重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定
摘要： 目的 分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-LI)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础.方法 通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T一1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.产物经GST蛋白纯化系统进行纯化后,用10%SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定.结果 经RT-PCR分离纯化的PD-L1 cDNA分子由645 bp构成,编码相对分子量约25 KD的蛋白,并与GST形成融合蛋白.GST-PD-L1融合蛋白相对分子量约46 KD.Western Blot结果显示,该蛋白能被兔抗GST和抗PD-L1抗体识别.结论 成功构建了PD-L1原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达.
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刺柏枝叶的化学成分研究
目的 研究柏科刺柏属植物刺柏Juniperus formosana Hayata.枝叶的化学成分.方法 采用硅胶、聚酰胺柱色谱、重结晶等方法进行分离和纯化,采用核磁共振波谱方法鉴定化合物的结构.结果 从刺柏枝叶的95％乙醇提取物中共分离纯化得到了9个单体化合物,分别鉴定为罗汉松脂素(I)、桧脂素(Ⅱ)、槲皮素(Ⅲ)、刺槐素(Ⅳ)、槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷(V)、山奈酚3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅵ)、穗花衫双黄酮(Ⅶ)、罗汉松双黄酮A(Ⅷ)和β-谷甾醇(Ⅸ).结论 化合物I、Ⅱ、Ⅳ～Ⅷ均为首次从该植物中分离得到.
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1HNMR指纹图谱识别不同产地的大花红景天
目的 采用1HNMR指纹图谱识别不同产地的大花红景天.方法 采用傅立叶变换NMR仪测定4个不同产地大花红景天的特征性全成分信息,得到1 HNMR指纹图谱,将图谱进行处理转化为数据矩阵,结合相似度评价和化学模式识别方法中的主成分分析(PCA)、聚类分析法(HCA)进行化学模式识别分析.结果 采用1HNMR指纹图谱结合化学模式识别法能够有效鉴别4个不同产地的大花红景天.结论 基于1 HNMR指纹图谱结合化学模式识别方法可作为一种分类及鉴别不同产地的大花红景天的方法.
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顶空气相色谱法测定异维A酸原料药中的10种残留溶剂
目的 建立顶空气相色谱法测定异维A酸原料药中10种残留溶剂的方法.方法 采用程序升温法,色谱柱为DB-624毛细管柱(30m×0.32 mm,1.8 μm),进样口温度200℃,氢火焰离子化检测器温度250 ℃,载气为氮气,流速2.0 mL· min-1,分流比5:1,顶空平衡温度90℃,平衡时间30 min,进样体积1.0 mL.结果 10种有机溶剂的分离较好,浓度在试验范围内与峰面积具良好的线性关系,r为0.9994～0.9999,回收率均在80％～120％,RSD均＜10％,检测限为0.098 ～4.17 μg·mL-1,定量限为0.33～13.91 μg·mL-1.结论 所用气相色谱法适用于异维A酸原料药中残留溶剂测定.
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伊贝母薄层鉴别用对照提取物的制备与应用
目的 制备伊贝母薄层色谱用对照提取物,探讨对照提取物替代对照品和对照药材在伊贝母药材质量控制中的应用.方法 采用HPD-100大孔吸附树脂制备薄层色谱用伊贝母对照提取物,从制备工艺优化、成分标定、含量测定和稳定性影响因素考察等方面探讨了薄层色谱用伊贝母对照提取物的制备,并应用于13批伊贝母药材的薄层色谱鉴定.结果 所制备的伊贝母对照提取物中总生物碱高达69％,以西贝碱和西贝碱苷两个主要成分为指标,该对照提取物与对照药材的薄层鉴别、HPLC图谱比对一致.结论 伊贝母对照提取物可替代相应的对照品和对照药材用于伊贝母药材的薄层鉴别,可为中药提取物的进一步应用与发展提供研究基础.
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铜铁共催化2-芳基丙烯酸酯的脱酯氧膦化反应
目的 建立一种通过2-芳基丙烯酸酯的脱酯氧膦化反应构建β-羰基膦酸酯的新方法.方法 在60℃、氧气条件下,以CuBr2/FeCl3作催化剂,用三乙胺作碱、二甲基亚砜为溶剂,2-芳基丙烯酸酯和亚磷酸酯发生脱酯氧膦化反应4h,以中等至较高的收率得到相应的目标产物.结果和结论 合成了一系列β-羰基膦酸酯,结构经1HNMR、”CNMR和13PNMR表征.该反应具有良好的底物普适性和官能团耐受性.
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离子色谱法测定硫辛酸注射液中的乙二胺
目的 采用离子色谱法测定硫辛酸注射液中乙二胺的含量.方法 采用RFICTM Ion Pac@CG17 (50 mm×4 mm)、CS17(250 mm ×4 mm)阳离子交换色谱柱,以15 mmol·L-1甲基磺酸-乙腈(90:10)为流动相,流速0.8 mL·min-1,检测器为电导检测器(带抑制器CERS 500,4 mm),进样体积10μL.结果 乙二胺的线性范围为33.48～ 133.92μg·mL-1(r=0.9988),平均回收率为98.65％,RSD=0.98％.结论 所用方法简便、准确,可用于该制剂中乙二胺的控制,同时,还可用于同类产品中乙二胺的测定.
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巴特日七味丸不同部位提取物抗炎镇痛活性的筛选
目的 筛选蒙药巴特日七味丸不同提取物的抗炎活性,并考察活性部位的镇痛作用.方法 采用对小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响和脂多糖(LPS)刺激RAW 264.7细胞释放肿瘤坏死因子、白介素6的影响等方法筛选巴特日七味丸的抗炎活性部位;采用冰乙酸致小鼠疼痛和小鼠热刺激反应考察巴特日七味丸活性部位的镇痛作用.结果 巴特日七味丸乙酸乙酯-正丁醇部位提取物的抗炎活性较强.结论 巴特日七味丸不同部位提取物均具有抗炎活性,其中乙酸乙酯-正丁醇部位的活性较强,且与巴特日七味丸水提物的镇痛作用无显著性差异,可能为巴特日七味丸的有效部位.
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顶空气相色谱法测定甲钴胺中的基因毒性杂质
目的 采用顶空气相色谱法测定甲钴胺中的基因毒性杂质.方法 采用CP-Sil 8 CB毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,0.5 μm),程序升温(起始温度40℃、维持6 min,以60℃·min-1升温至200℃、维持3 min),顶空瓶平衡温度70℃,平衡时间60 min.结果 回归方程为:Y=-7.813×10-4X +5.4×10-4(r =0.9996),平均回收率为101.8％,RSD=2.87％.结论 所用方法专属性强、准确、灵敏,可用于甲钴胺中基因毒性杂质的检测.
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HPLC测定吡硫翁锌软膏剂中的吡硫翁锌
目的 采用HPLC法测定吡硫翁锌软膏剂中吡硫翁锌的含量.方法 用0.1 mol· L-EDTA溶液溶解吡硫翁锌,用超滤法预处理样品,采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％磷酸(40:60),流速1.0mL· min-,检测波长270 nm,柱温20℃.结果4.9～ 29.4 μg·mL-1吡硫翁锌的线性关系良好,回归方程为:Y=9.78×104X-3.50×104(r2=0.9999);低检出浓度为1.96 μg· mL-1;其平均回收率为101.1％.结论 所用方法操作简便、结果准确,可用于测定吡硫翁锌软膏剂中吡硫翁锌的含量.
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石墨炉原子吸收法测定枸橼酸铁铵中的铅
目的 采用石墨炉原子吸收光谱法测定枸橼酸铁铵中铅的含量.方法 采用硝酸消化,灰化温度850℃,原子化温度1600℃.结果 铅的检出限为0.5 ng·mL-1,标准曲线为:Y=2.2×10-3X +2.9×10-3(r =0.9999),精密度试验的RSD＜ 1％;平均回收率为101.31％,RSD =4.88％ (n =9).结论 所用方法灵敏度高、选择性好、精密度和准确度均符合要求,可用于枸橼酸铁铵中铅的含量测定.
