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抗p185erbB2单抗的制备及其生物学活性
目的: 制备抗p185erbB2单克隆抗体,并研究其对表达p185erbB2肿瘤细胞的结合及生长抑制作用.为后续工作奠定基础.方法:用NIH3T3-erbB2细胞免疫BALB/c小鼠,制备抗p185erbB2单克隆抗体.经ELISA、免疫沉淀、Western blot及免疫组化检测单抗的结合特异性.并用MTT比色法检测所获抗体对表达p185erbB2肿瘤细胞的生长抑制作用.结果:经筛选获得1株对表达p185erbB2细胞反应阳性,不表达p185erbB2细胞反应阴性的单克隆抗体1H3;免疫沉淀、Western blot均表明1H3可与p185erbB2分子特异性结合;免疫组化结果显示1H3对c-erbB2阳性的乳癌组织呈特异性着染;MTT比色法检测表明1H3对不同的p185erbB2阳性肿瘤细胞均有不同程度的生长抑制作用.结论: 单克隆抗体1H3能与p185erbB2特异结合,并可不同程度地抑制NIH3T3-erbB2或SKBR3细胞的生长,除可应用于临床对p185erbB2的检测外,尚具有肿瘤生物治疗的潜在应用开发价值.
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抗人p185erbB2人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定
目的:HER2/neu过度表达见于多种恶性肿瘤.作为肿瘤抗原,p185erbB2是一个理想的肿瘤治疗靶点.本实验在既往工作基础上,构建嵌合型抗p185erB2单克隆抗体(单抗)的真核表达载体,并在CHO-dhfr-细胞中表达,从而降低鼠源性抗体的免疫原性,为进一步的应用研究奠定基础.方法:RT-PCR扩增p185erbB2单抗1-2的轻、重链可变区基因,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中,脂质体转染CHO-dhfr-细胞.经RT-PCR、间接ELISA、Western blot检测人-鼠嵌合抗体的表达水平,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定.此外,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185erbB2的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用.结果:用RT-PCR、间接ELISA、Western blot方法证明人-鼠嵌合抗体在CHO-dhfr-细胞中表达;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185erbB2的细胞反应阳性,与低表达p185erbB2的细胞反应阴性;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185erbB2分子特异性结合;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185erbB2的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用.结论:CHO-dhfr-细胞表达的人-鼠嵌合抗体可与p185erbB2特异性结合,并可抑制高表达p185erbB2的肿瘤细胞生长,表明抗人p185erbB2人-鼠嵌合抗体具有肿瘤生物治疗的潜在应用价值.
