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腺病毒介导神经生长因子对遗传性视网膜变性RCS大鼠视细胞的营救
目的:探讨先天性视网膜变性病因以及对其进行基因治疗的可行性.方法:TUNEL法对RCS大鼠视细胞的丧失进行研究;构建分泌表达型重组腺病毒穿梭质粒pAdE1CMV-NGF,经与 p JM17在293细胞中同源重组,获得复制缺陷型重组腺病毒AdE1CMV-NGF.琼脂糖覆盖法测定滴度.AdE1CMV-NGF和AdE1CMV-LacZ转导培养视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium , RPE)细胞.将AdE1CMV-LacZ转导组进行x-gal染色估计转导效率,取AdE1CMV-NGF转导组RPE细胞及其条件培养液,用RT-P C R和Western Blot进行表达检测,用条件培养液刺激PC12细胞,证实表达活性.直接进行RCS 大鼠视网膜下腔转导,一眼注射AdE1CMV- NGF,则另一眼注射AdE1CMV- LacZ,左右眼随机进行.光镜下观察视细胞存活情况.结果:TUNEL法显示25、35、45、55及6 5 d RCS大鼠视网膜视细胞层存在广泛凋亡; AdE1CMV-NGF的滴度可达5×1010 pfu/ml; 4.6×106 pfu/ml滴度AdE1CM V-LacZ可使RPE细胞发生100%转导; PC12细胞受AdE1CMV-NGF转导RPE细胞条件培养液刺激长出突触; AdE1CMV-NGF视网膜下腔注射使RCS鼠视细胞存活时间明显延长,达15 d以上. 结论: 视网膜变性模型RCS大鼠视细胞的丧失是以凋亡方式进行 ,腺病毒介导神经生长因子可延长其存活时间.
关键词： 神经生长因子/药理学 脱噬作用 基因疗法 视网膜变性 /治疗 -
神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究
目的 观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,将HSC-T6与100 ng/ml NGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡；细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况；免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况.结果 NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[(22.36±9.51)％ vs(5.88±1.36)％,P＜0.05].凋亡相关蛋白p53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[(78.41±4.00)％、(39.26±1.57)％ vs (34.96±3.84)％、(9.27±1.01)％,P＜0.05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[(18.12±1.38)％ vs (91.53±2.98)％,P＜0.05].NGF作用HSC后NGF表达增多(6.53±1.40 vs 1.77±0.17,P＜0.05),而p75NTR表达无明显变化(3.52±0.36 vs4.24±0.38,P＞0.05).结论 NGF可能通过使凋亡相关基因P53、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡.NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响.
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神经生长因子对吲哚美辛诱导人胚胎视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用
目的探讨神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对体外培养的人胚胎视网膜色素上皮(human fetal retinal pigment epithelium, HFRPE)细胞凋亡的保护作用. 方法用传代培养的HFRPE细胞,建立吲哚美辛(indomethacin, IN)诱导的细胞凋亡模型,并用吖啶橙(acridine orange, AO)荧光染色计数和透射电镜(transmission electron microsocpy,TEM)观察NGF对HFRPE细胞凋亡的保护作用. 结果用AO荧光染色及TEM均观察到经200～600 μmol/L IN处理24 h后的HFRPE细胞出现典型的凋亡形态学改变.200 μmol/L IN+500 μg/L NGF组与对照组200 μg/(mol*L) IN相比凋亡细胞差异有显著性的意义(q=3.9204,P=0.0320);400 μmol/L IN+500 μg/L NGF组与对照组400 μmol/L IN相比凋亡细胞差异有非常显著性的意义(q=9.709 15,P=0.000 1). 结论 NGF能拮抗IN诱导的HFRPE细胞凋亡.
