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β-葡萄糖甘酸酶(GUS)文献资料
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黄花蒿cyp71av1启动子的分离及表达特性分析
目的 从黄花蒿中分离鉴定青蒿素生物合成途径关键酶--细胞色素P450单加氧酶编码基因(cyp71av1)的启动子序列并研究其表达特性,探索提高该基因表达量并进一步促进青蒿素合成的途径.方法 采用热不对称嵌套PCR法从黄花蒿DNA中分离cyp71avl 5'端非翻译区序列,构建与β-葡萄糖苷酸酶(GUS)报告基因融合的植物表达载体,通过农杆菌介导转化烟草.采用GUS组织化学染色法和分光光度法分别定性和定量检测cyp71av1 5'端非翻译区序列调控GUS基因在正常条件和胁迫条件下的表达.结果 从黄花蒿中分离出长短2个cyp71av1 5'端非翻译区序列,分别获得与GUS基因融合表达的转基因烟草,均能检测到GUS活性且两者无明显差异.GUS活性定量检测结果还显示,在脱水、4℃和紫外辐射条件下,转化烟草GUS活性提高1.4～2.7倍.结论 从黄花蒿分离出的2个cyp71av1 5'端非翻译区序列都具有启动子功能,并且具有环境诱导表达特性.
关键词： 黄花蒿 CYP71AV1 启动子 青蒿素 β-葡萄糖甘酸酶(GUS)
