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负载乙肝核心抗原-黑色素瘤抗原-A3融合蛋白的外周血单个核细胞对人非小细胞肺癌细胞体外杀伤作用的实验
目的 研究经负载乙肝核心抗原(hepatitis B core antigen, HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3, MAGE-A3)融合蛋白的外周血单个核细胞(peripheral hlooH monocyte cell, PBMC)激活的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte, CTL)对MAGE-A3高表达人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用.方法 从健康人外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood monocyte cell, PBMC),使用白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)刺激PBMC, 将负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白的PBMC与正常PBMC共培养,诱导出特异性细胞毒性T淋巴细胞,以该共培养后的PBMC作为效应细胞,以高表达MAGE-A3抗原的人非小细胞肺癌细胞株NCI-H358为靶细胞,低表达MAGE-A3抗原的细胞系HEK-293T作为对照,进行肿瘤细胞杀伤试验.结果 负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白抗原的外周血单个核细胞能够成功诱导出特异性的细胞毒性T淋巴细胞,并且对非小细胞肺癌细胞有显著的杀伤作用,其杀伤率显著高于对照组(P ＜ 0.05).当使用MAGE-A3高表达的NCI-H358细胞作为靶细胞,效靶比(E: T)=10: 1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为60％, HBVc组和空白对照(no template control, NTC)组的杀伤率约为35％; E: T=20: 1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为90％,HBVc组和NTC组的杀伤率约为45％.当使用MAGE-A3低表达的HEK-293T作为靶细胞时,三组间杀伤率差异无统计学意义.结论 MAGE-A3融合蛋白抗原负载的外周血单个核细胞可以在体外成功诱导出特异性针对非小细胞肺癌细胞的细胞毒性T淋巴细胞,并具有特异性免疫杀伤作用.
关键词： 外周血单个核细胞 黑色素瘤相关抗原-A3 非小细胞肺癌 -
黑色素瘤相关抗原-A3蛋白激活树突状细胞诱导CD8+细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗肝细胞癌
目的 探讨黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)蛋白激活树突状细胞(DC),然后诱导产生CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)进行免疫治疗肝细胞癌(简称肝癌)的效果.方法 利用MAGE-A3蛋白诱导DC成熟并检测DC表面标志物及白细胞介素(IL)-10、IL-12表达,然后利用成熟的MAGE-A3-DC诱导MAGE-A3特异性CD8+CTL,并检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL 对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的杀伤作用.建立BALB/c-nu/nu肝癌模型,检测MAGE-A3-DC-CD8+CTL对小鼠肿瘤的抑制作用,并通过病理学切片观察肿瘤组织变化.结果 MAGE-A3蛋白刺激能够显著上调DC表面标志物DC80、DC83、DC86和人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR)水平(97.45±2.58 比48.33±1.68,92.81±2.36比52.92±1.90,94.00±3.01比53.97±2.05,92.16±1.87比34.13±1.32;t=35.680,P=0.013;t=29.440,P=0.021;t=24.580,P=0.012;t=56.690,P=0.009);与磷酸盐缓冲液(PBS)刺激的DC比较,MAGE-A3蛋白能够显著促进DC释放IL-12[(338.44±18.15)pg/ml 比(243.23±16.56)pg/ml;t=8.670,P=0.005]和显著抑制IL-10的释放[(207.21±10.89)pg/ml比(327.58±14.36)pg/ml;t=14.930,P=0.009].MAGE-A3-DC-CD8+CTL和DC-CD8+CTL展示了相近的L02细胞杀伤效果[(9.10±1.40)%比(9.71±1.58)%;t=0.650,P=0.120],与DC-CD8+CTL 比较,MAGE-A3-DC-CD8+CTL展示了显著的HepG2细胞杀伤效果[(58.84±5.27)%比(9.63±1.61)%;t=19.970,P=0.008].BALB/c-nu/nu肝癌小鼠经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL治疗后,肿瘤体积比显著低于PBS组和DC-CD8+CTL组(5.43±1.22比21.81±2.01比22.85±2.40;t=22.030,P=0.010;t=20.460,P=0.012).苏木素-伊红(HE)染色结果显示,经过MAGE-A3-DC-CD8+CTL处理的肿瘤组织细胞核固缩,细胞间隙增大,出现空泡和水肿现象,而PBS组和DC-CD8+CTL组肿瘤组织无病理学改变.结论 MAGE-A3蛋白能够刺激DC细胞成熟并诱导产生MAGE-A3蛋白特异性CD8+CTL,MAGE-A3-DC-CD8+CTL具有特异性的肿瘤杀伤能力.
