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Manumycin与DDP、PYM、5-FU、ADR联合的体外抗舌癌作用
目的:探讨Manumycin(手霉素)与常用舌癌化疗药物顺铂、5-氟脲嘧啶、平阳霉素、阿霉素联合作用于舌鳞癌Tca8113的细胞毒作用.方法:细胞毒测定以MTT法;单药细胞毒测定以半倍浓度梯度设计;联合用药细胞毒测定以Chou TC中效原理设计.结果:Manumycin以及顺铂、5-氟脲嘧啶、平阳霉素、阿霉素单独应用对Tca8113均有明显的细胞毒作用.联合用药显示在相应比例剂量条件下,Manumycin与顺铂联合(3.75:1)后呈拮抗作用,Manumycin与5-氟脲嘧啶联合(0.75:1)作用后,低浓度联合相互拮抗,而高浓度联合时明显协同,Manumycin与平阳霉素(0.75:1)、阿霉素联合(30:1)作用后呈相互协同的作用(CI＜1).结论:Manumycin与平阳霉素、阿霉素以及与5-氟脲嘧啶高浓度联合作用于Tca8113细胞呈相互协同的细胞毒作用.
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Manumycin对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用与Ras通路的关系
背景与目的:目前肝癌药物治疗的临床疗效还不尽人意.在肝癌的发生发展过程中,Ras起着重要的作用.Ras必须在法尼基转移酶的作用下,经过法尼基化修饰才具有生物活性.我们观察了法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞株生长的抑制作用,并探讨其对Ras通路的影响.方法:应用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验观察法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞株生长的抑制作用,Westernblot技术检测Manumycin对HepG2细胞Ras通路相关蛋白,包括pan Ras、N Ras、membrane pan Ras、ERK1/2、p ERK1/2、AKT、p AKT及MKP 1表达的影响.结果:Manumycin(5、10、20、40、80μmol/L)处理24h对肝癌HepG2细胞株生长具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性,其IC50为(17.1±2.6)μmol/L.同时Westernblot分析显示,Manumycin对肝癌HepG2细胞pan Ras蛋白和N Ras蛋白及细胞膜pan Ras蛋白表达均有抑制作用,且对细胞膜pan Ras蛋白的抑制作用更明显.进一步研究发现Manumycin对Ras蛋白下游ERK1/2和AKT活性也有抑制作用,表现为ERK1/2和AKT磷酸化水平降低.Manumycin对AKT活性的影响与PI3K抑制剂Wortmannin作用相似,两者联用可加强对AKT的抑制.此外,Manumycin诱导MKP 1的表达具有浓度依赖性.结论:Manumycin抑制肝癌HepG2细胞株的生长与其抑制Ras与细胞膜结合、增强MKP 1表达,进而抑制下游ERK1/2、AKT的活化有关.这些结果表明Manumycin通过影响Ras的法尼基化修饰而抑制肝癌HepG2细胞的生长.
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法尼基转移酶抑制剂ManumyCin诱导HepG2细胞凋亡的研究
目的:研究法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方法:采用MTT(Methy thiazolyl tetrazolium)法观察法尼基转移酶抑制剂Manumycin对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等技术检测细胞凋亡,应用Western blot方法检测bcl-2、p53、bax的蛋白水平变化.结果:法尼基转移酶抑制剂Manumycin能明显抑制HepG2细胞的生长且呈浓度依赖性,其IC50为(17.65±0.58)μmol/L.荧光显微镜检查显示Manumycin处理的HepG2细胞DAPI染色后,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核.DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形带.流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡与Manumycin作用的时间和浓度相关.Manumvcin能时间依赖性地诱导HepG2细胞发生G2/M期阻滞.Manumycin处理HepG2细胞后,Western blot检测结果显示p53蛋白表达明显增加,而bcl-2蛋白和bax蛋白表达无明显变化.结论:法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌细胞株HepG2有强烈的细胞毒作用,其分子机制可能是诱导HepG2细胞凋亡.Manumycin诱导HepG2细胞凋亡与bcl-2蛋白和bax蛋白表达水平无关,而p53蛋白表达水平的上调可能在此过程中起了一定的作用.
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Manumycin对白血病细胞生长及survivin基因表达的影响
目的:观察不同浓度的Manumycin对白血病K562细胞生长及survivin基因表达的影响,初步探讨其诱导细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞,采用不同浓度的Manumycin(0、0.5、1、2、4、8 μmol/L)掺入细胞,作用48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR检测细胞中survivin mRNA表达.结果:MTT法显示,1～8 μmol/L组对K562细胞具有明显的增殖抑制作用.流式细胞术结果显示,1～8μmol/L组均可诱导细胞凋亡(P＜0.01).RT-PCR结果显示1～8 μmol/L组细胞的survivin mRNA水平明显低于空白对照组(P＜0.01).结论:Manumycin可有效抑制K562细胞的增殖,诱导其凋亡,分子机制可能与下调survivin的表达有关.
