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LASS2、Ki67表达与鼻咽癌复发的相关性及其意义
目的 探讨LASS2及Ki67表达与鼻咽癌复发的相关性及其意义.方法 收集我院2011年～2014年的126例鼻咽癌活检标本,其中首发病例77例,复发病例49例.采用免疫组织化学方法检测LASS2及Ki67在126例鼻咽癌活检组织中的表达,分析LASS2及Ki67在两组间的表达差异及其之间的相关性.结果 LASS2在复发病例中的阳性率为61.2％,低于首发病例的88.3％,差异有统计学意义(P＜0.001).Ki67与鼻咽癌复发无显著相关性(P＞0.05),但LASS2表达与Ki67表达相比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 LASS2在鼻咽癌复发的病例中呈低表达,检测LASS2蛋白可能有助于提示肿瘤是否容易复发,LASS2在预测鼻咽癌复发中可能具有重要的临床意义.LASS2与Ki67存在负相关,提示LASS2有可能抑制鼻咽癌肿瘤细胞的增殖.
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miRNA-20a在膀胱癌中的表达及其机制研究
目的:探讨miRNA-20a在膀胱癌组织中的表达及其机制.方法:收集2014年1月至2015年1月昆明医科大学第二附属医院96例患者的组织标本,运用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测miRNA-20a在膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;生物信息学方法预测miRNA-20a的靶基因并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证;qRT-PCR、Western blot以及细胞免疫荧光分别检测人膀胱癌细胞系T24和J82细胞转染miRNA-20a模拟物或阴性对照后对靶基因mRNA和蛋白表达的影响;CCK-8、Transwell侵袭小室和划痕实验检测过表达miRNA-20a后T24细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的改变.结果:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且与肿瘤的病理分级、临床分期、转移以及复发密切相关(P<0.001);双荧光素酶报告基因实验证实miRNA-20a与人源性长寿保障基因2(Homo sapiens longevity assurance homologue 2,LASS2)的3'-UTR直接靶向结合;转染miRNA-20a模拟物可显著下调膀胱癌细胞中LASS2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),增强膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力(P<0.01).结论:miRNA-20a在膀胱癌组织中高表达,且miRNA-20a可通过靶向抑制LASS2促进膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,与膀胱癌的发生发展相关.
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靶向LASS2基因的小干扰RNA对人肝癌细胞侵袭能力的影响
目的:研究靶向人源性长寿保障基因2(homosapiens longevity assurance homologue 2,LASS 2)的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌细胞MHCC97-L体外侵袭能力的影响.方法:通过脂质体转染将靶向LASS2的siRNA转染MHCC97-L细胞,运用实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)检测转染后LASS2 mRNA的表达,筛选有效的siRNA片段;运用 BCECF氢离子敏感荧光探针检测MHCC97-L细胞跨膜运输氢离子的功能;采用Western印迹法分析MHCC97-L细胞及上清液中基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)的表达情况;应用明胶酶谱法检测MHCC97-L细胞上清液中MMP-2的活性; Transwell法检测细胞体外侵袭能力.结果:筛选得到靶向LASS2的有效siRNA-1片段.MHCC97-L细胞转染LASS2 siRNA-1后,其跨膜运输氢离子的能力增强,与空白对照组比差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2蛋白的表达及分泌无明显变化,但分泌的MMP-2活性形式增加,与空白对照组和无关序列组比明显提高,差异有统计学意义(P<0.05);且细胞的体外侵袭能力明显高于无关序列组和空白对照组(P<0.05).结论:靶向LASS2的siRNA能有效下调其表达,并能提高MHCC97-L细胞在转染LASS2 siRNA后的体外侵袭能力.
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LASS2基因抑制HCCLM3肝癌细胞的转移
目的:探讨LASS2基因对HCCLM3肝癌细胞转移的影响.方法:Northern blot分析高转移潜能肝癌细胞系HCCLM3和低转移潜能肝癌细胞系MHCC97-L中LASS2基因的mRNA水平.构建包含LASS2基因编码框的真核表达载体pCMV-HA2-LASS2,通过脂质体转染HCCLM3细胞,经G418筛选,建立稳定表达LASS2基因的HCCLM3细胞株.通过分析LASS2在HCCLM3中过表达后,HCCLM3细胞在迁移、侵袭等转移能力上的改变,Western blot、明胶酶谱及原位酶谱分析MMP-2合成、分泌、激活的变化.结果:Northern blot显示,HCCLM3细胞中LASS2基因的表达水平低于MHCC97-L细胞.当LASS2基因过表达后,HCCLM3细胞的迁移及侵袭能力受到显著抑制(P＜0.001),虽然细胞内MMP-2的合成未改变,但细胞MMP-2的分泌及MMP-2的激活均受抑制.结论:LASS2基因可下调MMP-2的分泌及激活,可使肝癌细胞HCCLM3的转移能力受到明显抑制,提示LASS2基因对肝癌细胞HCCLM3的转移具有抑制作用.
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肿瘤抑制基因LASS2在裸鼠膀胱癌模型中的表达及其与肿瘤增殖和凋亡的关系
目的 膀胱癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤之一,关于膀胱癌的发病机制仍未得到全面而深入的研究.LASS2是我国新近发现的肿瘤抑制基因,文中通过检测LASS2在裸鼠膀胱癌模型中的表达,探讨LASS2与肿瘤增殖和凋亡的关系及可能的分子机制.方法 采用抽签方法将30只裸鼠随机分为皮下种植组、原代灌注组及空白对照组(DMEM膀胱癌细胞培养基),每组10只.皮下膀胱癌种植模型将已制备的细胞悬液按每只0.5 mL(即5×106/0.1 mL个细胞)注射入裸鼠左腋皮下.原位膀胱癌种植模型在裸鼠排空膀胱后将100μL EJ(即1×107个细胞)单细胞悬液灌注入膀胱,观察裸鼠致瘤情况.检测不同部位成瘤组织中LASS2、Ki-67的表达及增殖、凋亡等指标变化.结果 皮下种植组皮下肿瘤形成,成瘤率为100%.原位灌注组、皮下种植组及空白对照组裸鼠肉眼及病理切片均未检测到肝、肺、肾等器官及淋巴结转移.与空白对照组LASS2表达(81.0%)比较,原位灌注组、皮下种植组LASS2表达(60.0%、14.0%)显著减少(P<0.05);与空白对照组Ki-67表达(16.0%)比较,原位灌注组、皮下种植组Ki-67表达(50.0%、78.0%)增加(P<0.05);与原位灌注组比较,皮下种植组LASS2表达(14.0%)明显减少(P<0.05),Ki-67表达(78.0%)增加(P<0.05).与空白对照组比较,皮下种植组、原位灌注组Bcl-2表达明显升高(P<0.05);与皮下种植组比较,原位灌注组Bcl-2表达升高(P<0.05);而Bcl-xl在原位种植瘤组织中的表达高于其他两组(P<0.05);Bax和Bim均呈现低表达,Bax在各组中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,皮下种植组Bim表达明显降低(P<0.05),而原位种植瘤组差异无统计学意义(P>0.05).caspase3在各组组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);而ki-67在皮下种植瘤组织中的表达较其他两种肿瘤组织中的表达显著升高(P<0.05);LASS2在空白对照组中的表达较其他两组表达显著升高(P<0.05).结论 LASS2具有抑制肿瘤增殖的作用,其表达可能与膀胱癌EJ细胞体内成瘤能力、增殖和凋亡有关.
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新的肿瘤转移抑制基因LASS2在不同侵袭潜能的膀胱癌细胞中表达的体外研究
目的 探讨新发现的肿瘤转移抑制基因人源性长寿保障基因Ⅱ型(homo sapiens longevity assurance homologue2,LASS2)与人膀胱癌细胞侵袭潜能的关系.方法 通过细胞生长曲线和体外侵袭实验,确定膀胱癌BIU-87、EJ、T24和EJ-M3细胞的增殖和侵袭能力;运用实时定量PCR法和Western blot法检测4株细胞中LASS2基因的表达.结果 4株膀胱癌细胞中,EJ-M3的增殖和侵袭能力强;增殖和侵袭能力高的细胞系EJ-M3和BIU-87的LASS2 mRNA表达降低(P<0.001),而在低转移能力的人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中则相对较高表达.结论 LASS2基因表达的降低,可能与膀胱癌细胞的增殖和侵袭有关.
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LASS2在鼻咽癌中的表达及其意义
目的:探讨LASS2在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的发生与发展中的作用.方法:收集2011年6月至2014年12月佛山市顺德区中医院治疗并随访的Ⅰ~Ⅳ期鼻咽癌病例127例,其中鼻咽癌Ⅰ期12例(A组),鼻咽癌Ⅱ期26例(B组),鼻咽癌Ⅲ期52例(C组),鼻咽癌Ⅳ期37例(D组),以及慢性鼻咽炎病例49例(E组).采用免疫组织化学方法检测LASS2蛋白在鼻咽活检组织中的表达.并收集鼻咽癌各组的相关临床资料,分析LASS2表达与各临床因素之间的相关性.结果:LASS2在鼻咽癌病例中的表达率(A,B,C,D组表达的百分率分别是75%,73.1%,78.8%及81.1%)低于慢性鼻咽炎病例中的表达率(E组表达的百分率为100%),其差别具有统计学意义(P=0.008).LASS2的表达与肿瘤的复发存在负相关性(P=0.001),但LASS2阳性病例与LASS2阴性病例的无瘤生存期的差别无统计学意义(P>0.05).结论:LASS2是一种抑癌基因,其蛋白产物表达于非肿瘤性的鼻咽组织中.鼻咽癌发生过程中可能发生了蛋白的丢失,从而促进鼻咽癌的发病.LASS2蛋白的丢失与鼻咽癌复发也存在相关性,LASS2可能成为预测鼻咽癌复发的有临床意义的生物学指标.
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不同分级与分期膀胱癌人微小核糖核酸3658和人源性长寿保障基因Ⅱ型表达的变化
目的：检测人微小核糖核酸3658（miR－3658）和人源性长寿保障基因Ⅱ型（LASS2）在不同病理分级、临床分期膀胱癌组织中的表达情况。方法通过实时荧光定量PCR检测96对新鲜膀胱癌组织（膀胱癌组）和癌旁正常组织（癌旁组）中miR－3658和LASS2基因的表达情况；采用免疫组化法检测LASS2的蛋白表达。结果采用2－ΔΔCt的相对表达量分析，膀胱癌组的miR－3658表达水平显著高于癌旁组，而膀胱癌组LASS2的表达水平低于癌旁组（P＜0.01）。不同病理分级、临床分期膀胱癌组织之间，miR－3658和LASS2基因均呈差异性表达。与高分化膀胱癌相比，低分化膀胱癌miR－3658呈高表达，LASS2呈低表达（ P＜0.01）。随着肿瘤浸润深度及临床分期的增加，miR－3658表达水平呈递增趋势，而LASS2则逐渐下降（P＜0.01）。免疫组化结果显示，膀胱癌组LASS2蛋白阳性表达率低于癌旁组，且随着肿瘤病理分级、浸润深度、分期程度的增加，其阳性表达率逐渐降低（ P＜0.05）。结论 miR－3658的高表达及LASS2的低表达可能参与膀胱癌的发生发展过程，并与其恶性程度相关。
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LASS2的研究现状及其在膀胱肿瘤的应用前景
人源性长寿保障基因Ⅱ型（LASS2）是我国研究发现的一种可以抑制肿瘤侵袭和转移的基因，它位于染色体1q21，预测编码蛋白质的分子量大小为27KD。LASS2在高转移潜能的细胞系中低表达，在低转移潜能的细胞系中高表达，提示LASS2的表达和肿瘤转移负相关。但其作用机制至今仍不清楚，有待进一步明确。现就LASS2的研究现状及其在膀胱肿瘤的应用前景做一综述。
