首页 > 文献资料
-
大鼠脑出血后血肿周围脑水肿与Mip1表达的关系
目的：通过分析大鼠脑出血（ICH）后血肿周围脑组织中Mip1的表达，探索Mip1对脑水肿的保护作用。方法90只雄性SD大鼠随机分为假手术组（n=15）和ICH组（n=75），ICH组再根据造模后脑出血时间均分为ICH 6h、12h、1d、3d和7d组。应用自体股动脉血液建立大鼠尾状核脑出血模型。于上述时点断头处死大鼠，取血肿周围脑组织。采用HE染色观察血肿周围脑组织病理形态学变化，干/湿质量法测定脑含水量（BWC），免疫组化法检测Mip1蛋白的表达。结果脑出血后血肿周围区域神经元胞体明显变小，胞浆淡染，胞质内尼氏体明显减少，细胞周围出现水肿裂隙，而假手术组脑组织神经细胞形态未见明显变化。脑出血6h后脑含水量逐渐增高，在3d时达高峰（均P＜0.05），7 d时大致恢复正常（P＞0.05）。大鼠脑出血后脑组织血肿周围有大量胞质或胞核呈棕色的Mip1阳性细胞分布，脑出血6 h后Mip1蛋白表达水平较假手术组明显升高（均P＜0.05），至7 d时大致恢复正常（P＞0.05）。结论脑出血后血肿周围脑组织中Mip1高表达，并与脑水肿进展趋势基本一致，提示活化的Mip1可能参与出血性脑水肿的病理过程。
-
Mip1对大鼠心肌细胞凋亡基因Bid转录调控作用的初探
目的:研究转录因子Mip1对大鼠心肌细胞H9C2凋亡相关基因Bid的转录调控作用.方法:以H9C2细胞基因组DNA为模板,扩增Bid核心启动子片段,将其克隆入荧光素酶报告基因质粒PGL3-Basic中,构建重组载体,并采用双酶切法、PCR法及基因测序对其进行鉴定.用脂质体转染法将该载体转入Mip1不同程度过表达的H9C2细胞,检测该细胞Bid基因启动子区的转录活性.结果:成功克隆Bid基因启动子区,双酶切、PCR和基因测序均显示PGL3-Basic-Bid promoter重组载体构建成功.荧光素酶相对活性检测显示在H9C2细胞中,随着Mip1转入的增多,Bid启动子区转录活性逐渐下降.结论:Mip1作为一个新的转录抑制因子,可以下调凋亡基因Bid的转录.
-
新的锌指蛋白Mip1的DNA结合序列的筛选
目的 筛选一个新的锌指蛋白Mip1的DNA结合位点.方法 将Mip1 cDNA全长克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1构建了Mip1的原核表达质粒pGEX-Mip1.用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-Mip1融合蛋白.通过固定化的GST-Mip1,从寡核苷酸文库中俘获Mip1的结合的寡核苷酸片段;将所得寡核苷酸片段插入T-载体,通过测序、序列比对得到DNA结合位点.结果 锌指蛋白Mip1的融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达,能与固定化还原性谷胱甘肽很好地亲和而得到纯化;用固定化的Mip1融合蛋白俘获到了其结合的寡核苷酸序列,通过测序、序列比对,得到了Mip1的DNA结合位点.结论 Mip1的DNA结合位点的核心序列为G/TCCTA,Mip1的DNA结合位点的成功确定为Mip1功能的深入研究打下了基础.
