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DNA疫苗的研究现状
DNA疫苗的概念提出已有十几年的时间,其间针对DNA疫苗的研究工作取得了很大进展,其有效性已在动物体内得到了验证,而且部分疫苗已进入临床试验阶段,但在取得进展的同时也遇到了许多制约其发展的难题.本文对DNA疫苗发展现状,遇到的问题,采取的策略及可能引起的副反应加以综述.
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增强型绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫成虫体内的瞬时表达
目的探讨异源性增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因在日本血吸虫成虫体内表达的可能性.方法运用电穿孔技术将质粒pEGFP-C1导入日本血吸虫成虫体内,提取分离体外培养48小时成虫的基因组DNA、总RNA和全虫蛋白,分别用PCR、RT-PCR和Western blot验证转基因在成虫体内的存在、转录和翻译.同时,使用激光共聚焦扫描显微镜对EGFP在成虫体内进行定位.结果 PCR和RT-PCR分别成功的扩增出760bp和276bp的预期大小的片断,Western-blot证实了EGFP基因在成虫体内的表达;激光共聚焦显微镜观察到,EGFP主要定位在成虫的皮层,口吸盘和尾部尤为明显.结论电穿孔技术成功地将异源基因引入日本血吸虫成虫体内并获得表达,为转基因血吸虫和基因功能的研究打下基础.
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电穿孔技术促进甲硝唑家兔在体经皮吸收的研究
目的研究电穿孔技术对甲硝唑家兔在体经皮吸收的影响.方法以甲硝唑为模型药物,通过采用HPLC法测定不同时间的血药浓度,研究电穿孔技术(指数衰减脉冲,电容器电容为22 μF, 脉冲电压为380 V,脉冲率为4 个 ·min-1,脉冲时间为1.74 ms,脉冲数为50)对小分子,非解离型药物在家兔腹部皮肤在体经皮吸收的影响.结果与被动扩散相比,电穿孔可使甲硝唑迅速透过皮肤吸收进入血液,0.5 h时就可使血药浓度达到(8.56±3.63) nmol ·mL-1,被动扩散则需2 h时才可在血中测到药物,浓度为(4.35±0.20) nmol ·mL-1.2 h以后,被动扩散与电穿孔的透皮吸收差异无显著性.结论电穿孔可迅速促进小分子非解离型药物甲硝唑的经皮吸收,缩短药物经皮吸收的时滞.
