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中药黄芪当归合剂对肾病综合征肾损伤的保护作用及对代谢紊乱的影响
为明确黄芪、当归在肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)治疗中的作用、适应证及其作用机制,我们从临床和实验两方面进行了系统的研究.(1)黄芪当归合剂对肾脏的保护作用:各种肾脏疾病慢性病变经过肾硬化、纤维化,终发展成为终末期肾衰竭.如何阻断这一发展通路已成为国际肾脏病界研究的热点.本研究选用慢性嘌呤霉素肾病模型,以目前公认具有肾脏保护作用的血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)作为阳性对照,经12周给药观察后处死,收集血、尿、肾脏标本进行检测.结果显示模型鼠肾脏呈慢性炎症,肾小球硬化和小管间质纤维化.黄芪当归合剂(A&A)治疗明显减轻肾功能恶化和组织学损伤,肾小球硬化指数和小管间质损伤指数下降与肾功能损伤减轻呈正相关(r=0.80,P＜0.001和r=0.85,P＜0.001).细胞外基质Ⅲ、Ⅳ型胶原,纤连蛋白和层粘连蛋白明显减少.这种抗纤维化作用与ACEI相似,但肾局部的血管紧张素Ⅱ水平不下降(56.53±7.03 vs 76.62±12.88 pg/mg蛋白,P＜0.05).然而,A&A治疗组的肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)(0.051 7±0.024 8 vs 0.110 0±0.026 1,P＜0.05)和骨桥蛋白(OPN,0.010 5±0.005 3 vs 0.115±0.034,P＜0.05)表达,单核/巨噬细胞(12.8±10.9 vs 27.1±9.1,P＜0.05)浸润和α-平滑肌肌动蛋白(0.001 7±0.000 53 vs 0.015 40±0.007 90,P＜0.01)较模型组明显减少.研究表明A&A与ACEI阻抑肾纤维化和肾功能恶化的作用相似.但这种肾保护作用不是通过抑制肾内血管紧张素Ⅱ水平,而是与抑制TGF-β1和OPN的过表达、减少单核/巨噬细胞浸润及肾固有细胞活化有关.这一研究结果为临床上应用ACEI辅以中药A&A治疗慢性肾脏疾病提供了理论依据.在以上研究基础上,以银染mRNA差异显示法对比正常大鼠肾脏、肾病综合征肾硬化肾脏、A&A治疗肾脏的基因表达,并分离疾病状态下表达发生改变且能被A&A治疗纠正的基因.结果所发现的新基因可能参与了肾脏疾病的慢性进展,并可能是A&A的治疗作用的靶基因或相关基因.除对慢性肾脏疾病进行观察外,还对A&A在急性肾衰竭中的防治作用进行研究.于缺血/再灌注肾损伤模型发现黄芪和当归明显减轻急性肾损伤保护肾小管超微结构.这些作用涉及细胞内信号传导通路.(2)A&A对肾病综合征蛋白质代谢紊乱的影响:通过临床和动物实验,从在体和基因水平,应用生化、放免、同位素示踪、分子生物学等技术探讨了A&A改善NS蛋白质代谢紊乱的机制.结果显示A&A能提高肝脏白蛋白由DNA向RNA的转录速率,增加白蛋白合成,恢复血浆白蛋白水平;肌肉是机体主要的蛋白质储存库,3H-苯丙氨酸参入法测骨骼肌蛋白合成率证实该合剂能促进NS鼠肌肉蛋白合成,增加整体蛋白储备.而且对黄芪、当归各可溶性组分对白蛋白、白蛋白mRNA、白蛋白基因转录速率的影响与合剂进行了比较研究,发现以合剂效果佳.临床上对重症特发性NS的患者每天服黄芪当归(各30 g)合剂,连服30 d,用15N-甘氨酸为示踪剂的示踪动力学方法和氮平衡技术观察合剂对蛋白质代谢动力学参数和氮平衡的影响,结果发现A&A的作用是通过促进患者蛋白质净合成,提高血浆白蛋白水平,改善机体健康状况.(3)A&A对肾病综合征脂质代谢紊乱的影响:我们采用的加速肾毒血清肾炎模型,其脂代谢紊乱主要由含载脂蛋白B的脂蛋白降解及清除受阻所致,并非脂质合成过多引起.A&A可使脂谱恢复正常,主要通过增加脂蛋白脂酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性及肝脏低密度脂蛋白受体(LDL-R)mRNA表达,促进含载脂蛋白B脂蛋白的降解与清除,起降脂作用.综上所述,中药黄芪、当归对于NS的作用是多靶点、多功能的.在肾脏局部通过抑制TGF-β1、OPN表达和巨噬细胞浸润及固有细胞活化保护肾功能和减轻组织损伤;在病人(受试动物)整体起着矫正蛋白质和脂质代谢紊乱作用.
关键词： 肾变病综合征/中医药疗法 黄芪/药理学 当归/药理学 -
缺氧条件下鼠胚软骨c-Fos和巢蛋白表达及当归的保护作用
目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠软骨组织内c-Fos和巢蛋白表达的影响,以及中药当归注射液对缺氧状态下其表达的调节.方法:于2004-06/12在四川省泸州医学院动物科将成年发情期雌性Wis-tar大鼠(220～250g)12只,分别与1只雄鼠合笼饲养,于次日上午8:00发现阴栓记孕鼠怀孕0 d,饲养雌鼠至孕15 d.将12只孕鼠随机分为对照组、缺氧组和当归组各4只(每只孕鼠产胎鼠5～8只).当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧;缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组不缺氧,其余同缺氧组.然后麻醉状态下处死孕鼠,快速剖腹取胎,每组中随机选取20个鼠胚,将各组胎鼠头部软骨组织作c-Fos和巢蛋白免疫组化双标染色后,进行观察分析.结果分析与判断:每张切片用DP12数码相机在400倍下照相,并随机选择1个软骨组织视野观察计数.c-Fos免疫组化反应阳性细胞为胞核着蓝色,巢蛋白免疫组化反应阳性细胞胞质染红色.将凡是胞质染红色的细胞根据红色深浅分为3个等级:深红色计为卅、红色计为++、淡红色计为+,分别对其记数,然后将同一组内20个鼠胚3个等级的阳性细胞数分别相加,得出该组的巢蛋白免疫组化结果.既有胞核染蓝色,又有胞质染红色的为c-Fos/巢蛋白免疫组化双染阳性细胞,计数每例鼠胚软骨组织双染阳性细胞的数量.结果:60个鼠胚头部软骨组织进入结果分析.①对照组软骨组织c-Fos和巢蛋白有弱表达;与对照组相比,缺氧组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达增强[c-Fos:(5.35±1.42),(14.55±3.37)个/视野,q=16.48,P＜0.05;巢蛋白:193,427个/20个鼠胚,|RA-RB|=66;78,P＜0.05].②与缺氧组相比,当归组软骨组织c-Fos和巢蛋白表达减弱[c-Fos:(8.00±2.31)个/视野,q=11.73,P＜0.05;巢蛋白:250个/20个鼠胚,| RA-RB |=51.83,P＜0.05].结论:①缺氧可刺激鼠胚软骨组织巢蛋白的表达,c-Fos可能是缺氧刺激巢蛋白表达的机制之一.②当归注射液对缺氧鼠胚软骨组织可能有保护作用.
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四种产地当归凝血功能的实验研究
目的:对四种产地的当归进行凝血功能对比实验研究,以探讨当归因产地差异对药效产生的影响.方法:采用玻片法、试剂盒方法测定凝血时间、凝血酶原时间(TP)和白陶土部分凝血酶原时间(KPTT)来研究不同产地当归对凝血功能的影响.结果:不同产地的当归均能不同程度地延长凝血时间、PT和KPTT,甘肃岷县产当归(道地药材)的作用较好,当年产当归比去年产当归作用要好.结论:当归因产地差异会对其药效学作用产生一定影响.
关键词： 当归/药理学 凝血酶原时间/药物作用 对比研究 小鼠 大鼠 -
黄药子及配伍当归含药血清对肝细胞毒性的实验研究
目的:观察分析黄药子及配伍当归含药血清对体外培养肝细胞存活率和CPT、GOT、LDH酶活性的影响.方法:采用体外实验法,待肝细胞贴壁生长后,加入含药和空白血清,使其终浓度为20%,检测GPT、COT、LDH活性;同步以MTT法计算细胞相对存活率并观察肝细胞形态.结果:黄药子组正常肝细胞存活率明显下降,与空白组有显著性差异(P<0.05),配伍组细胞的存活率明显提高,与空白组无显著性差异(P>0.05);黄药子组(GOT、GPT、LDH活性与空白组比明显升高(P<0.01),而配伍组LDH、GOT、GPT的活性受到抑制,与空白组无显著性差异(P>0.05).结论:黄药子对正常大鼠肝细胞有明显细胞毒性,而当归对肝细胞有一定的保护作用.
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当归对TNFα导致细胞骨架重排的逆转作用
目的:研究当归对TNF-α所致人脐静脉内皮细胞(ECV304)中细胞骨架重排的逆转作用.方法:将培养人内皮细胞(ECV304)分为 4 组,即对照组、当归组、TNF-α损伤组和TNF-α+当归组,各组处理后用三维荧光显微镜观察细胞骨架 F-actin 分布的改变.结果:当归能逆转TNF-α所致内皮细胞的严重紊乱.结论:当归能逆转TNF-α导致的细胞骨架重排,这种作用可能是其抗动脉粥样硬化的主要原因之一.
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当归抗家兔主动脉粥样硬化形成的作用
为观察中药当归注射液对家兔实验性主动脉粥样硬化形成的影响并探讨其可能的作用机制.将18只家兔随机分为正常对照组、模型组和当归组3组;分别给予普通饲料(正常对照组)和高脂饲料(其它两组)喂养;当归组动物在喂高脂饲料的同时,加当归注射液.喂养第10周末颈动脉放血取血样后,处死动物,检测血脂、主动脉粥样硬化斑块面积和血清丙二醛含量.结果发现,当归组动物血中甘油三酯水平显著降低(P<0.01),但总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均无变化.同时当归组动物主动脉斑块面积显著小于模型组(P<0.01).当归组动物血清丙二醛含量也显著低于模型组,但仍比对照组高(P<0 .01).实验结果提示:当归注射液具有抗家兔主动脉粥样硬化形成的作用;这种作用与它降低血清甘油三酯水平、抗脂质过氧化有关.
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一氧化氮的免疫功能及中药的调节作用
一氧化氮具有重要的免疫学功能,通过影响天然免疫、获得性免疫、细胞因子分泌等调节免疫功能,并与自身免疫病有关.不少中药成分、单味中药及中药复方,可通过诱生、增强、抑制或调节一氧化氮数量及活性而调节一氧化氮的免疫功能.
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复方中药干预糖尿病大鼠周围神经病变的机理研究
目的:观察复方中药消渴通痹颗粒干预糖尿病大鼠周围神经病变的机理.方法:采用STZ诱发糖尿病大鼠模型,用不同剂量的消渴通痹颗粒灌胃,并与弥可保对照,2月后观察各组大鼠血糖、血清碱性髓鞘蛋白及坐骨神经糖基化终产物、醛糖还原酶的变化.结果:消渴通痹颗粒大剂量组与弥可保均能降低血清碱性髓鞘蛋白(P<0.05);消渴通痹颗粒还能降低大鼠坐骨神经醛糖还原酶活性、糖基化终产物,尤以大剂量组作用为明显(P<0.05,P<0.01).结论:益气活血中药可干预糖尿病大鼠周围神经病变,其机制与降低糖基化终产物、抑制醛糖还原酶活性,保护神经髓鞘等有关.
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当归注射液局部注射对肌腱愈合及粘连影响的实验研究
目的:本实验观察了当归注射液局部注射对吻合的兔肌腱愈合及粘连的影响.方法:采用当归注射液局部注射,并与生理盐水组及空白组对照.结果:实验组肌腱愈合速度较对照组快,且愈合质量较优,粘连范围及程度亦较小,与对照组均有显著性差异.表明:当归注射液局部注射可促进肌腱愈合,提高肌腱愈合的质量,并可有效减少或预止肌腱粘连.
关键词： 创伤和损伤/穴位疗法 当归/治疗应用 注射剂 当归/药理学 兔
