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全长与成熟形式IL-37 b的真核表达载体的构建与研究
目的 构建全长与成熟形式IL-37b的真核表达载体pEGFP N1/IL-37b,检测二者在RAW 264.7细胞中的表达情况.方法 以含IL-37b全长编码区基因的质粒pUBC/IL-37b为模板,构建能够表达全长与成熟形式IL-37b的真核表达载体.将构建的重组质粒pEGFP N1/IL-37b转染到RAW 264.7细胞中,通过western blot和共聚焦显微镜检测全长与成熟形式的IL-37b的表达情况,并通过real-time PCR检测全长与成熟形式IL-37b对LPS诱导的IL-6表达的抑制作用.结果 构建的pEGFP N1/IL-37b转染后能够在细胞中表达全长与成熟形式的IL-37b,并且能够抑制LPS诱导的IL-6的表达.结论 成功构建了全长与成熟形式IL-37b的真核表达载体,为进一步研究IL-37b的炎症抑制作用与机制打好基础.
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人IL-37b在大肠埃希菌中的表达、纯化及活性鉴定
目的 表达重组IL-37b蛋白并去除内毒素,鉴定其活性.方法 构建原核表达载体pET28/IL-37b,转化大肠杆菌感受态细胞;经IPTG诱导表达的重组蛋白由Ni2+-NTA凝胶进行变性条件下的亲和层析纯化;用SDS-PAGE分析、考马斯亮蓝染色鉴定重组蛋白是否为目的蛋白;去除蛋白中原核表达所产生的内毒素;将蛋白作用于受LPS刺激的RAW 264.7细胞,收集培养上清,通过ELISA方法检测IL-6的表达水平,鉴定蛋白的生物学活性.结果 表达了纯度较好的重组IL-37b蛋白,降低了其中原核表达所产生的内毒素,经鉴定其具备良好的生物学活性.结论 成功表达了具备良好生物学活性的IL-37b蛋白.
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过敏性鼻炎患儿血浆IL-37b水平的检测及临床意义
目的 探讨过敏性鼻炎患儿血浆IL-37b水平变化及其临床意义.方法 用ELISA法检测60例过敏性鼻炎患儿治疗前及治疗1个月后血浆IL-37b含量,另选30例健康儿童为对照组,并分析IL-37b水平与IgE、嗜酸性粒细胞及嗜碱性粒细胞相关性.结果 治疗前患儿血浆IL-37b含量明显低于对照组(P＜0.01);治疗后患儿血浆IL-37b水平明显上升,但仍低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).血浆IL-37b水平与IgE、嗜酸性粒细胞及嗜碱性粒细胞呈显著负相关(P＜0.01).结论 IL-37b可能参与儿童AR的发生和发展.
