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热休克蛋白70对缺血/缺氧嗜铬细胞瘤细胞细胞膜钙通道的调节机制
目的 探讨慢病毒介导的热休克蛋白70 (HSP70)表达对缺血/缺氧神经细胞细胞膜钙离子通道的影响及其机制.方法 取对数生长期的嗜铬细胞瘤细胞(PC12),以缺氧6h、复氧12h刺激PC12细胞模拟体内神经细胞遭受缺血/再灌注时的病理过程,将细胞分为非感染组,感染含绿色荧光蛋白(GFP)基因但不含HSP70基因的慢病毒对照组(GFP慢病毒对照组),及感染含重组HSP70和GFP基因的慢病毒实验组(HSP重组慢病毒感染组).采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(WesternBlot)检测L型钙通道cav1.2、cav1.3亚基,受体门控通道NR1、NR2亚基,及Na+/Ca2+交换体(NCX)的mRNA和蛋白表达.结果 缺氧/复氧处理后,HSP70重组慢病毒感染组细胞cav1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表达均明显低于GFP慢病毒对照组和非感染组[cav1.2 mRNA(2-△△Ct):3.13±0.46比5.12±0.52、5.13±0.66,NR1 mRNA(2-△△Ct):1.61±0.44比3.23±0.82、3.31±0.78,NR2 mRNA(2-△△Ct):2.09±0.41比3.91±0.64、3.88±0.62;cav1.2蛋白(灰度值):2.82±0.39比3.98±0.23、3.96±0.24,NR1蛋白(灰度值):1.84±0.35比2.79±0.21、2.86±0.23,NR2蛋白(灰度值):0.87±0.24比1.57±0.31、1.33±0.44;均P＜0.01];而GFP慢病毒对照组与非感染组间细胞cav1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表达差异均无统计学意义(均P＞0.01).非感染组、GFP慢病毒对照组和HSP70重组慢病毒感染组间细胞cav1.3、NCX的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义[cav1.3 mRNA(2-△△Ct):4.82±0.32、4.72±0.36、4.82±0.29,NCX mRNA (2-△△Ct):3.49±0.78、3.47±0.71、3.56±0.65;cav1.3蛋白(灰度值):2.63±0.40、2.64±0.39、2.68±0.39,NCX蛋白(灰度值):3.27±0.48、3.34±0.48、3.31±0.42;均P＞0.01].结论 外源性HSP70可能通过抑制PC12细胞膜L型钙通道cav1.2亚基及受体门控通道NR1、NR2亚基的表达,对缺血/缺氧引起的PC12细胞损伤具有保护作用.
