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去整合素金属蛋白酶对成骨分化的影响
目的:探讨去整合素金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)9、15、17在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)成骨分化中的作用.方法:分离ADAM9、ADAM15、ADAM17的条件基因敲除小鼠及野生型(wild type,WT)小鼠的BMMSCs,培养刺激其分化为成骨细胞.比色法测定成骨标志碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实时荧光定量PCR检测成骨早期转录因子Runx、Osterix,茜素红染色分析成骨矿物质形成情况.结果:在无刺激的对照培养下,ADAM9组(8.08±0.34)、ADAM15组(6.46 ±3.40)、ADAM17(9.30 ±2.30)组的ALP活性与WT组(9.44 ±2.50)相比差异无统计学意义(P均＞0.05).用骨形态发生蛋白质2 (bone morphogenic protein 2,BMP2)刺激培养,ADAM9组(14.22±3.25)、ADAM15组(10.14 ±2.40)的ALP均小于WT组(20.89 ±3.40),差异有统计学意义(P均＜0.05),而ADAM17组(23.56 ±2.50)虽大于WT组(20.89±3.40),但差异无统计学意义(P＞0.05).用成骨培养基(osteogenic induction medium,OST)刺激培养,ADAM9组(9.63±1.00)、ADAM15组(7.75±1.30)的ALP均小于WT组(12.97 ±1.30),而ADAM17组(20.09±1.68)大于WT组(12.97 ±1.30),差异均有统计学意义(P均＜0.05).同样,BMP2与OST联合刺激培养后检测ALP,ADAM9组(15.75 ±1.30)、ADAM15组(12.43 ±1.30)均小于WT组(26.15±1.50),而ADAM17组(29.55±2.10)大于WT组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).Runx2表达,在无刺激的对照培养下,ADAM9组(2.02±0.24)、ADAM15组(3.09 ±0.19)、ADAM17组(3.89±0.91)分别与WT组(2.02 ±0.21)相比差异均无统计学意义(P均＞0.05);BMP2刺激培养后ADAM9组(7.00 ±0.23)、ADAM15组(6.04±0.23)均小于WT组(12.6±0.23),而ADAM17组(18.52 ±1.39)大于WT组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).Osterix表达,在无刺激的对照培养下,ADAM9组(9.60±3.87)、ADAM17组(12.4 ±3.00)与WT组(10.9±1.10)比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),但ADAM15组(6.50±1.51)低于WT组(10.9±1.10),差异有统计学意义(P＜0.05);BMP2刺激培养后ADAM9组(39.20 ±3.23)、ADAM15组(20.50 ±4.80)均小于WT组(60.3 ±5.93),而ADAM17组(80.2±3.30)大于WT组,差异均有统计学意义(P均＜0.05).茜素红染色,无刺激组未见明显橘红色团块,BMP2、OST、OST+ BMP2刺激培养条件下各实验组均可见局部钙化结节形成,但量化分析差异无统计学意义(P＞0.05).结论:ADAM9、15、17参与了BMMSCs的成骨分化,为调节BMMSCs成骨分化提供了新靶点.
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ADAMTS家族在肿瘤中的研究进展
近年来，含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白酶（ ADAMTS）基因的异常表达与肿瘤的血管新生、发生发展以及淋巴结转移之间的关系成为很多学者的研究热点。诸多研究结果为寻找新型肿瘤标志物指明了方向，也为肿瘤分子靶向治疗提供了理论依据。该文就 ADAMTS 家族的结构、功能及其在肿瘤中的研究进展进行综述。
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去整合素金属蛋白酶12与含半胱氨酸蛋白酶3及增殖细胞核抗原在膀胱癌中的研究现状
膀胱癌是我国泌尿外科系统常见的恶性肿瘤,90%为移行上皮癌,具有多中心和易复发的特点.随着影像学检查水平的提高及医疗知识的普及,更多的膀胱癌患者得以早期发现与早期诊断,相对于具有侵入性的膀胱镜检查,发现并利用一些有价值的肿瘤相关表达的分子生物标记物,对于早期发现膀胱癌且避免非侵入性检查,尤其是一些影像学早期检查易漏诊的浅表性膀胱癌(Tis、T1期)而言,有着重要的临床意义.
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含三磷腺苷的Hanks平衡盐溶液处理张氏肝癌细胞诱导新去整合素金属蛋白酶相关蛋白的表达
目的 研究不同条件下张氏肝癌细胞中去整合素金属蛋白酶(ADAMs)及ADAM相关蛋白的表达和功能改变.方法 用热激、含有三磷腺苷(ATP)的Hanks平衡盐溶液(HBSS)处理张氏肝癌细胞,Western blotting检测ADAM相关蛋白,对处理过的细胞构建cDNA文库,用ADAMs通用抗体对文库进行免疫筛选,对阳性克隆的插入序列测序并进行体外表达,分析蛋白的性质.结果 包含ATP的HBSS处理张氏肝癌细胞诱导出2个新的相对分子质量为30000和50000的ADAM相关蛋白,热激处理未出现相同的反应.对处理细胞构建了cDNA文库,筛选出1个新的有碱性蛋白酶活性的ADAM相关蛋白.结论 含有ATP的HBSS处理张氏肝癌细胞可以诱导出1种新的ADAM相关蛋白.
关键词： 张氏肝癌细胞 去整合素金属蛋白酶 去整合素金属蛋白酶相关蛋白 -
ADAM9在肺结节病、非小细胞肺癌、肺结核中的差异表达水平研究
目的 探讨去整合素金属蛋白酶(ADAM9)在肺结节病、非小细胞肺癌(肺癌)、肺结核中差异表达情况.方法 采用免疫组织化学染色分别检测16例肺结节病患者(肺结节病组)、16例肺结核患者(肺结核组)、10例肺癌患者(肺癌组)和8名正常人(正常对照组)的肺组织中ADAM9蛋白表达,实时定量PCR检测4组支气管肺泡灌洗液(BALF)中ADAM9 mRNA表达,应用ELISA分析4组血清和BALF中ADAM9含量.结果 肺组织中ADAM9蛋白及BALF中ADAM9 mRNA在肺癌组中的表达水平均明显高于正常对照组(P均＜0.05),在肺结节病组、肺结核组中的表达水平均明显低于正常对照组(P均＜0.05),在肺结节病组与肺结核组的表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).肺结节病组血清和BALF中ADAM9含量明显低于正常对照组和肺癌组(P＜0.05),与肺结核组比较差异则无统计学意义(P＞0.05).结论 ADAM9在肺结节病、肺癌、肺结核中存在差异表达,其在肺癌中呈高表达,在肺结节病及肺结核中则呈低表达.
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介导可溶性MHCⅠ产生的去整合素金属蛋白酶初步筛选研究
目的:以HEK293细胞为研究模型,筛选介导可溶性MHC Ⅰ产生的去整合素金属蛋白酶.方法:将ADAM8、ADAM10、ADAM15和ADAM17 cDNA分别克隆入pcDNA3.1/V5载体,并用TransIT(R)-LT1转染试剂将构建好的载体转染入HEK293细胞,用潮霉素B筛选ADAMs蛋白稳定表达克隆;用SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光法检测ADAMs在HEK293细胞中的表达;用细胞表面生物素标记、免疫沉淀、SDS-PAGE、免疫印迹结合化学发光检测ADAMs过表达对可溶性MHC Ⅰ产生的影响.结果:成功获得稳定表达ADAMs的HEK293细胞;过表达ADAM10和ADAM17可增强HEK293细胞产生可溶性MHC Ⅰ.结论:ADAM10和ADAM17具介导可溶性MHC Ⅰ产生的潜能.
关键词： 主要组织相容性复合体 去整合素金属蛋白酶
