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HPLC法同时检测血浆中半胱氨酸/胱氨酸和还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽的氧化还原电势
目的 本研究拟探讨一种比较敏感、能同时检测血浆中半胱氨酸( cysteine,Cys)/胱氨酸(cystine,CySS)和还原型谷胱甘肽( reduced glutathione,GSH)/氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量及相应的氧化还原电势(Eh)的方法.方法 取大鼠全血,去除红细胞及蛋白后用碘乙酸封闭自由的巯基,通过丹磺酰氯衍生化后,利用高效液相色谱( high performance liquid chromatography,HPLC)进行分离,根据能斯特方程计算相应的氧化还原电势.结果 本方法可同时测定体内GSH/GSSG和Cys/CySS的含量及相应的氧化还原电势,灵敏度高、准确性强.结论 本研究提供了一种简便有效地检测血浆中氧化还原状态的方法,可能为诊断与氧化应激相关疾病提供新的依据.
关键词： 高效液相色谱 氧化还原电势 胱氨酸/半胱氨酸 谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽 氧化应激 -
氧化应激衰老与氧还电位的迷思
生物体内大量的和毁灭性的自由基化学作用导致氧化和抗氧化的失衡,可造成与衰老相关的氧化应激.硫醇系统在这些生命过程中起重要的调控作用.它不仅能保护机体免受损伤,而FL能通过氧化还原信号机制感知危险和修复损伤.研究发现,可对人体血浆中的谷胱甘肽(GSH)、半胱氨酸(Cys)等抗氧化剂的氧化还原状态(redox state,RS)进行检测.从而为氧化应激系统地提供定量指标.在细胞水平上,细胞调控胞外Rs.胞内还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSC)的RS随衰老向氧化方向偏移.对一些吸烟,化疗人群,以及患有与衰老相关的疾病(如2型糖尿病、心血管疾病)的受试者的研究表明,人体血浆中GsH/GssG的Rs随着年龄的增长而被不断氧化.然而,深入研究发现,GsH/GssG的Rs与其它主要的硫醇/二硫化物氧化还原对(Cys/CySS;硫氧还蛋白,Trx-1)的Rs小守恒.此外,体内测得的氧还电位在一定范围内可影响细胞信号通路,并在体外能够调控细胞增殖与细胞凋亡.由于硫醇/二硫化物的Rs具有指示细胞调控信号和氧化还原状态的作用,凶此GSH/GSSG和Cys/CySS的RS仍然可以用作关联环境影响冈子与衰老发展进程的重要参数.
关键词： 氧化应激 谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽 Cys/CySS 氧化还原状态 衰老
