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饥饿诱导DRAM介导的自噬与HepG2和Hep3B细胞凋亡的关系
目的 探讨饥饿诱导损伤调节自噬调控基因(DRAM)介导的自噬在HepG2细胞和Hep3B细胞凋亡中的作用.方法 HepG2细胞和Hep3B细胞经饥饿处理后,观察DRAM的表达和自噬的发生;利用DRAM小干扰RNA(siRNA)阻断DRAM,观察饥饿诱导的自噬水平；采用Calcein AM/PI染色,观察DRAM siRNA对饥饿引起的细胞凋亡的影响.结果 经饥饿处理后12、24、36h,HepG2细胞和Hep3B细胞内DRAM mRNA均显著高于处理前(P＜0.001),细胞凋亡明显增加(P＜0.01),但两种细胞系间细胞凋亡计数的差异无统计学意义.DRAM siRNA阻断DRAM的功能后,HepG2和Hep3B细胞自噬减少,但对饥饿引起的细胞凋亡没有明显影响.结论 DRAM参与了饥饿诱导的自噬,可能不是饥饿引起肝癌细胞凋亡的机制.
关键词： 损伤调节自噬调控基因 自噬 凋亡 -
饥饿诱导DRAM介导的自噬与肝细胞凋亡的关系
目的 探讨在饥饿情况下,自噬与正常肝脏细胞凋亡的关系,及凋亡与损伤调节自噬调控基因(damage-regulated autophagy modulator,DRAM)介导的自噬之间的关系.方法 采用无血清培养基培养正常肝脏细胞系7702细胞36h,采用M30免疫荧光染色观察凋亡,采用免疫印记检测自噬和DRAM基因的表达水平;并用DRAM特异的小干扰RNA (siRNA)阻断DRAM作用后,观察凋亡和自噬的水平.结果 和0h相比,在12、24和36h 3个时间点,饥饿可明显诱导7702细胞凋亡(P＜0.001).免疫印记结果显示,饥饿后第12、24和36小时的DRAM水平和自噬水平均逐渐增高,两两比较,差异有统计学意义(P＜0.05).用DRAM siRNA阻断DRAM功能后,在12、24和36h未检测到DRAM的表达,同时凋亡细胞数明显下降(P＜0.05).DRAM siRNA阻断DRAM功能后,在12、24和36 h的自噬水平无明显差异.结论 DRAM介导的自噬可导致正常肝脏细胞凋亡,其对凋亡的影响可能成为肝癌研究的新思路.
关键词： 损伤调节自噬调控基因 凋亡 自噬 -
损伤调节自噬调控基因对胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响
目的 研究损伤调节自噬调控基因( DRAM)对胃癌SGC7901细胞移植瘤放射敏感性的影响.方法 取对数生长期的人胃癌SGC7901细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、DRAM组(在瘤体约为1.0 cm3时,在瘤周注射携带DRAM基因的腺病毒Admax-pDC315-DRAM-EGFP)、放疗组、放疗联合DRAM组,对瘤体进行剂量为10 Gy局部放疗,分别在放疗后3、6、9d处死裸鼠,切取肿瘤,计算抑瘤率.用免疫组化方法检测P53、PCNA、C-myc、Fas-L蛋白的表达.结果 放疗联合DRAM组的抑瘤率在3、6、9d分别为9.3％、14.1％、16.7％,均显著高于单纯放疗组(5.0％、8.8％、6.5％)(P＜0.05)；在空白对照组、DRAM组、放疗组、放疗联合DRAM组中,随时间延长PCNA和C-myc蛋白表达的阳性率逐渐下降,而P53和Fas-L蛋白表达的阳性率逐渐增强.结论 DRAM基因可通过促进细胞凋亡和抑制细胞增殖,增强裸鼠皮下胃癌移植瘤的放射敏感性.
关键词： 胃肿瘤 损伤调节自噬调控基因 增殖 放射敏感性
