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荧光定量 RCR 检测比格犬雌激素β受体 mRNA在间情期与发情期表达量的差异
目的：对比格犬发情期与间情期ERβ基因在性腺组织器官的变化状况进行荧光定量，明确ERβ基因在发情期与间情期下丘脑-垂体-性腺轴上的表达量差异情况，为深入研究比格犬发情机制提供基础。方法作为调控生殖的关键基因，ERβ基因位于比格犬下丘脑-垂体-性腺轴上，因此分别取处于发情期和间情期的比格犬，提取下丘脑、垂体、卵巢和子宫的RNA，反转录后对ERβ基因mRNA的表达量进行荧光定量PCR检测。结果间情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA的表达量分别是发情期比格犬卵巢、子宫、垂体、下丘脑内ERβ基因mRNA表达量的0.35倍、0.17倍、0.44倍、0.43倍。结论 ERβ基因在处于发情期的比格犬下丘脑-垂体-性腺轴内表达量均上调。
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比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选
目的 筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物.方法 根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性.对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测.结果 经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因.结论 引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具.
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ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性研究
目的:研究ERβ基因表达及多态性与胃癌发生发展的相关性.方法:以100例原发性胃癌为实验组,90例胃溃疡为对照组,免疫组织化学SP法检测ERβ蛋白,限制性酶切法检测ERβ基因CA重复序列多态性和G1082A多态性.结果:ERβ实验组和对照组阳性率分别为68.0％和23.3％,差异有统计学意义(P＜0.01),并且分化程度低、浸润深、有淋巴结转移和5年死亡者的ERβ阳性率分别高于分化程度高、浸润浅、无淋巴结转移和5年生存者.且Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ期(P＜ 0.01,P＜ 0.05),而与初复发、年龄、肿瘤大小和组织学类型无关(P＞0.05).ERβ基因CA重复序列对照组和实验组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05),两组基因型SS、SL、LL分布和等位基因S、L频率的比较,差异无统计学意义(P＞0.05).ERβ G1082A多态性中,Rsa Ⅰ和Alu Ⅰ酶切分析:实验组和对照组均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P＞0.05).两组基因型rr、Rr、RR分布和等位基因r、R和a、A频率的比较差异无统计学意义(P＞0.05)；而实验组aa基因型频率与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),且该基因型与肿瘤的临床分期、分化程度、浸润深度、转移情况、5年生存情况密切相关(P＜0.05),与肿瘤初复发、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关(P＞0.05),而等位基因频率中仅a/A与肿瘤的分化程度、浸润深度密切相关(P＜0.01).结论:ERβ与胃癌的发生、分化程度、浸润深度、转移及5年存活率密切相关,并且ERβ的aa基因型和等位基因a/A与胃癌的关系极大.
