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荔枝核总黄酮改善胆总管结扎大鼠胆汁淤积症状的研究
目的：观察荔枝核总黄酮（TFL）对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能p16蛋白、3型胶原（PC3）和Ⅰ型胶原（PCⅠ）的影响。方法40只大鼠随机分为假手术（SO）组、胆总管结扎（BDL）组、TFL组和水飞蓟宾胶囊（SIL）组。SO组、BDL组生理盐水灌胃5 mL/(kg·d)，TFL组TFL灌胃200 mg/(kg·d)，SIL组SIL灌胃5 mL/(kg·d)，均持续4周。取血清检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、直接胆红素（BILD）、总胆红素（BILT）。取肝组织行HE、Masson染色；Western blot检测p16、PC3、PCⅠ的表达。结果 SO组ALT（IU/L：44.6±8.0）、AST（IU/L：103.8±18.1）、BILD（μmol/L：0.76±0.28）、BILT（μmol/L：1.48±0.35）值低；BDL组ALT（147.4±86.3）高于TFL组（92.9±47.3）， AST（362.7±106.6）高于TFL组（290.1±171.7）和SIL组（250.2±54.9），BILD（99.71±40.87）低于SIL组（137.01±38.86）；TFL组BILD（81.48±47.50）、BILT（106.64±61.04）均低于SIL组（均P＜0.05）。TFL组存在少量新生胆管，细胞水肿变性不明显，少量炎细胞浸润及胶原沉积，较BDL组肝纤维化程度明显改善。SIL组肝汇管区新生胆管较TFL组明显，有细胞变性水肿，炎细胞浸润，汇管区有纤维间隔，程度较BDL组轻，汇管区有胶原沉积。BDL组p16、PC3、PCⅠ蛋白表达高于TFL组，PC3蛋白低于SIL组，PCⅠ蛋白高于SIL组（均P＜0.05），p16蛋白与SIL组差异无统计学意义；TFL组PC16、PC3蛋白表达低于SIL组（P＜0.05），PCⅠ蛋白与SIL组差异无统计学意义。结论 TFL可改善胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝功能，减轻肝组织纤维化；其机制可能与抑制肝组织p16、PC3、PCⅠ蛋白表达有关。
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miR-27a-3p通过阻断Wnt3a/β-catenin途径抑制大鼠肺纤维化
目的 探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化(PF)的影响及分子机制.方法 雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、miR-27a-3p激动剂(miR-27a-3p agomir)组和miR-27a-3p拮抗剂(miR-27a-3p antagomir)组,每组15只.经气管内注入博莱霉素A5建立PF模型,给药后次日分别予生理盐水、miR-27a-3p agomir、miR-27a-3p antagomir尾静脉注射,每3d注射1次,共9次.第28天收集血液,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平;处死大鼠,取肺组织,HE染色和Masson染色评价PF病变程度,实时荧光定量PCR检测miR-27a-3p、1型胶原蛋白(col)、Col3的mRNA水平,Western blot法检测Col1、Col3、Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平.结果 miR-27a-3p agomir处理明显增加肺组织miR-27a-3p表达,miR-27a-3p antagomir则降低miR-27a-3p表达,提示miR-27a-3pagoir/antagomir转染效率较高.与对照组相比,miR-27a-3p agomir显著减轻大鼠肺泡炎症和PF程度,而miR-27a-3p antagomir则明显加重大鼠肺泡炎症和PF程度.miR-27a-3p agomir组血清P1CP、P3NP水平降低、下调肺组织Col1、Col3、Wnt3a、β-catenin水平,miR-27a-3p antagomir组则作用相反.结论 miR-27a-3p通过抑制Wnt3a/β-catenin信号通路,下调Col1、Col3表达,发挥抗PF作用.
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1,25-(OH)2-VD3下调糖尿病肾病肾脏组织p38MAPK和胶原蛋白的表达
目的 研究2型糖尿病肾间质纤维化中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、Ⅲ型胶原蛋白(Col3)和Ⅳ型胶原蛋白(Col4)表达,及1,25-(OH)2-VD3对其表达的影响;探讨p38MAPK与Col3和Col4表达的相关性.方法 以高糖高脂饮食联合30mg/kg链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠2型糖尿病模型.将60只大鼠随机平均分为对照组、模型组、1,25-(OH)2-VD3治疗组[建模后给予6 ng/(100g·d)1,25-(OH)2-VD3治疗]、胰岛素组(建模后给予2～3U胰岛素治疗).干预8周后检测4组血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、24h蛋白尿水平;过碘酸希夫反应(PAS)染色观察肾脏病变情况;采用Western blot及免疫组织化学染色检测大鼠肾间质p38MAPK、Col3和Col4的表达;采用Spearman法进行相关性分析.结果 与模型组相比,1,25-(OH)2-VD3治疗组和胰岛素治疗组血清肌酐、尿素氮、24h蛋白尿和肾间质受损面积均降低;与对照相比,模型组p38MAPK、Col3和Col4水平增加,1,25-(OH)2-VD3治疗组和胰岛素治疗组明显降低;相关性分析发现24h蛋白尿与p38MAPK、Col3和Col4免疫组织化学的结果呈正相关,p38MAPK的表达与Col3和Col4表达呈正相关.结论 2型糖尿病大鼠肾间质组织p38MAPK、Col3和Col4表达上调,1,25-(OH)2-VD3可能通过p38MAPK下调Col3、Col4的表达改善糖尿病肾病肾组织纤维化.
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大黄素通过抑制TGF-β1/ADAMTS-1通路的活性减轻大鼠肺纤维化
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/含1型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)信号通路在大黄素抗肺纤维化中的作用.方法 按随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为6组:正常对照组、假手术组、模型组、大黄素低剂量组(20 mg/kg)、大黄素高剂量组(80 mg/kg)和泼尼松组(5 mg/kg),每组10只大鼠.假手术组大鼠气管内注人生理盐水,而后4组大鼠气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,次日起,大黄素低、高剂量组大鼠分别以20 mg/kg、80 mg/kg大黄素2 mL灌胃,泼尼松组予5 mg/kg醋酸泼尼松2 mL灌胃,其余3组则以生理盐水2mL灌胃.造模后第28天处死大鼠,取血并分离肺组织.常规HE和Masson染色观察肺组织病理改变,荧光实时定量PCR检测各组大鼠肺组织中TGF-β1、ADAMTS-1、1型胶原蛋白(Col1)、Col3 mRNA的水平,Western blot法检测肺组织TGF-β1、ADAMTS-1、Col1、Col3蛋白水平,ELISA测定血清中1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平.结果 与模型组比较,各药物处理组肺泡炎及肺纤维化程度明显减轻.与正常对照组、假手术组比较,模型组肺组织TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平以及血清P1CP、P3NP浓度升高,而肺组织ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平降低.与模型组相比,给予低、高剂量大黄素或泼尼松处理后,肺组织TGF-β1、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平及血清P1 CP、P3NP浓度则下调,肺组织ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上调.与大黄素低剂量组相比,大黄素高剂量组和泼尼松组上述指标明显改善,但后二者相比无明显差异.结论 大黄素抑制TGF-β1/ADAMTS-1途径的活性引起肺组织Col1、Col3降解增多,是其抗肺纤维化的重要机制.
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上调miR-21表达促进肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成
目的 探讨miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中的表达及其在肺成纤维细胞增殖、转分化、胶原蛋白合成中的作用.方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和模型组(n=25).经气管内注入博莱霉素A5建立肺纤维化模型,分别于第3、7、14、28、56天随机处死5只小鼠,而对照组于第56天全部处死作为总体对照,采用荧光实时定量PCR测定肺组织中miR-21表达.另外,NIH3T3肺成纤维细胞分别予LipofectamineTM 2000转染试剂(空白对照组)以及miR-21阴性对照物、模拟物、抑制物处理,通过MTT法检测细胞增殖能力,应用荧光实时定量PCR和Western blot法分别检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、含1型血小板结合蛋白基序的去整合素和金属蛋白酶1(ADAMTS-1)、1型胶原蛋白(Col1)、3型胶原蛋白(Col3)mRNA与蛋白表达情况.结果 模型组第7～56天,肺组织中miR-21表达水平明显高于对照组,第28天达到高峰.在共同培养24、48、72、96 h后,miR-21模拟物组细胞活力较空白对照组增加,而miR-21抑制物组细胞活力较空白对照组降低.与空白对照组比较,miR-21模拟物组α-SMA、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平升高,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平减少;然而miR-21抑制物组α-SMA、Col1、Col3 mRNA与蛋白表达水平下降,ADAMTS-1 mRNA与蛋白表达水平上升.阴性对照组上述指标与空白对照组比较,无显著性差异.结论 miR-21在肺纤维化小鼠肺组织中表达上调,miR-21高表达可促进肺成纤维细胞增殖、转分化以及胶原蛋白的合成.
