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2-脱氧葡萄糖对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的影响
目的 探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)对常染色体显性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞WT9-12增殖的影响及其可能的作用机制.方法 将体外培养的细胞分为对照组、不同浓度2-DG处理组(5、10、20、40 mmol/L).用CCK-8法筛选不同浓度2-DG处理多囊肾上皮细胞不同时间(12、24、36、48 h)后,抑制细胞增殖活力的适浓度和适时间.采用EdU核酸标记技术和Western blot检测2-DG适浓度处理多囊肾上皮细胞48 h后细胞的增殖抑制情况及代谢相关磷酸化-AMPKα(P-AMPKα)及增殖相关mTOR信号通路分子磷酸化-mTOR、p70S6K、4E-BP1 (P-mTOR、P-p70S6K、P-4E-BP1)的水平变化;流式细胞术及Caspase-3试剂盒检测不同浓度2-DG处理多囊肾上皮细胞48 h后细胞的凋亡率.结果 与对照组比较,2-DG可明显抑制多囊肾上皮细胞的增殖,且呈浓度和时间的依赖性(P＜0.05);细胞代谢相关分子P-AMPKα的水平明显升高(P＜0.05),增殖相关mTOR信号通路分子P-mTOR、P-p70S6K、P-4E-BP1的活性明显抑制(P＜0.05);与对照组比较,各浓度2-DG处理组的多囊肾上皮细胞早期凋亡率均明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 2-DG可能通过调控AMPK-mTOR信号通路,促进细胞凋亡,共同抑制多囊肾上皮细胞增殖.
关键词： 2-脱氧葡萄糖 常染色体显性多囊肾病 肾囊肿衬里上皮细胞 增殖 -
齐墩果酸对人肾囊肿衬里上皮细胞周期及凋亡的影响
目的:观察齐墩果酸对人肾囊肿衬里上皮细胞WT9-12的增殖抑制作用,探讨其对WT9-12细胞周期及凋亡的影响.方法:MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡,Western blotting方法检测周期相关蛋白P21CIP/WAF1、cyclinD1及凋亡蛋白PARP的表达.结果:MTT实验证实齐墩果酸对人肾囊肿衬里上皮细胞WT9-12的增殖有抑制作用,并表现为时间及剂量依赖性,200 μmol/L齐墩果酸作用72 h对细胞的增殖抑制率为37.15%,与同浓度罗格列酮的增殖抑制率无明显差异;流式细胞术检测发现齐墩果酸能使细胞阻滞在G0/G1期,并诱导细胞早期凋亡,齐墩果酸浓度越高,阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡的作用越明显;western blotting方法检测发现齐墩果酸抑制周期蛋白cyclinD1表达,促进P21 CIP/WAF1表达,并且促进PARP活性片段的表达.结论:齐墩果酸在体外能够抑制人肾囊肿衬里上皮细胞WT9-12的增殖,对细胞周期的阻滞和促进细胞凋亡是其作用机制之一.
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羧酸类化合物DJ5对人肾囊肿衬里上皮细胞的增殖抑制作用
目的:观察羧酸类化合物DJ5对人肾囊肿衬里上皮细胞WT9-12的增殖抑制作用并探讨其作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖,LDH释放实验检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测周期相关蛋白P21、cyclinA,凋亡蛋白PARP,通路蛋白Akt、FoxO3a蛋白表达.结果:实验表明100 μmol/L的DJ5作用WT9-12细胞72 h,细胞增殖抑制率为59.2%,DJ5使细胞周期阻滞在S期并促进细胞早期凋亡.DJ5可上调WT9-12细胞周期抑制蛋白P21表达、下调cyclinA表达;使PARP活性片段89 kD表达明显增加.DJ5可下调磷酸化Akt、磷酸化FoxO3a表达、上调FoxO3a表达.结论:DJ5通过阻滞细胞周期、促进细胞凋亡及抑制Akt-FoxO3a通路蛋白发挥抑制WT9-12细胞增殖作用.
关键词： DJ5 常染色体显性多囊肾病 羧酸类化合物 肾囊肿衬里上皮细胞
