首页 > 文献资料
-
应用逆转录-环介导等温扩增技术检测乙型肝炎病毒RNA方法的建立
目的 建立逆转录-环介导等温扩增(reverse transcription-loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)方法 检测乙型肝炎病毒(HBV)RNA,为乙型肝炎抗病毒治疗安全停药的研究提供技术支持.方法从NCBI数据库下载HBV A～D型,通过序列对比选出S区保守序列设计LAMP引物;提取HBV血清样本RNA与DNA,用RT-LAMP、LAMP进行检测;通过对非特异模板扩增实验验证扩增特异性;通过倍比稀释的HBV-RNA模板,用RT-PCR法与RT-LAMP法检测以评价灵敏性.结果 经过特异性实验证明LAMP特异性高,未检测到非特异性扩增.RT-LAMP的灵敏性为5×103 IU/ml,RT-PCR的灵敏性为5×101 IU/ml.用RT-LAMP与LAMP检测RNA与DNA证明了HBV-DNA检测不到后,HBV-RNA仍存在.结论 本研究针对HBV S区保守序列,设计了针对我国主要的4种HBV基因型(A、B、C、D)LAMP通用引物,从而建立了检测HBV-RNA的RT-LAMP新技术,有助于为应用核苷类似物的乙型肝炎患者安全停药标志物的研究提供技术支持.
-
乙型肝炎病毒核心蛋白区突变与隐匿性乙型肝炎病毒感染的相关性
目的:探索乙型肝炎病毒核心蛋白区(C区)变异在隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)中的作用.方法:从2例献血者OBI的样品中扩增得到C区基因构建乙型肝炎病毒C区突变型质粒,检测各突变型质粒在HuH7细胞中HBsAg和HBeAg的水平.Balb/c小鼠高压尾静脉注射突变型质粒检测其血清HBsAg和HBeAg的水平,免疫组织化学检测肝组织HBcAg的表达及分布情况,RT-PCR检测肝组织HBV-RNA的水平.结果:与野生型相比,C区突变型显著性下调HBeAg和HBcAg的表达水平,对HBsAg表达水平和HBV-RNA的水平无显著性作用.结论:OBI患者体内的乙肝病毒C区变异改变HBV病毒的HBeAg和HBcAg的表达水平,对OBI的形成具有重要作用.
关键词： 隐匿性乙型肝炎病毒感染 HBcAg HBsAg HBeAg HBV-RNA
