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EBP50影响HeLa细胞微丝骨架的分布和定位
目的:通过研究与膜-细胞骨架连接蛋白(ezrin-radixin-moesin,ERM)家族相结合的磷酸化蛋白50(ERM-bindingphospho-protein-50,EBP50)对HeLa细胞微丝骨架含量、分布的影响及受血小板源性生长因子PDGF(platelet-derired groWth factor)刺激后,微丝骨架在细胞中定位的变化及微丝骨架定位变化与EBP50的关系,阐明EBP50蛋白影响肿瘤细胞生长迁移的分子机制.方法:将pBK-CMV-HA空载体和pBK-CMV-HA-EBP50wt重组质粒分别转染HeLa细胞系,G418进行稳定表达细胞系的筛选,并用Western免疫印迹方法进行蛋白表达的鉴定;利用Western免疫印迹、免疫荧光细胞化学染色等方法结合光镜和激光共聚焦扫描显微镜分别观察和分析HA-HeLa与HA-EBP50-HeLa微丝骨架的含量及分布的异同;然后使用10ng/ml和20ng/mlPDGF 37℃刺激细胞15min后,分别观察及分析两组细胞微丝骨架的分布情况及EBP50在细胞中定位的变化.结果:Western免疫印迹鉴定证实转染的外源性EBP50 cDNA片段可在HeLa细胞系中成功表达EBP50蛋白,证明获得稳定表达EBP50蛋白的HeLa细胞系.Western免疫印迹及免疫荧光结果证实,转染空载pBK-CMV-HA的HeLa细胞微丝骨架粗大疏松,方向不一,交错排列:与其相比.EBP50虽然对HeLa细胞微丝骨架的含量没有明显影响,但能够促使细胞微丝骨架呈致密细丝状,平行规则排列,并沿细胞极性分布;并且在PDGF刺激下,EBP50能够与微丝骨架一起自胞浆迁移至膜上,并共定位.结论:EBP50能改变HeLa细胞微丝骨架的分布.在受到PDGF刺激时,EBP50还能使HeLa细胞系的微丝骨架定位于膜表面.EPB50可能通过影响微丝骨架的分布和定位来发挥其影响肿瘤细胞生长迁移的功能.
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磷酸化蛋白EBP50通过降低ERK1/2活性抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖能力
目的：探讨磷酸化蛋白EBP50对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖的影响及其潜在机制研究。方法使用 pGPU6/Neo载体构建稳定敲除EBP50表达的MCF-7细胞株，使用Western blot检测乳腺癌细胞中EBP50、c-myc、p-ERK1/2以及ERK1/2的表达，使用磺酰罗丹明B染色方法检测乳腺癌细胞增殖。结果使用 pGPU6/Neo 载体可以稳定地降低MCF-7细胞中EBP50的表达，敲除EBP50可以促进乳腺癌细胞增殖，同时促进c-myc的表达，上调ERK1/2的磷酸化水平，但不影响ERK1/2的表达。结论 EBP50可以通过抑制ERK1/2活性，抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖能力。
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膜-细胞骨架结合磷酸化蛋白50基因与乳腺癌特异性基因1在子宫内膜癌中表达及意义
目的 探讨膜-细胞骨架结合磷酸化蛋白50基因(ezrin-radixin-moesin-binding phosphoprotein 50,EBP50)与乳腺癌特异性基因1(breat cancer-specific gene 1,BCSG1)在子宫内膜癌中的表达及相互关系.方法 子宫内膜癌患者67例为子宫内膜癌组,子宫内膜非典型增生患者68例为增生组,子宫内膜正常患者70例为对照组,分别取3组患者的子宫内膜癌组织、非典型增生组织和子宫内膜正常组织,采用免疫组织化学法检测3组EBP50及BCSG1蛋白表达水平,采用荧光定量PCR检测EBP50及BCSG1 mRAN表达水平.结果 子宫内膜癌组EBP50和BCSG1 mRNA表达水平(2.58±1.20、0.84±0.10)以及其蛋白阳性率(88.05％、79.10％)均高于增生组(1.76±0.53、0.58±0.14和35.29％、27.94％)及对照组(1.06±0.65、0.21±0.20和12.85％、5.71％)(P＜0.05),增生组高于对照组(P＜0.05);子宫内膜癌组EBP50 mRAN表达与BCSG1 mRAN表达呈正相关(r=0.725,P=0.001).结论 EBP50和BCSG1基因均与子宫内膜癌的发生、发展有关,EBP50和BCSG1对子宫内膜癌的发生和调控有协同作用.
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巨噬细胞LRG47/EBP50真核共表达质粒的构建及表达鉴定
目的:构建能共表达LRG47和EBP50的重组质粒pBud-LE,实现目的基因LRG47、EBP50在真核细胞中的表达,以便于后续从分子和细胞水平研究其抗结核分枝杆菌(Mtb)感染的效果和机制.方法:用RT-PCR方法从RAW264.7细胞中扩增获得小鼠的lrg47基因和ebp50基因,分步克隆入真核共表达质粒pBUDCE4.1中,构建真核共表达质粒pBud-LE.同时构建ebp50和红色荧光蛋白表达基因(rfp)的融合基因,置换pBud-LE中的ebp50基因,构建共表达LRG47和EBP50-RFP的重组质粒pBud-LER;将pBud-LE、pBud-LER通过脂质体转染入293T细胞,以pBud-LER转染观察转染效果,再分别采用RT-PCR和免疫印迹法鉴定质粒在真核细胞系中表达LRG47和EBP50的能力.结果:成功构建了真核共表达质粒pBud-LE和pBud-LER;转染293T细胞后,LRG47和EBP50在RNA水平和蛋白水平都明显升高.结论:成功的构建了真核共表达质粒pBud-LE.
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Ebp50、Ezrin在子宫内膜癌中的表达及意义
目的 探讨膜-细胞骨架结合磷酸化蛋白50(ebp50)与膜细胞骨架结合蛋白埃兹蛋白(ezrin)在子宫内膜癌中的表达及临床意义.方法 应用荧光定量PCR及免疫组织化学检测ebp50与ezrin mRNA及蛋白在正常子宫内膜组织及子宫内膜癌组织中的表达情况.结果 ebp50与ezrin在子宫内膜癌组织中表达高于正常子宫内膜组织,其差异具有显著性(P ＜0.05);ebp50的表达与子宫内膜癌的组织分级,淋巴结转移、肌层浸润深度及临床分期有关(P＜0.05);ezrin的表达与子宫内膜癌的淋巴结转移、临床分期及浸润深度有关(P＜0.05);ebp50与ezrin两者的表达在子宫内膜癌中呈正相关.结论 ebp50、ezrin都与子宫内膜癌的发生发展及转移有关,联合检测ebp50与ezrin的表达,有助于判断子宫内膜癌的恶性程度,侵袭转移潜能及预后.
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磷酸化蛋白50在乳腺癌中的表达及意义
目的:探讨抑癌基因磷酸化蛋白(EBP50)在乳腺癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测53例乳腺癌EBP50的表达.结果:EBP50在乳腺癌组织中的表达较癌旁正常乳腺组织下调(P<0.05);ER阳性组患者中EBP50的表达高于ER阴性组(P<0.05);CerbB-2阳性表达的患者中EBP50表达明显降低(P<0.05);EBP50的表达在病理分期早期的患者中表达高于晚期患者(P<0.05);EBP50在PTEN阳性的组别中表达率高(P<0.05);EBP50阴性的患者术后更容易复发(P<0.05).结论:EBP50 的表达状况可作为评价乳腺癌生物学行为的重要参考指标,有可能成为判断乳腺癌的预后的相关指标.
