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重组DNA技术的医学研究思路
重组DNA技术作为医学分子生物学的一门重要技术,目前已经广泛应用于医学各个领域,在生物制药、基因诊断与治疗、遗传病的防治等方面发挥了巨大作用.因此本文就重组DNA技术的概念、过程及医学研究应用和研究思路作一简单总结.
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基因诊断方法的研究与进展
基因诊断是利用分子遗传学技术在DNA或RNA水平上对某一基因进行突变分析,从而对特定疾病进行诊断.基因诊断因其直接诊断性、高特异性、灵敏性、早期诊断性弥补了表型诊断的不足而被广泛应用.基因诊断也被应用于组织工程的相关领域,如干细胞移植及器官移植的供受体配型,皮肤组织工程等研究中.本文主要从核酸分子杂交、聚合酶链反应及相关技术、DNA序列测定、DNA芯片、连锁分析等方面对基因诊断方法研究进展进行了综述,分析其各自的优缺点,并在此基础上提出了对基因诊断方法研究前景的展望.相信随着分子生物学和分子遗传学的飞速发展必将极大的促进基因诊断技术的进步.以基因诊断为基础的基因治疗也将成为人类治疗自身疾病的主流技术.
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流感疫苗的现状与前景
本文介绍了流感疫苗的现状和开发前景.冷适应活疫苗已在美国以外地区数百万人中应用,目前正准备向美国食品和药物管理局提出申请.其他第二代活疫苗正在研究和在动物中进行试验,并将进行人体研究.新型佐剂和重组DNA技术方面的进展将会改变流感和其他传染病疫苗学的前景.
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遗传性脊髓小脑性共济失调致病基因病理核苷酸重复序列检测方法的研究
目的 建立遗传性脊髓小脑性共济失调(SCA)亚型中核苷酸重复序列稳定、准确、直观的检测技术方法和平台. 方法 运用荧光聚合酶链反应、8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管凝胶电泳、重组DNA结合直接测序等技术对50例诊断为SCA3/MJD患者的CAG三核苷酸病理重复次数进行检测,并对运用毛细管凝胶电泳和重组DNA两种方法得到的不同的CAG病理重复次数进行对比分析. 结果 50例8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为SCA3/MJD的患者,毛细管凝胶电泳检测方法得到的CAG三核苷酸病理重复次数范围为63～74次,平均(69.56±2.12)次;重组DNA结合直接测序得到的CAG三核苷酸病理重复次数范围为67～80次,平均(73.72±3.29)次.毛细管凝胶电泳计算所得到的CAG三核苷酸病理重复次数有减少的趋势,和应用重组DNA技术得到的结果相比差异有统计学意义(t=-9.610,P=0.000). 结论 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管凝胶电泳可以对核苷酸重复序列进行初步筛选,终重复核苷酸序列的确定仍需要直接测序;重组DNA结合直接测序技术是检测SCA各亚型核苷酸重复次数和分析核苷酸多态性的一种稳定、准确和直观的技术方法.
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应用重组DNA技术检测MJD1基因CAG三核苷酸重复
有的SCA3/MJD患者和大部分正常人MJD1基因CAG三核苷酸重复序列包含两个CAA和一个AAG变异,在CAG三核苷酸重复序列末尾靠近3'端方向存在GGG/CGG的多态变化,GGG一般存在于CAG重复次数较少的正常人群,而CGG多存在于SCA3/MJD患者.结论 重组DNA技术可以稳定准确、直观的检测MJD1基因的CAG三核苷酸重复次数,是诊断SCA3/MJD和分析CAG三核苷酸多态性主要的技术方法.
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2型腺伴随病毒基因治疗载体的构建
目的构建一种适用于中枢神经系统疾病的基因治疗载体。方法以野生型2型腺伴随病毒(AAV-2)质粒pssv9int-及逆转录病毒载体质粒plxsn为基本元件，利用重组DNA技术，构建了一种通用型AAV载体质粒pssHG-Neo。结果该质粒除含有必备的原核细胞复制子及Ampr筛选基因外，还含有真核细胞筛选基因--Neor及供插入目的基因的多克隆位点(MCS)，在MCS的上游为逆转录病毒的长末端重复序列(5'LTR)，具有启动子的功能，启动定向插入到MCS的外源目的基因。质粒中的AAV反向末端重复序列(ITR)具有定点整合于人基因组19号染色体S1位点的特点。结论 AAV载体是具有广阔前景的基因治疗载体。
