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鼠肝缺血再灌注后多耐药相关蛋白和根蛋白的表达及定位
目的 探讨鼠肝缺血再灌注后血浆胆红素升高发生的分子机制.方法 实验分为假手术组(A组),70%的鼠肝缺血35 min再灌注组(B组),研究时点为再灌注后的1 h、6 h、1 d、3 d、5 d.HE染色分析肝组织病理改变.计算胆汁生成率,常规生化方法检测胆汁、血浆中胆红素含量的变化.荧光定量PCR检测肝组织多耐药相关蛋白2(MRP2)以及肝细胞骨架连接蛋白根蛋白的表达.激光共聚焦方法分析MRP2、根蛋白在肝细胞毛细胆管膜上的定位.结果 70%鼠肝缺血35min再灌注模型炎症反应轻,无肝细胞坏死的发生.与A组比较,B组再灌注后的1 h～3 d,胆汁生成率及胆汁中结合胆红素含量明显降低;再灌注后的1 h～5 d,血浆中胆红素含量显著增加.荧光定量聚合酶链反应(PCR)发现,再灌注后6 h～5 d,B组根蛋白表达下调,以再灌注后的6 h～1 d尤为明显,MRP2表达的明显下调仅发生在再灌注后的6 h.激光共聚焦分析发现,再灌注后的6 h～5 d在根蛋白表达缺失处,B组MRP2在毛细胆管膜上的定位减少.结论 根蛋白表达下调所致的MRP2在毛细胆管膜上的定位减少很可能是鼠肝缺血再灌注后血浆胆红素升高发生的分子机制.
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鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的分子机制
目的 探讨鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的分子机制.方法 应用70%的鼠肝缺血35 min再灌注模型,检测胆汁、血浆中胆红素、胆酸的含量;荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组织化学方法分析毛细胆管膜上胆盐输出泵(Bsep)、多耐药相关蛋白2(Mrp2)的表达;激光共聚焦方法分析Mrp2定位的改变.结果 再灌注后6 h、1、3 d,Bsep的表达明显下调(mRNA表达水平分别为0.189±0.044、0.240±0.078、0.224±0.068),与胆汁、血浆中胆酸的异常改变一致.Mrp2表达的明显下调仅发生于再灌注后的6 h(mRNA表达水平为0.038±0.032),与再灌注后1 h～5 d胆红素的异常变化不相符.再灌注后6 h～5 d,Mrp2在毛细胆管膜上定位减少、向胞浆内分布.结论 Bsep表达的减少以及Mrp2定位的异常是鼠肝缺血再灌注后胆汁淤积发生的主要分子机制.
