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大鼠海马神经干细胞的分离培养与免疫荧光鉴定
目的 分离培养新生SD大鼠神经干细胞,并对其生物学特性进行鉴定.方法 采用无血清培养联合应用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对大鼠海马神经干细胞分离培养,采用免疫荧光的方法检测神经干细胞的nestin抗原.结果 从新生大鼠海马齿状回分离的细胞群可不断增殖形成细胞克隆球,并且呈nestin阳性表达,具有多向分化能力.结论 分离培养的细胞是中枢神经系统的干细胞.
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一种高纯度原代神经元培养和高效率转染的方法
背景:神经元的培养和细胞转染技术是在体外研究神经元生长发育及生理病理机制的重要手段,但目前原代培养的皮质神经元往往纯度不高、转染效率不高.目的:建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法.方法:无菌条件下分离新生1 d SD大鼠大脑皮质,经0.25％的胰蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以5×109 L-1细胞浓度接种至含神经元专用培养基的24孔细胞培养板进行原代培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化,使用神经元特异性标志物Tuj1和MAP2对培养的细胞进行鉴定;利用人工脂质体转染神经元,观察神经元转染效率.结果与结论:①体外培养的原代神经元具有较高的纯度,在培养第7天神经元特征明显,突起相互接触形成神经元网络,并表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP2;利用人工脂质体转染神经元,转染效率较高;②采用该方法进行原代神经元培养,能够获得稳定的、高纯度的原代神经元;人工脂质体亦可高效率转染原代神经元.
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人未成熟朗格汉斯细胞的分选及鉴定
目的 分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC).方法 把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ (dispase Ⅰ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异性的分子标志物,应用流式细胞仪分选获得人CD3-CD14-CD1a+CD45+LC,采用免疫荧光技术检测CD207的表达对其进行鉴定,并用台盼蓝染色检测其活力.结果 分选得到未成熟LC,纯度为91.31％,平均存活率为93.16％.结论 成功分选获得活力好、纯度高的未成熟人LC.
