及NF-KBmRNA的表达均增高.结论 ERK通路介导的促增殖作用与NF-kB通路介导的促炎症反应,促进HSC的激活、增殖,在肝纤维化的发生发展中均是不可或缺的.
关键词： 核转录因子KB 细胞外信号调节激酶-1 肝纤维化 -
胞黏蛋白siRNA诱导非雄性激素依赖性前列腺癌多耐药细胞凋亡的作用
目的 研究胞黏蛋白siRNA诱导非雄性激素依赖性前列腺癌多耐药细胞凋亡的作用和多药耐药逆转的机制.方法 非雄性激素依赖性前列腺癌多耐药细胞PC-3M/CDDP用胞黏蛋白-1 siRNA进行处理.通过定量PCR和Western印迹检测凋亡基因和多耐药基因的mRNA和蛋白表达.结果 胞黏蛋白-1 siRNA抑制胞黏蛋白-1基因的表达,减低NF-kB信号通路,降低多耐药基因mdrl表达,促进多耐药逆转,下调bcl-2基因,激活p53,促进多耐药细胞的凋亡.结论 胞黏蛋白-1 siRNA通过减低NF-kB信号通路,促进细胞凋亡,逆转肿瘤细胞的多耐药性.
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白血病耐药细胞中多药耐药基因MDR1与核转录因子κB的关系
目的:研究核转录因子κB与多药耐药基因MDR1在白血病化疗耐药中的作用,阐明核转录因子κB(NF-κB)与白血病多药耐药的关系及相关分子机制.方法:白血病细胞K562和阿霉素(ADM)诱导的耐药细胞K562/ADM分别应用ADM(0、0.25、0.50、1.OO和2.00μg·L-1)或丝裂霉素(MIT)(0、2、4、8和16 mg·L-1)作用48 h,通过MTT法检测细胞生存率,计算细胞耐药指数;RT-PCR方法检测MDRl和IκBmRNA表达;Western blotting方法检测P-gP和P65的蛋白表达.结果:ADM和M1T分别作用后,与空白对照组比较,白血病细胞K562细胞生存率下降(P<0.01),呈剂量依赖性;ADM和MIT对耐药细胞K562/ADM生存率作用不明显;在mRNA水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的MDRl tuRNA高表达(P<0.01).与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00μg·L-1或MIT 4和8 mg·L-1分别作用K562细胞和K562/ADM细胞,IκBα mRNA表达均下降(P<0.01),并呈剂量依赖性;在蛋白水平上,与K562细胞比较,K562/ADM细胞的P-gp蛋白高表达(P<0.01).与空白对照组比较,ADM 0.50和1.00μg·L-1或MIT 4和8 mg·L-1分别作用K562/ADM细胞,P-gp蛋白表达量升高(P<0.01),同时P65蛋白表达量升高,且呈药物剂量依赖性(P<0.01).结论:MDR1基因及P-gp蛋白的高表达很可能是白血病细胞K562多药耐药性形成的关键机制,而NF-κB的激活可能参与了多药耐药的调控.
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血糖波动大鼠核因子кB的变化及其对胰岛β细胞凋亡的作用
目的 观察血糖波动对在体大鼠胰岛β细胞凋亡的影响以及核因子(NF)-кB在其中的作用.方法 通过高脂饲料及注射小剂量链脲佐菌素(STZ)20mg/kg的方法制造糖尿病(DM)大鼠模型,小剂量高糖(25%的葡萄糖溶液10mg/g体重)每日3次腹腔注射制造持续高糖(SHG)组模型,在SHG组基础上高糖注射后0.5h皮下注射诺和锐1U/100g,造成每日血糖波动3次的血糖波动(IHG)大鼠模型.根据血糖、血糖波动分正常(N)组、DM组、SHG组、IHG组4组.实验14d结束并检测胰腺组织氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),酶标记免疫吸附测定(ELISA)方法检测炎症指标肿瘤坏死因子(TNF)-α、环氧酶(COX)-2以及凋亡基因Bax、Bcl-2,NF-кB等.原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法观察胰岛细胞凋亡指数.结果 DM组、SHG组、IHG组较N组MDA 、TNF-α、COX-2、Bax含量升高,SOD、Bcl-2含量减少,NF-кB含量升高,胰岛细胞凋亡指数增多.与DM组比较,SHG组和IHG组MDA、Bax、NF-кB含量升高以及胰岛细胞凋亡指数升高.与SHG组比较,IHG组NF-кB含量高、Bcl-2/Bax值低,胰岛细胞凋亡指数高.偏相关分析提示,Bcl-2/Bax与NF-κB之间具有相关性(r=-0.239,P＜0.05).结论 血糖波动明显增加β胰岛细胞凋亡,可能与血糖波动增加氧化应激、炎症反应,激活并放大了NF-кB活性,NF-кB通过调节炎症及下游凋亡基因而促进胰岛细胞凋亡.
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核转录因子 kB 在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的 研究核转录因子Kb(nucleus factor-Kb,NF-Kb)P65亚单位在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)中的表达及与非小细胞肺癌临床病理特征的关系及意义.方法 采用免疫组织化学染色方法 (PV-6000通用型二步法)检测62例NSCLC组织和20例癌旁肺组织中NF-Kb P65蛋白.结果 P65蛋白在NSCLC组织中阳性表达率为79%(49/62),明显高于癌旁肺组织50%(10/20),差异有统计学意义(P＜0.05).P65蛋白与NCSCLC细胞分化程度、肺癌分期和淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-Kb P65蛋白高表达与NSCLC的发生、细胞增殖及浸润转移相关,可作为预后观测的指标和分子治疗的新靶点.
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严重烫伤内毒素血症大鼠胰岛β-细胞功能损害研究
目的 探讨胰岛NF-kB基因表达对大鼠胰岛β-细胞胰岛素分泌功能免疫损伤的作用.方法 制作12h、1d、3d、5d和7d组30%TBSAⅢ度烫伤内毒素血症大鼠模型.采用高糖钳夹技术检测大鼠胰岛在体内的功能状态.用胶原酶消化法分离出大鼠胰岛,观察其在体外的胰岛功能;并探讨胰岛功能变化与NF-kB基因表达的关系.结果 烫伤12h和1d组大鼠血糖及血清胰岛素水平比正常组显著升高(P＜0.05),并持续到伤后7天组;但烫伤组大鼠胰岛功能各时相点与正常组比较均明显受损(p＜0.01);烫伤组大鼠NF-kB蛋白表达均较正常组明显升高(P＜0.05),伤后1天达峰值,后逐渐下降.NF-kB阳性率与胰岛体外功能呈显著负相关(P＜0.01).结论 严重烫伤内毒素血症大鼠存在β-细胞功能损伤,NF-kB活化在胰岛β-细胞功能损伤中可能发挥着重要作用.
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NF-kB与肝脏缺血再灌注损伤的研究进展
核因子kappa B (NF- kB)是近年发现的重要的转录因子.研究表明,肝脏缺血再灌注时,NF-kB能够转录调节诸多编码炎症介质的基因.肝脏的缺血再灌注损伤是临床肝移植术后常见的病理生理过程之一,许多细胞因子参与了这一过程,如TNF-α、IL-1、ICAM-1、INOS等,近来许多研究表明这些细胞因子都受NF-kB的基因调控.目前较为一致的看法是肝缺血再灌注损伤过程中氧自由基等产物激活NF-kB,促使TNF-α、ICAM-1和INOS mRNA表达增强,导致肝缺血再灌注损伤.就NF-kB和肝脏缺血再灌注损伤之间的联系和作用作一综述.
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肿瘤坏死因子-α对膀胱癌细胞系中核转录因子kB的表达及对其调控基因的影响
目的探讨膀胱癌细胞系中核转录因子-kB(NF-kB)及其调控基因的表达以及药物刺激对其的影响.方法免疫细胞化学检测p65、p50、p52、c-Rel、RelB、IkBα、增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p65、p50、p52、c-Rel、RelB、IkBα、CyclinD1、白细胞介素(IL)-8、PCNA的mRNA水平.采用人类肿瘤坏死因子-α(TNF-α,20μg/L)刺激细胞观察检测指标的变化.结果在EJ、T24细胞系中均见p65、p50、p52、c-Rel、RelB、IkBα、PCNA等的蛋白和mRNA表达,以及CyclinD1、IL-8的mRNA表达,TNF-α(20μg/L)刺激后,NF-kB家族成员的核易位增加,各指标的mRNA表达水平也有不同程度的增强.结论膀胱癌细胞系中可见NF-kB家族的表达,TNF-α刺激后其调控基因的表达增强.
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脂多糖对核转录因子kB在人牙龈成纤维细胞中的激活作用及意义
目的:探讨核转录因子kB(NF-kB)在牙龈成纤维细胞(GF)中活性的变化及其在牙周病发生中的意义,探讨NF-kB在牙周病调控中的作用及途径.方法:采用免疫细胞化学染色法,观察NF-kB在GF中活性的变化.结果:以10 μg/mL的LDS作为有效刺激浓度刺激GF,6 h后NF-kB核转位达峰值:以10～100μg/mL浓度的LPS作用GF时,NF-KB激活程度不同,表明10-100 μg/mL浓度的LPS是NF-kB激活的有效浓度.结论:健康牙龈组织GF细胞中NF-KB处于非激活状态,LPS可诱导人GF细胞中NF-kB激活发生核转位,LPS通过调控NF-KB的激活调节炎症因子对牙周组织的破坏.
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辅激活因子SRC/p160家族与炎症相关转录因子的关系
SRC/p160(steroid receptor coactivator/p160)家族作为一类辅激活因子,可以辅助多种转录因子,包括炎症相关转录因子.如核转录因子kB,激活蛋白-1,过氧化物酶体增殖物激活受体-γ,糖皮质类固醇激素受体,进而在转录水平上调节多种基因的表达.SRC/p160家族的作用决定于上游的配体、信号通路和转录因子类型,并在不同的组织细胞中表现出一定的特异性及复杂性.而对SRC/p160家族与炎症相关转录因子关系的研究有利于更深入地了解机体对炎症相关基因转录的精细调节和炎症相关性疾病的可能机制.并为抗炎治疗提供新靶点.
