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传代培养对基于肽质量指纹谱的细菌识别稳定性的影响分析

张慧芳;陶晓霞;何利华;闫笑梅;王忱诚;张建中;肖迪

摘要: 目的 应用肽质量指纹谱技术对多次传代细菌进行识别,分析细菌传代对细菌识别能力的影响.方法 将幽门螺杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别连续传57、50、100代,金黄色葡萄球菌留取抗原.每一代新鲜培养菌和冻存抗原通过乙醇/甲酸法提取蛋白,采用肽质量指纹谱技术进行谱图采集和菌株鉴定.进一步采用NanoLC-MS/MS对幽门螺杆菌基于肽质量指纹谱识别的蛋白进行批量鉴定.结果 幽门螺杆菌、大肠埃希菌分别连续传57代和50代,采用肽质量指纹谱每代均能正确识别到种水平;金黄色葡萄球菌连续传100代,采用肽质量指纹谱每代新鲜菌株及冻存抗原均能正确识别到种水平,各代冻存抗原和新鲜菌株的肽质量指纹谱具有很好的一致性.幽门螺杆菌蛋白扫描分析,鉴定出206个蛋白,包括各种酶类(29.6%)、核糖体蛋白(15.5%)、外膜蛋白(10.7%)、假想蛋白(19.0%)、转运相关蛋白(2.0%)、其他蛋白(22.0%).结论 细菌连续传代和抗原冻存不影响肽质量指纹谱对菌株的正确识别,细菌的肽质量指纹谱具有传代稳定性.

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