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微小RNA-9在B淋巴细胞及淋巴瘤细胞系中的表达及其意义
目的 研究微小RNA-9(miR-9)在磁珠分选的B淋巴细胞及淋巴瘤细胞系中的表达差异及其意义.方法 应用CD19磁珠阳性分选正常淋巴结中B淋巴细胞;分别提取分选出的CD19+B淋巴细胞和淋巴瘤细胞系Ly1、Ly10、Raji、L428细胞总微小RNA(mi-RNA),逆转录成cDNA,检测miR-9的表达;运用原位杂交技术(ISH)和荧光定量PCR检测细胞miR-9的表达.结果 miR-9在L428细胞中高表达(104.4400±1.6100);在B细胞淋巴瘤细胞株中表达较低,其相对表达水平Ly1细胞为2.1700±0.3800;Ly10细胞为1.0000 ±0.0150;Raji细胞为2.6500±0.8900;在CD19+B淋巴细胞表达极低(0.0026±0.0004).L428细胞的miR-9表达水平与其他细胞相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).ISH检测结果显示,miR-9阳性荧光定位于细胞质,在L428细胞胞质中呈弥漫强阳性表达,在Ly1、Ly10、Raji细胞中则呈少量散在弱阳性表达,有些细胞在核膜周围分布明显.结论 miR-9在L428细胞中特异性高表达,有望作为经典型霍奇金淋巴瘤诊断与治疗的分子标志物.
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Septin2在霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞中的表达及其在促进细胞再分化中的作用
目的 探索GTP结合蛋白氯苄乙胺2(Septin2)在霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞中的表达及其在H/RS(Hodgkin/Reed-Sternberg)细胞向B细胞再分化中的作用.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、Western blot、激光共聚焦显微镜、免疫细胞化学法检测霍奇金淋巴瘤细胞株L428细胞过表达CD99前后Septin2在mRNA和蛋白水平的表达;采用RT-qPCR和Western blot检测L428细胞转染Septin2干扰片段(Septin2-siRNA)后Septin2的表达;采用激光共聚焦显微镜、CCK8法和流式细胞术检测干扰Septin2基因对L428细胞骨架蛋白、细胞增殖活性和免疫表型的影响.结果 与L428细胞空白对照组比较,L428细胞Septin2 mRNA表达水平在CD99过表达后(0.329±0.019对1.000,P=0.001)和转染Septin2-siRNA后(0.276±0.025对1.000,P=0.000)均下降,蛋白表达水平也下降.与转染空载体组比较,转染Septin2-siRNA后的L428细胞较前者胞体缩小,细胞增殖活性下降(F=204.927,P＜0.001),细胞中的微丝骨架发生了重建,CD30和CD15表达下降,CD19、CD10、CD38表达增高.结论 Septin2在L428细胞中高表达,干扰Septin2可促进H/RS细胞向B细胞方向再分化.
关键词： 霍奇金病 氯苄乙胺 L428细胞 里德-斯特恩伯格细胞 细胞分化
