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心肌细胞二维培养的纯化和鉴定
目的 探讨新生大鼠心肌细胞二维培养过程中心肌细胞的纯化及心肌细胞与成纤维细胞的鉴别,为改进心肌细胞二维培养及心肌细胞三维培养提供依据.方法 用不同差速贴壁次数、含Brdu 培养心肌细胞,免疫荧光标记后用激光共聚焦显微镜分别对24h的细胞进行分析鉴定.结果 不同培养方法对心肌细胞的纯化有影响.结论 差速贴壁次数的不同得到的心肌细胞纯度不一样,加入适当浓度的Brdu可抑制成纤维细胞的生长,获得纯度更高的心肌细胞.
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人皮肤成纤维细胞在二维和三维培养系统中的生长代谢特性
目的:观察人皮肤成纤维细胞在二维和三维培养系统中的生长和代谢特性.方法:实验于2005-02/2006-02在华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室完成.从小儿包皮(患者家属知情同意并自愿捐献)真皮层中分离人皮肤成纤维细胞.分别以方瓶和微载体转瓶作为二维培养系统,以胶原-壳聚糖海绵状支架作为三维培养系统,将人皮肤成纤维细胞分别接种至不同系统中进行批培养和换液培养,每隔24 h取样,采用结晶紫染色和MTT法检测细胞的增殖情况,用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析培养上清中葡萄糖和乳酸含量,以观察细胞的代谢情况.结果:对数生长期三维培养系统中人皮肤成纤维细胞平均比生长速率为二维培养系统中的0.25倍,葡萄糖比消耗速率为二维培养系统中的0.93倍,平均乳酸产率为二维培养系统中的1.56倍,细胞对葡萄糖的生长得率为二维培养系统中的0.26倍.比较人皮肤成纤维细胞在两种培养系统中增殖和代谢特性,发现三维培养的细胞比二维培养的细胞生长更缓慢,细胞中进行无氧代谢的葡萄糖占总葡萄糖代谢流量的比例高于二维培养的细胞,因此,葡萄糖代谢能量利用率低于二维培养的细胞.结论:二维培养系统,尤其微载体转瓶中,人皮肤成纤维细胞生长快速,葡萄糖代谢能量利用率高,适合于大量制备组织工程种子细胞.根据细胞在胶原-壳聚糖海绵状支架中生长代谢情况,要求工程化组织体外培养过程中应着重于改善三维支架内的物质传递情况.
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细胞培养中的三维支架
三维细胞培养所创建的3D生长环境,能够大程度地模拟体内情形,使细胞呈现出空间立体生长的模式,形成类似体内细胞的组织结构,并发挥其功能.因此,三维培养己广泛用于组织工程、药物筛选和基础生命科学等研究领域.本文就3D培养产生的背景、3D培养的应用和3D培养支架应该具备的特性等内容进行了综合评述与回顾.
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细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响
目的:分析细胞骨架结构改变对软骨细胞表型的影响.方法:二维及三维微团培养兔膝关节软骨细胞,分别破坏软骨细胞骨架的微管、肌动蛋白及波形蛋白,分析细胞骨架改变引起软骨细胞表型改变的关系.结果:破坏软骨细胞骨架的波形蛋白,可引起Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达下降,且三维微团培养较二维培养下降更明显,而Ⅰ型胶原蛋白表达则无明显改变:破坏软骨细胞骨架的微管,不引起Ⅰ型胶原蛋白、Ⅱ型胶原蛋白及蛋白聚糖表达的改变;破坏软骨细胞骨架的肌动蛋白,在二维培养条件下可促进Ⅱ型胶原蛋白的表达,而在三维微团培养条件下,Ⅱ型胶原蛋白表达则无明显改变.结论:波形蛋白对维持正常软骨细胞表型起重要作用.
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二维及微团培养法对软骨细胞表型的影响
目的：探讨二维及微团培养对软骨细胞表型的影响。方法体外高密度二维及微团培养方法培养兔软骨细胞，从细胞形态、细胞外基质表达情况分析软骨细胞表型的差异。结果高密度二维方案培养兔软骨细胞，2周后软骨细胞多层分布， HE染色显示细胞呈圆形，细胞间联系较密，阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌较少；微团培养方法培养兔软骨细胞，2周后形成肉眼可见的白色组织，HE染色显示细胞呈多边形，细胞较分散，阿尔新蓝染色显示细胞外蛋白多糖分泌明显多于二维培养，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论微团培养方法培养兔软骨细胞，有利于软骨细胞分泌细胞外基质。
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细胞培养技术的研究进展
随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现.本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述.
