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新型苯并噻二唑衍生物对KRAS突变非小细胞肺癌的辐射增敏作用及机制研究
目的 探究新型苯并噻二唑衍生物HL-095对3种KRAS突变非小细胞肺癌(NSCLC)细胞(H358、A549和H460)的辐射增敏作用及其相关机制.方法 以AZD6244为先导化合物设计合成苯并噻二唑衍生物HL-095,采用丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)1激酶实验检测HL-095对MEK1激酶活性的抑制能力.将H358、A549和H460细胞分别以适宜密度接种培养,分为对照组、HL-095组、照射组、HL-095联合照射组.采用137Csγ射线一次性照射,剂量率为1.02 Gy/min.蛋白质印迹法(Western Blot)检测H358、A549和H460细胞中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达水平,克隆形成实验检测细胞增殖,彗星实验分析DNA损伤程度,流式细胞仪检测G2/M期细胞百分比,Western Blot检测A549和H358细胞中检查点激酶1(CHK1)蛋白及其磷酸化水平.结果 HL-095能抑制MEK1的活性.与对照组相比,HL-095组3种细胞(H358、A549和H460)中的p-ERK蛋白表达水平降低,G2/M期细胞百分比降低,其差异均具有统计学意义(均P<0.01);A549和H358细胞中DNA损伤修复关键蛋白CHK1的表达及其磷酸化下调.与照射组相比,HL-095联合照射组3种细胞的增殖均受到抑制,DNA损伤亦更为严重,Olive尾距、尾距、尾长和尾部DNA百分比均明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 作为MEK抑制剂,新型苯并噻二唑衍生物HL-095可通过抑制DNA损伤修复和减少G2/M期阻滞来增强KRAS突变NSCLC细胞的辐射敏感性.
