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自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化
目的 探讨自噬在张力诱导终板软骨细胞退变过程中的变化及作用.方法 取10只清洁级SD大鼠腰椎终板软骨进行细胞培养.对P1代终板软骨细胞分别加载间歇循环张力(10％伸长率,0.5 Hz)0 h、3h、12h、24 h、48 h.以倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,实时PCR与蛋白印迹法检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、转录因子SOX-9及蛋白多糖转录因子、Beclin-1和LC3基因表达的变化,以单丹磺酰戊二胺染色观察自噬小体.MTT(3-2,5-二苯基四氮唑溴盐染色)法检测3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)刺激前后的细胞存活率.结果 间歇循环张力诱导后0h组与3h组为正常终板软骨细胞形态,呈多角形；12h组略呈不规则形；24h组和48 h组呈梭形改变.实时PCR显示24h组和48 h组中Ⅱ型胶原、转录因子SOX-9及蛋白多糖的表达量降低；自噬相关基因LC3和Beclin-1表达量呈时间依赖性增加.单丹磺酰戊二胺染色显示24h组和48h组自噬发生率呈时间依赖性增加.MTT结果显示细胞存活率呈降低趋势；添加3-甲基腺嘌呤刺激后细胞活性减弱、存活率降低.结论 间歇循环张力刺激下终板软骨细胞表型逐渐丧失；自噬相关基因LC3与Beclin-1表达明显上调,但细胞活性降低；抑制自噬水平可降低细胞存活率,提示自噬参与了间歇循环张力诱导的终板软骨细胞退变过程.
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兔椎间盘终板细胞凋亡与水通道蛋白-1的关系
目的 探讨水通道蛋白(AQP)-1与椎间盘终板细胞凋亡的关系及意义.方法 将23个含终板的完整椎间盘分为4组:A组直接把取出的新鲜完整的椎间盘作为对照(椎间盘×5),B组为无干预组[进行培养但不加白细胞介素(IL)-1β,椎间盘×6],C组加入10μg/L IL-1β(椎间盘数×6),D组加入30μg/L IL-1β(椎间盘数×6).B、C、D组培养2周后取组织的相邻切片,免疫组织化学检测AQP-1和Caspase-3的表达.结果 免疫组织化学显示A组中AQP-1和Caspase-3阳性细胞率分别为(88.4±1.1)%和(5.5±0.8)%,B组阳性细胞率分别为(86.7±1.4)%和(6.3±1.6)%,C组中阳性细胞率分别为(42.8±2.2)%和(62.0±1.7)%,D组阳性细胞率分别为(30.5±2.0)%和(71.8±1.23)%,AQP-1与Caspase-3表达呈负相关.结论 AQP-1表达减少与终板细胞的凋亡密切相关.
