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经液氮保存具有活性的同种生物瓣脱细胞支架的制备
目的为体外构建组织工程瓣提供脱细胞的同种生物瓣支架材料,并建立相应的技术方法.方法选取经液氮保存、具有活性的同种生物带瓣管道作为实验材料,用含十二烷基硫酸钠(SDS)的Tris低渗缓冲液脱去同种带瓣管道存在的细胞;固定剂固定后,分别行HE染色、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜和扫描电镜观察、摄片.结果用质量浓度为0.03%SDS的Tri8低渗缓冲液与同种瓣膜共同孵育48 h,完全脱去了表面的内皮细胞(ECs),又较完整地保留了胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质主要成分,其形态学结构在脱细胞前后无明显改变;瓣叶中心部位有部分成纤维细胞存留.而对于脱主动脉壁细胞,质量浓度为0.1%SDS更合适.结论质量浓度为0.03%～0.1%SDS的低渗缓冲液对制备脱细胞的同种生物瓣支架效果较佳,有利于同种瓣再内皮化时种植细胞的粘附和扩增,可进一步应用于组织工程瓣体外构建的研究.
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具有活性的同种生物静脉脱细胞支架的制备
目的 制备同种异体、无免疫排斥反应的脱细胞生物支架材料,并建立相应的技术方法,为体外构建组织工程胆管提供实验准备.方法 选取新鲜具有活性的同种生物静脉作为实验材料,用含0.03%十二烷基硫酸钠(SDS)的Tris低渗缓冲液,以改进的BOOTH法脱去静脉壁的内皮细胞,保留细胞外基质.固定剂固定制成的脱细胞支架,分别行HE染色、胶原纤维染色的光镜和扫描电镜观察、摄片,了解脱细胞支架的形态学和组织学特征并做处理前后的比较.将支架材料进行同种异体间动物皮下接种,结合不同生长因子局部一次性滴入(空白组,bFGF组,VEGF组,bFGF+VEGF组),2周后取出支架,进行免疫组化血管染色(8因子),观察支架新生血管的长入情况.结果 用质量浓度为0.03%SDS的Tris低渗缓冲液与静脉壁共同孵育48 h后,既完全脱去了静脉壁内膜表面的内皮细胞,又较完整地保留了胶原纤维等细胞外基质主要成分,基质主要成分的形态学结构在脱细胞前后无明显改变.皮下植入的异体支架局部未见明显排斥反应,2周后支架内新生血管有不同程度的长入,以滴入bFGF+VEGF组新生血管长入显著.结论 质量浓度为0.03%的SDS的低渗缓冲液对制备脱细胞的同种生物支架效果较佳,既能完全脱去静脉壁内膜表面可引起免疫排斥反应的内皮细胞,又能较完整地保留能维持支架形态的胶原纤维等细胞外基质主要成分;所制备的脱细胞支架异体植入无排斥反应,bFGF和VEGF的局部使用可促进新生血管在支架内的生长,有助于支架的远期存活;该实验所制备的静脉脱细胞支架可望在组织工程胆管体外构建的研究中应用.
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两种细胞洗涤剂制备脱细胞同种生物带瓣管道支架的研究
目的比较去氧胆酸钠(deoxycholic acid, DOA)和十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulphate, SDS)两种细胞洗涤剂制备脱细胞的同种生物带瓣管道(homograft bioprosthetic tube valved, HBTV)支架的效果,为体外构建组织工程瓣(tissue-engineering heart valve, TEHV)提供同种生物瓣支架材料. 方法对同种带瓣主动脉管道和带瓣肺动脉管道,分别用含0.5% DOA或0.03% SDS的Tris低渗缓冲液共同孵育48 h,脱去经液氮保存、具有活性的HBTV表面的内皮细胞,固定剂固定后分别进行HE、胶原纤维和弹力纤维染色的光镜观察,以及扫描电镜观察,摄片. 结果两种洗涤剂均完全地脱去了HBTV表面的内皮细胞,中心部位的成纤维细胞有部分存留;细胞外基质,如胶原纤维和弹力纤维等均较完整地保留下来,其形态结构与脱细胞前无明显改变. 结论 0.03%～0.1% SDS或0.5% DOA的低渗缓冲液对制备HBTV脱内皮细胞支架效果均较佳,有利于HBTV再内皮化时种植细胞的黏附和扩增,可进一步应用于体外构建TEHV的研究.对于脱主动脉壁的细胞,SDS浓度应增至0.1%为佳.
