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食管鳞癌组织中 PI3K 和 caspase-3的表达及其临床意义
目的：研究 PI3K 和 caspase-3在食管鳞癌组织(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中的表达及其与食管肿瘤发生、发展与转移的关系。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶链结(SP)法检测24例正常食管黏膜、94例食管鳞癌组织中 PI3K 和 caspase-3的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果 PI3K 在食管鳞癌中的表达高于正常食管黏膜(P <0.01)；PI3K 蛋白在高中分化鳞癌中表达低于低分化鳞癌,随着浸润深度和临床分期的增加,其表达阳性率增高,在淋巴结转移阳性组的表达高于阴性组(92.0% vs 47.7%, P <0.01)；而 caspase-3阳性表达与 PI3K 相反,高中分化鳞癌中表达高于低分化鳞癌,随着浸润深度和临床分期的增加,其表达阳性率降低,在淋巴结转移阳性组的表达低于阴性组(38.0% vs 68.2%,P <0.01)；PI3K 与 caspase-3表达有关联(r =-0.230,P <0.05)。结论 PI3K 高表达和 caspase-3低表达与食管鳞癌发生发展及侵袭转移存在协同作用,是反映食管鳞癌生物学行为的重要指标。
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二氯乙酸钠对人骨肉瘤 MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响
目的：观察二氯乙酸钠（sodium dichloroacetate，DCA －Na）对人骨肉瘤 MG63细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法：将对数生长期的 MG63细胞随机分为对照组和低、中、高浓度 DCA －Na 组，对照组不加 DCA －Na，低、中、高 DCA －Na 组加入 DCA －Na （终浓度分别为50μg·mL －1、100μg·mL －1、200μg·mL －1），并设1个只加等量培养基不加细胞和 DCA －Na 的空白组。分别在干预24 h、48 h、72 h 后，采用 Cell Counting Kit －8细胞活性检测试剂盒分光光度法检测 MG63细胞增殖情况，测定光密度（optical density，OD），计算低、中、高 DCA －Na 组细胞增殖抑制率，细胞增殖抑制率＝[1－（DCA －Na 组 OD 值－空白组 OD 值）／（对照组OD 值－空白组 OD 值）]×100％；分别采用 Caspase －3活性检测试剂盒分光光度法和 Annexin V －FITC 细胞凋亡检测试剂盒流式细胞法检测 MG63细胞 Caspase －3酶活性情况和细胞凋亡情况；并在干预48 h 后采用 Transwell 实验检测 MG63细胞迁移情况。结果：①细胞增殖检测结果。干预后，低、中、高 DCA －Na 组 MG63细胞增殖抑制明显，且随干预时间的延长，3组细胞增殖抑制率均呈上升趋势。各时间点间 MG63细胞增殖抑制率差异有统计学意义（F ＝847．080，P ＝0．000），存在时间效应；干预24 h、48 h、72 h 后，低、中、高 DCA －Na 组 MG63细胞增殖抑制率的组间差异均有统计学意义，且低 DCA －Na 组＜中 DCA －Na 组＜高DCA －Na 组[（10．802±3．000）％，（18．792±2．261）％，（27．080±3．133）％，F ＝2．795，P ＝0．000；（13．098±1．299）％，（25．215±2．676）％，（44．382±2．397）％，F ＝4．362，P ＝0．000；（14．728±1．177）％，（35．297±4．757）％，（64．227±4．549）％， F ＝5．896，P ＝0．000]；3组间 MG63细胞增殖抑制率总体比较，差异有统计学意义，存在分组效应（F ＝296．412，P ＝0．000）；时间因素与分组因素之间存在交互效应（F ＝75．678，P ＝0．000）。②Caspase －3酶活性检测结果。对照组 MG63细胞 Caspase －3酶活性无明显变化，干预后低、中、高 DCA －Na 组 MG63细胞 Caspase －3酶活性均呈上升趋势。各时间点间 MG63细胞 Caspase －3酶活性的差异有统计学意义（F ＝1480．792，P ＝0．000），存在时间效应；干预24 h、48 h、72 h 后，4组间 MG63细胞 Caspase －3酶活性的差异均有统计学意义，且对照组＜低 DCA －Na 组＜中 DCA －Na 组＜高 DCA －Na 组（0．027±0．003，0．143±0．005，0．153±0．008，0．161±0．003，F ＝2．320，P ＝0．000；0．035±0．003，0．174±0．004，0．184±0．007，0．253±0．001，F ＝1．014，P ＝0．000；0．031±0．004，0．246±0．006，0．275±0．003，0．371±0．004，F ＝1．000，P ＝0．000）；4组间 MG63细胞 Caspase －3酶活性总体比较，差异有统计学意义，存在分组效应（F ＝624．975，P ＝0．000）；时间因素与分组因素之间存在交互效应（F ＝94．579，P ＝0．000）。③流式细胞法细胞凋亡检测结果。对照组 MG63细胞凋亡率无明显变化，干预后低、中、高浓度 DCA －Na 组 MG63细胞凋亡率均呈上升趋势。各时间点间 MG63细胞凋亡率的差异有统计学意义（F ＝359．645，P ＝0．000），存在时间效应；干预24 h、48 h、72 h 后，各组间 MG63细胞凋亡率的差异均有统计学意义，且对照组＜低 DCA －Na 组＜中 DCA －Na 组＜高 DCA －Na 组[（2．554±0．427）％，（10．708±2．012）％，（20．857±2．531）％，（27．312±2．140）％，F ＝6．733，P ＝0．000；（1．748±0．202）％，（18．604±2．721）％，（29．471±1．605）％，（36．873±2．734）％，F ＝9．292，P ＝0．000；（1．944±0．112）％，（24．071±3．921）％，（30．050±3．921）％，（38．211±1．721）％，F ＝8．237，P ＝0．000]；4组间 MG63细胞凋亡率总体比较，差异有统计学意义，存在分组效应（F ＝46．627，P ＝0．000）；时间因素与分组因素之间存在交互效应（F ＝7．012，P ＝0．000）。④细胞迁移检测结果。干预48 h后，4组迁移细胞数[显微镜每个视野下（×200）]的组间差异有统计学意义[（84．45±10．45）个，（74．56±9．45）个，（65．41±5．21）个，（40．21±4．52）个，F ＝148．243，P ＝0．000）]；低、中、高 DCA －Na 组迁移细胞数均少于对照组（P ＝0．017，P ＝0．001，P ＝0．000），且低 DCA －Na 组＞中 DCA －Na 组＞高 DCA －Na 组（P ＝0．012，P ＝0．001，P ＝0．000）。结论：DCA －Na 可抑制人骨肉瘤 MG63细胞的增殖，增强 MG63细胞 Caspase －3酶活性，诱导和促进 MG63细胞凋亡，抑制 MG63细胞的迁移；且浓度越高、干预时间越长，其影响越明显。
