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香烟烟雾对小鼠肺泡巨噬细胞 RIG-I 样受体功能影响的研究
目的：探讨吸烟对肺泡巨噬细胞 RIG-I 样受体介导的信号传导功能。方法制备香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE),用病毒模拟物 Poly(I∶C)及不同浓度 CSE 单独或者联合刺激小鼠肺泡巨噬细胞(MH-S)。收集细胞并抽提 RNA,用实时荧光定量 PCR 检测 RIG-I、MDA-5、干扰素β(IFN-β)、IL-1及 IL-6 mRNA 表达水平。结果单独的 CSE 刺激能引起 IL-1、IL-6 mRNA 等炎症细胞因子的水平升高,而对 RIG-I、MDA-5及 IFN-βmRNA 几乎无影响；CSE 能够抑制 Poly(I∶C)刺激引起的 RIG-I、MDA-5受体及分子 IFN-β、IL-1、IL-6增高现象,尤其对 IFN-β mRNA 的抑制为明显,并且CSE 的这种抑制作用与其浓度呈正相关。结论单独 CSE 刺激 MH-S 细胞可以引起炎症因子的表达水平升高,Poly(I∶C)刺激引起的 RIG-I 样受体抗病毒信号通路中相关受体、IFN 及炎症因子表达水平增高现象可以被 CSE 抑制,巨噬细胞对病毒防御功能的减低可能与吸烟抑制 RIG-I 样受体信号通路功能有关。
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Toll样受体3对胰岛β细胞增殖及胰岛素分泌的影响
目的：通过 Toll 样受体3（TLR3）激动剂 Poly（I ∶ C）（PIC）刺激小鼠胰岛β细胞，观察 TLR3对细胞增殖，炎性因子表达及胰岛素分泌的影响。方法用小鼠胰岛β细胞株 NIT-1为研究对象，首先测定胰岛素释放以鉴定胰岛β细胞生物活性，再分别用不同浓度 PIC（0．1、1、10μg/mL）刺激 NIT-1细胞，CCK-8法检测细胞增殖；酶联免疫法（ELISA）检测炎性因子白细胞介素-1β（IL-1β），IL-6及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达；葡萄糖刺激下的胰岛素释放试验（GSIS）测定 NIT-1细胞分泌胰岛素功能。结果 NIT-1细胞株呈贴壁、成簇及多边形生长；胰岛β细胞生物活性较好。与对照组相比，用不同浓度 PIC（0．1、1、10μg/mL）刺激时，NIT-1细胞增殖明显受到抑制，且呈剂量依耐性（P＜0．05）。 PIC 刺激组炎性因子（IL-1β，IL-6及 TNF-α）表达明显高于对照组（P＜0．05）。 PIC 刺激可明显抑制高糖介导下的 NIT-1细胞分泌胰岛素（P＜0．05）。结论 PIC 激活胰岛β细胞 TLR3，通过释放 IL-1β、IL-6及 TNF-α，抑制胰岛β细胞生长及胰岛素分泌。
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Al(OH)3、ISA206及Poly(I∶C)免疫佐剂对灭活口蹄疫140S抗原免疫效果的影响
目的 选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力.方法 以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄疫完整病毒粒子抗原.在蔗糖密度梯度定量后分别与Al(OH)3、ISA206及Poly(I∶C)3种佐剂配合制作口蹄疫灭活疫苗.疫苗经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过检测抗体效价评价机体产生的体液免疫反应.通过检测体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后产生的细胞因子以及淋巴细胞增殖实验评价机体产生的细胞免疫反应.结果 ISA206口蹄疫灭活苗和Poly(I∶C)口蹄疫灭活苗诱导小鼠产生的抗体效价较高；通过体外刺激实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后,产生的IFN-γ和IL-4含量高；通过淋巴细胞增殖实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力强(P＜0.05).结论 ISA206佐剂在配合灭活口蹄疫140S完整病毒粒子进行免疫时所表现的免疫效力高.
