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  • 鼠脑心肌炎病毒TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法的建立

    作者:蔡骁垚;张泉;陈懿斐;林颖峥;熊炜;魏晓锋;陈鸿军

    目的 建立快速诊断鼠脑心肌炎病毒感染的荧光定量RT-PCR方法.方法 根据鼠脑心肌炎病毒(EMV)PEC9毒株全基因组序列(GenBank登录号:DQ288856.1),设计一对特异性引物和TaqMan探针,建立EMV的TaqMan探针荧光定量RT-PCR方法,进行条件优化,检测其特异性,敏感性,稳定性.结果 建立的荧光定量PCR方法,标准曲线的线性关系良好,r2值可达0.99,敏感性低检测限为1个拷贝数,高于普通PCR方法1000倍,其特异性强,与其他常见感染的小鼠病毒株均无特异性扩增,批内和批间变异系数均小于2%.利用该方法对上海市120份小鼠心肌样品进行检测,未检测到阳性感染.结论 本研究为鼠脑心肌炎病毒感染的分子检测,为制定国家标准提供良好的方法.

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