首页 > 文献资料
-
IFN-γ的转基因表达对小鼠哮喘模型中过敏反应的抑制作用
目的研究重组复制缺陷腺病毒在小鼠肺内气道上皮细胞中的转基因表达水平及其介导小鼠γ-干扰素(mIFN-γ)的转基因表达对过敏原诱导的小鼠哮喘模型的预防性治疗作用.方法带有LacZ表达基因的重组复制缺陷腺病毒(AdCMVLacZ),经鼻腔吸入法和气管内注射法两种途径分别感染小鼠肺组织.C57小鼠经卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏后气道吸入激发建立哮喘模型,预防过敏反应组在激发前48小时, 麻醉下经鼻滴入5×109pfu含mIFN-γ c DNA 的重组复制缺陷腺病毒(AdCMVmIFN-γ). 留取标本,监测被转基因的表达水平及其疗效 .结果 AdCMVLacZ经鼻腔吸入法或气管内注射法均可感染小鼠气道和肺泡上皮细胞,并高效表达β-半乳糖苷酶.经腺病毒载体介导的mIFN-γ可以在体内、外高水平表达(小鼠支气管肺泡灌洗液中mIFN-(的含量在感染后4天达到1624.7±1321.5pg/ml), 经预防性给予Ad CMVmIFN-γ可以明显降低小鼠哮喘模型中炎性细胞及嗜酸性粒细胞在肺组织中的浸润,支气管肺泡灌洗液中细胞总数由阳性对照组的(216.6±71.1)×103/ml,降至(145±55 .6)×103/ml (P<0.05);嗜酸性粒细胞所占比例则由阳性对照组75.13%±6.85% ,降至9.00%±4.58% (P<0.001).结论重组复制缺陷腺病毒可携带外源性基因在小鼠气道上皮细胞内进行高效的转基因表达. 腺病毒载体介导的IFN-γ在小鼠肺内的高水平表达能够有效抑制过敏源诱导的嗜酸性粒细胞在肺组织中的聚集.证明了细胞因子转基因治疗支气管哮喘的可能性.
-
颗粒性过敏原对致敏小鼠肥大细胞生成干扰素的影响研究
目的 研究颗粒过敏原诱导过敏性哮喘反应中重要的效应细胞肥大细胞生成干扰素IFN-γ的能力以及可能的作用机制.方法 为模拟环境中附着有过敏原成分的可吸入性颗粒物,将模式过敏原蛋白三硝基苯基结合的卵清蛋白(OVA-TNP)共价偶联于大小均一的微球上形成颗粒状过敏原.肥大细胞首先用识别TNP的IgE致敏,然后用颗粒过敏原进行刺激.以Real-time PCR方法 测定肥大细胞活化后IFN-γ的基因表达水平.采用同等剂量的以可溶形式存在的OVA/TNP作为可溶过敏原,比较颗粒过敏原刺激肥大细胞生成干扰素的能力.采用三种骨架蛋白抑制剂(Latrunculin B,cytochalasin D和Jasplakinolinde)观察阻断Actin的功能.结果 与可溶过敏原相比,颗粒过敏原刺激IgE致敏的肥大细胞的IFN-γ的基因表达水平上升.肥大细胞IFN-γ基因表达的峰值出现在过敏原刺激后1 h.骨架蛋白抑制剂降低过敏原刺激肥大细胞IFN-γ的基因表达水平.结论 当过敏原以颗粒形式存在时可以刺激致敏的肥大细胞生成更高水平的Th1型细胞因子干扰素IFN-γ,但作用机制与已知颗粒过敏原增强肥大细胞生成Th2型细胞因子的机制不同.
-
三氧疗法对非霍奇金淋巴瘤患者Th1/Th2细胞亚群漂移的影响
目的:探讨三氧疗法(Ozone therapy)联合化疗对非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma,NHL)患者外周血CD4+T淋巴细胞Th1/Th2漂移的影响和临床疗效.方法:67例初治NHL患者随机分为治疗组(37例)和对照组(30例),治疗组化疗同时联合三氧(Ozone,O3)治疗,采用O3自血回输(Major O3 auto-haemotherapy,MAH)和O3直肠注气疗法(Rectal O3 gas insuffiation,RI),应用两个周期.对照组单用相同化疗方案治疗.两组均化疗两周期,化疗前后采用流式细胞仪分析外周血CD4+T淋巴细胞内细胞因子IFN-γ、IL-4的表达,分别反应Th1、Th2细胞的数量,同时评价疗效以及肿瘤标志物LDH和β2-MG水平的变化.结果:①NHL患者Th1细胞比例低于正常对照组(P＜0.05),Th2细胞比例与正常对照组差异无显著性(P＞0.05),Th1/Th2比值低于正常对照组(P＜0.05);②治疗组Th1细胞较治疗前升高(P＜0.05),Th2细胞与治疗前差异无显著性(P＞0.05),Th1/Th2较治疗前升高(P＜0.05),LDH和β2-MG较治疗前降低;③对照组Th1细胞较治疗前降低(P＜0.05),Th2细胞较治疗前升高(P＜0.05),Th1/Th2和LDH较治疗前降低(P＜0.05),β2-MG与治疗前差异无显著性(P＞0.05);④两组治疗后比较,治疗组Th1细胞高于对照组,Th2细胞、LDH和β2-MG低于对照组,Th1/Th2高于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);⑤治疗组完全缓解率(CR)64.9%,部分缓解(PR)29.7%,有效率(CR+ PR)94.6%;对照组CR40.0%,有效率70.0%.治疗组与对照组比较,CR率及有效率明显提高,有统计学意义(P＜0.05).结论:NHL患者外周血CD4+T淋巴细胞向Th1细胞的分化明显减少,向Th2细胞的分化无明显变化,Th1/Th2平衡失调并向Th2方向漂移.受化疗打击后Th1反应向Th2漂移,抗肿瘤免疫功能进一步降低,O3可使化疗后Th1/Th2平衡向Th1方向漂移.O3联合化疗较单纯化疗比,可以提高淋巴瘤患者的疗效.
-
转γ-干扰素基因防治青光眼术区滤过泡纤维化的实验研究
[目的]评价转γ-干扰素基因、人重组γ-干扰素制剂(IFN-γ)、丝裂霉素(MMC)和生理盐水对家兔青光眼手术滤过区的影响.[方法]选取8只新西兰纯种家兔,行巩膜咬切术后随机分为4组,分别于术后滤过区旁球结膜下注射人重组IFN-γ、生理盐水、重组质粒pIRES-EYFPIFN-γ和术中结膜瓣下放置浸润有0.25 mg/mL MMC的湿棉片.术后观察滤过泡大小和形态,滤过区行病理切片,HE染色及免疫组化分析.[结果]所有兔眼于术后3 d,均有滤过泡形成,于术后2～3周逐渐扁平.其中放置MMC组,滤过泡壁隆起较高,壁薄,色苍白,无血管长入;注射重组人IFN-γ组滤过泡隆起也较高,但周围可见血管,其余二组,滤过泡轻至中度隆起,弥散,注射生理盐水组充血较明显.病理组织切片经HE染色光镜下检查:MMC组结膜上皮下结缔组织疏松排列;转pIRES-EYFPIFN-γ组,结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间;注射IFN-γ组,2眼结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间,另外2眼与注射生理盐水组相似,表现为结膜上皮下被厚实的纤维组织所覆盖.免疫组化反应,转pIRES-EYFP IFN-γ组结膜下及浅层巩膜细胞胞浆和胶原可见IFN-γ阳性反应;注射IFN-γ组亦可见结膜下及浅层巩膜IFN-γ弱阳性反应;生理盐水和MMC组,呈阴性反应.[结论]直接注射法转IFN-γ基因的家兔Tenon囊和浅层巩膜组织于术后3周的时间内表达IFN-γ.人重组IFN-γ对家兔青光眼术后滤过区纤维的增殖和胶原的产生具有一定程度的抑制作用.人重组IFN-γ对青光眼术后滤过泡的影响与MMC不同.
-
五指毛桃水提物对免疫抑制小鼠细胞免疫的影响
目的:研究五指毛桃水提物对免疫抑制小鼠细胞免疫的影响.方法:取小鼠50只,随机分为生理盐水对照组、环磷酰胺模型组、五指毛桃水提物组(6.6 g/kg,4.4 g/kg,2.2 g/kg),通过腹腔注射环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型,连续灌胃给药14d后,测定各组小鼠的脾脏指数、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞的增殖能力和杀伤活性、T细胞亚群比例及血清IL-1、INF-γ的含量.结果:五指毛桃水提物组(6.6 g/kg,4.4 g/kg)可明显提高环磷酰胺免疫抑制小鼠的脾脏指数,明显增强巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞的增殖能力和杀伤活性,增加T细胞亚群数量及IL-1、INF-γ的含量.结论:五指毛桃水提物能够提高免疫抑制小鼠的免疫功能,其机制与调节机体细胞免疫作用相关.
