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B型肉毒素干预chokeⅡ区对大鼠跨区皮瓣的影响
目的 研究B型肉毒毒素(BTX B)术中干预大鼠背部跨区穿支皮瓣chokeⅡ区对皮瓣成活的影响.方法 在大鼠背部建立三血管体穿支皮瓣模型,50只SD大鼠采用数字表法随机分为实验组(B型肉毒素组)和对照组(生理盐水组),术后即刻,对实验组皮瓣chokeⅡ区皮下间隔0.2mm均匀注射100U,总计1500U(约0.3ml)BTX B,对照组采用相同剂量生理盐水均匀注射chokeⅡ区.术后7天分别检测两组皮瓣的成活率;用明胶-氧化铅灌注进行皮瓣造影;取蒂部组织做HE测蒂部穿支动脉血管管径变化;取chokeⅡ区域组织做HE测微血管数量;取chokeⅡ区域组织做RT-PCR测VEGF、HIF-1α的表达情况.结果 术后7天,实验组皮瓣的成活面积(90±2.9)％显著高于对照组(75±3.2)％,差异有统计学意义(P＜0.01);明胶-氧化铅灌注造影显示实验组choke区真性吻合数较对照组明显增多.实验组chokeⅡ区VEGF、HIF-1α基因表达均明显高于对照组(P＜0.01).实验组蒂部穿支动脉管径大于对照组(P＜0.01),新生血管计数高于对照组(P＜0.05).结论 B型肉毒毒素可以促进皮瓣choke血管扩张及血管新生改善皮瓣血供,从而提高了大鼠背部跨区穿支皮瓣的成活.
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B型肉毒毒素中毒的实验诊断及分析
目的:于2003年初,在江苏地区,因食入自制豆酱后,引起家庭内食物中毒病因的检测.方法:由临床医生依据患者的主诉和症状,初步判定为疑似食物中毒,病因不明.经过流行病学调查,收集患者进食的剩余食品,样品经过处理,进行肉毒毒素的毒力测定试验,肉毒毒素的分型试验以及肉毒梭菌的分离和培养试验.结果:测定自制豆酱中肉毒毒素含量LD50为2万单位;所检出的毒素为肉毒毒素B型.结论:综合临床诊断,流行病学调查资料和实验诊断结果,推断此次食物中毒的病因为自制豆酱中的B型肉毒毒素.
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B型肉毒毒素单克隆抗体杂交瘤株的建立
[目的]制备、筛选稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,为相关研究提供工具.[方法]采用纯化的B型肉毒毒素免疫BALB/c小鼠,用免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选阳性克隆.[结果]得到10株稳定分泌B型肉毒毒素单抗的杂交瘤克隆,1株为IgM,其余9株分泌IgG,亚类为IgG2a.10株单克隆抗体均与B型肉毒毒素呈特异性反应,而与标准A型肉毒毒素无交叉反应,腹水单抗的效价均在105以上.[结论]10株杂交瘤细胞株均能分泌抗B型肉毒毒素单克隆抗体,为B型肉毒毒素的检测和研究提供了工具.
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外源性蛋白酶对肉毒毒素的作用初探
将B型肉毒毒素在毒素粗提阶段用胰蛋白酶处理,再经浓缩、柱层析和结晶得到纯化的B型肉毒毒素复合物.结果表明:B型肉毒神经毒素经胰蛋白酶处理后单链裂解为双链,在非还原条件下SDS-PAGE显示神经毒素条带,在还原条件下SDS-PAGE只显示轻(L)、重(H)二链条带,而不显示神经毒素条带;纯化后毒素复合物的比活性提高了5.9倍,达到1.60×108LD50/mgPr;HPLC显示活性成分峰面积所占比例增加了9.83%.
