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前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的观察前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响,探讨其对HUVECs的保护作用机制.方法体外培养HUVECs细胞系ECV304,以10 μmol/L卡托普利或10、1、0.1、0.01 μmol/L前荷叶碱作用于HUVECs,30 min后再加入Ang Ⅱ 1 μmol/L,光镜下观察细胞形态,MTT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响,比色法测定NO、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果与对照组比较,AngⅡ能明显诱导HUVECs的凋亡(P＜0.01),10 μmol/L卡托普利及0.01～10μmol/L前荷叶碱可明显改善内皮细胞形态,组织活性明显升高(P＜0.05),能增加HUVECs释放NO及生成tNOS(P＜0.05),但对iNOS影响不大,使Ang Ⅱ诱导的HUVECs凋亡细胞数明显减少(P＜0.05).结论前荷叶碱通过增加NO生成而抑制AngⅡ诱导的HUVECs凋亡,从而发挥可能的内皮保护功能.
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洛伐他汀对血管内皮细胞与平滑肌胞增殖调节作用的对比实验研究
目的 探讨洛伐他汀对人血管内皮细胞与平滑肌细胞的调节作用及其调节差异性.方法 配制含不同浓度洛伐他汀的培养基(0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L),分别于96孔板中进行人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与血管平滑肌细胞(VSMCs)培养,在培养24、72、120h后以MTT法对两种细胞进行细胞活性及增殖情况评估.结果 培养24h,0.1μmol/L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养72h,1μmol/L的洛伐他汀HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养120h后, 0.001、0.01、0.1、1μmol/L的洛伐他汀与对照组相比HUVECs增殖活性无明显差异,10μmol/L的洛伐他汀表现山明显的增殖抑制作用.培养24h和120h,各浓度组洛伐他汀对VSMCs的增殖无显著调节作用;培养72h,0.001、0.01、1、10μmol/L的洛伐他汀对VSMCs的增殖存在部分抑制作用,未发现剂帚相关规律性.结论 洛伐他汀对人血管内皮细胞增殖存在双向调节作用,与浓度相关.体外浓度0.1、1μmol/L时可以表现出明显的促进增殖作用,浓度达10μmol/L时则表现出抑制作用.相同浓度下,洛伐他汀无促进VSMCs增贿的作用,并且存在部分抑制VSMCs增殖的作用.
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MicroRNA-126对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响
目的:探讨microRNA-126 (miR-126)对卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭能力的影响,及其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力的影响.方法:利用脂质体瞬时转染miR-126 mimics、mimics NC于SKOV3细胞.Real-time PCR法检测卵巢癌组织及转染前后SKOV3细胞中miR-126的表达,Tanswell小室检测SKOV3细胞的迁移和侵袭情况.分离培养原代HUVECs,利用三维小管形成实验检测HUVECs体外血管形成情况.结果:卵巢癌组织中miR-126的相对表达量(0.29±0.38)显著低于正常卵巢上皮组织(1.18±0.47)(P＜0.01).miR-126 mimics组SKOV3细胞的miR-126相对表达量(5.15±1.00)显著高于未处理组(1.07±0.27)、NC组(0.99±0.20).转染后,SKOV3细胞的迁移和侵袭能力均显著降低,但HUVECs三维成管数无显著变化.结论:miR-126表达上调能抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外迁移和侵袭能力,miR-126低表达可能与卵巢癌的疾病进展有关.
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前荷叶碱对人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响
目的:观察前荷叶碱(Pronuciferine)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的影响,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用.方法:从莲子心中提取前荷叶碱,体外培养HUVECs,用不同浓度(10μmol/L、1μmol/L、0.1μmol/L、0.01μmol/L)的前荷叶碱分别作用于HUVECs,观察细胞形态,MTT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响,比色法测定各组的NO、总NOS(tNOS)、诱导型NOS(iNOS).结果:和对照组比较,前荷叶碱对内皮细胞形态和活性无明显影响,能增加HUVECs释放NO,及tNOS生成(p＜0.01),但对iNOS影响不大.结论:前荷叶碱可能通过增加tNOS生成而提高HUVECs释放NO,从而保护内皮功能.
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海带多糖L01对人脐静脉内皮细胞表达和分泌t-PA的影响
目的:利用人脐静脉内皮细胞体外培养模型,探讨肾上腺素刺激状态下海带多糖L01对内皮细胞的保护作用,以及其对其分泌的组织型纤溶酶原激活物(t-PA)的影响,从内皮细胞抗血栓功能方面探讨海带多糖L01对心血管系统的保护作用.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV-304,用肾上腺素刺激24h、48h、72h采样,ELISA法测定HUVECs培养上清液中的t-PA含量,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HUVEC细胞内t-PA mRNA的表达,其扩增产物经电泳后密度扫描及半定量分析.结果 :肾上腺素模型组HUVECs培养液中t-PA(24h、48h)含量明显增加,;单给海带多糖对HUVECs t-PA分泌无影响.海带多糖L01在肾上腺素刺激下给药24h,48h后t-PA抗原分泌明显降低(P<0.01),且具有一定的量效关系,但HUVECst-PAmRNA表达各组均无明显差异.结论:肾上腺素可刺激内皮细胞分泌t-PA抗原,海带多糖L01对血管内皮具有一定的保护作用,减少肾上腺素刺激下HUVECs分泌t-PA,而对t-PAmRNA表达无明显影响.
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GLP-1(7-36)对高糖状态下人脐静脉内皮细胞活性的影响及其机制的初步研究
目的:研究GLP-1(7-36)对高糖培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性的影响及相关机制.方法:正糖(5mmol/l)和高糖(33mmol/l)环境下培养的HUVECs分别加入不同浓度的GLP-1(7-36)(0nmol/l,0.3nmol/l,3nmol/l,30nmol/l)并干预不同时间(24h,48h,72h)后行MTT检测细胞活力.选择某个合适的GLP-1(7-36)干预浓度和时间后继续行一氧化氮(NO)浓度检测.结果:①高糖培养48h、72h分别较正糖培养48h、72h细胞活力下降(p<0.05),②高糖培养环境下经3 nmol/l、30nmol/l浓度 GLP-1(7-36)分别干预48h、72h后较高糖对照组细胞活力显著增加(p<0.01),而正常糖培养环境下分别加入不同浓度GLP-1(7-36)干预不同时间后均与正糖对照组细胞活力无差异,③高糖培养48h较正糖培养下细胞培养上清液中NO的量下降,高糖组加入3nmol/l的GLP-1(7-36)后NO的量增加,正糖组中加入3nmol/l的GLP-1(7-36)后NO产量不变.结论:GLP-1(7-36)可以改善高糖引起的HUVECs活力的下降,且该保护作用与NO相关.
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阿托伐他汀钙抑制AngⅡ上调HUVCs诱导型一氧化氮合酶的表达并增加NO的生成
目的观察阿托伐他汀钙对AngⅡ诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）表达诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）及一氧化氮（nitric oxide，NO）生成的影响，讨论二者之间的关系和可能机制。方法体外培养HUVECs，用102030阿托伐他汀钙预处理HUVECs 24 h，再与10-7 mol/L AngⅡ共同孵育12 h；通过RT-PCR和Western Blot分别检测iNOS mRNA和蛋白表达水平；通过Griees反应测定上清NO释放量。结果与无刺激组比较，10-7 mol/L AngⅡ刺激HUVECs 12 h后明显上调iNOS mRNA及蛋白表达，<0.001；基础状态下HUVECs不表达iNOS（无论mRNA还是蛋白），10-7 mol/L AngⅡ刺激8 h后明显增加iNOS mRNA和蛋白表达（与对照组相比，<0.001）；不同浓度（10、20、30μmol/L）阿托伐他汀钙预处理24 h明显抑制AngⅡ对HUVECs iNOS mRNA及其蛋白表达的上调作用（与AngⅡ组相比，<0.001，有统计学意义；但阿托伐他汀钙不同浓度组间比较>0.05，无统计学意义）。与无刺激组比较10-7 mol/L AngⅡ明显减少NO的释放，<0.001，有统计学意义；与AngⅡ组比较，阿托伐他汀钙干预24 h后呈浓度趋势增加NO的释放，<0.001，有统计学意义。结论阿托伐他汀钙呈浓度效应抑制AngⅡ诱导的HUVECs表达iNOS，并呈浓度趋势增加内皮NO的释放。
