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抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎患者外周血滤泡辅助 T细胞的变化及其临床意义初探
目的 初步探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎(MPO-AAV)患者外周血滤泡辅助T细胞(Tfh)的变化及其与病情活动性间的关系.方法 纳入38例初发未治疗的MPO-AAV患者和38例健康对照者.流式细胞术检测所有受试者外周血Tfh及其诱导共刺激分子(ICOS)和程序死亡蛋白-1(PD-1)表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测所有受试者外周血抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体(MPO-ANCA);评估每例患者伯明翰血管炎活动度评分(BVAS).结果 与健康对照者比,MPO-AAV者外周血CD4+T细胞中Tfh、ICOS+Tfh、PD-1+Tfh细胞的比例显著高于健康对照者[Tfh:(25.9±3.8)％比(21.0±5.3)％,P<0.001;ICOS+Tfh:(1.8±0.8)％比(0.8±0.5)％,P<0.001;PD-1+Tfh:(10.2±2.8)％比(8.2±2.2)％,P=0.001].MPO-AAV者外周血Tfh胞膜的ICOS、PD-1表达水平显著高于健康对照者(ICOS:59.6±10.0比49.2±6.9,P<0.001;PD-1:532.6±104.2比485.1±73.4,P=0.025).MPO-AAV者中,外周血Tfh比例分别与ICOS+Tfh比例(r=0.407,P=0.011)、ICOS表达(r=0.705,P<0.001)、MPO-ANCA水平(r=0.737,P<0.001)、BVAS(r=0.648,P<0.001)呈正相关,外周血Tfh的ICOS表达分别与ICOS+Tfh比例(r=0.388,P=0.016)、MPO-ANCA水平(r=0.645,P<0.001)、BVAS(r=0.653,P<0.001)呈正相关,外周血Tfh的PD-1表达强度仅与PD-1+Tfh比例呈正相关(r=0.473,P=0.003).结论 MPO-AAV患者外周血Tfh比例增高,活性增强,可能通过增加MPO-ANCA的产生,加重MPO-AAV病情.外周血Tfh及其表达的ICOS可能是探索MPO-AAV治疗的潜在新靶点.
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重组人PD-L1在大肠杆菌BL-21中的表达、纯化和鉴定
目的 分离纯化人程序死亡蛋白-1(PD-LI)基因,制备重组人PD-L1蛋白,为进一步研究PD-L1在肿瘤免疫逃逸中的作用和机制建立基础.方法 通过RT-PCR分离纯化人PD-L1基因,并将其克隆到原核表达质粒pGEX-4T一1中,经酶切,测序鉴定分析后,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达.产物经GST蛋白纯化系统进行纯化后,用10%SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定.结果 经RT-PCR分离纯化的PD-L1 cDNA分子由645 bp构成,编码相对分子量约25 KD的蛋白,并与GST形成融合蛋白.GST-PD-L1融合蛋白相对分子量约46 KD.Western Blot结果显示,该蛋白能被兔抗GST和抗PD-L1抗体识别.结论 成功构建了PD-L1原核表达载体,并在大肠杆菌BL21中获得高效表达.
