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苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响
目的 研究体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性的影响及作用机制.方法运用荧光偏振技术和ATPase检测技术分析苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶活性、DNA结合活性和ATPase活性的影响.结果苯甲酸雌二醇对RecQ解旋酶活性、DNA结合活性及ATPase活性均有弱抑制作用,对RecQ解旋酶活性抑制常数K为5×10-3 nmol·L-1,对dsDNA和ssDNA结合活性的K分别为5×10-2和0.5 nmol·L-1.结论在体外苯甲酸雌二醇对大肠杆菌RecQ解旋酶生物学活性具有弱抑制作用,二者至少有两个作用位点.
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抗RecQ解旋酶单克隆抗体6H5在几种肿瘤细胞中的初步应用
目的:制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(6H5抗体),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的检测.方法:在Balb/c小鼠腹腔接种杂交瘤细胞6H5后收集腹水,ELISA法鉴定腹水中6H5抗体,间接免疫荧光技术检测6H5抗体与乳腺癌细胞MDA-MB-435、人肾癌细胞GRC-1、人舌癌细胞Tca8113中BLM、RecQ4和RecQ5的结合;以6H5抗体作为一抗,免疫组织化学染色法分析Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞及肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达水平.结果:经鉴定,小鼠腹水中6H5抗体阳性,该抗体能识别不同肿瘤细胞株中的BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测Jurkat、MDA-MB-435肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达;RecQ解旋酶在Jurkat肿瘤干细胞中表达水平明显高于Jurkat肿瘤细胞,而在MDA-MB-435肿瘤干细胞表达水平则低于MDA-MB-435肿瘤细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RecQ家族解旋酶可以作为多种肿瘤细胞及肿瘤干细胞表面标志物的备选指标.
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抗RecQ解旋酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用
目的 制备抗RecQ解旋酶单克隆抗体(mAb),鉴定其生物学特性并开展其对肿瘤细胞中RecQ解旋酶的检测.方法 以纯化鉴定后的重组大肠杆菌RecQ解旋酶免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗RecQ解旋酶mAb.用秋水仙素阻断法对杂交瘤细胞进行染色体核型分析,用间接ELISA检测mAb的免疫球蛋白(Ig)亚型与效价,用Western blot法和荧光偏振技术鉴定mAb的生物学特性,使用间接免疫荧光技术检测mAb与MDA-MB-231乳腺癌细胞中BLM、RecQ4和RecQ5的作用.使用免疫组织化学染色法分析该mAb与K562肿瘤细胞及其干细胞中RecQ解旋酶的结合.结果 获得能稳定分泌抗RecQ解旋酶mAb的杂交瘤细胞株6H5,染色体数目在94 ～ 104,抗体亚型为IgG1型,腹水效价为1×l0-7.该mAb能特异性结合大肠杆菌RecQ解旋酶,抑制其与DNA的结合,并能识别BLM、RecQ4和RecQ5解旋酶,还可敏锐检测K562肿瘤细胞与肿瘤干细胞中RecQ解旋酶的表达.结论 成功制备获得效价高、特异性强的抗RecQ解旋酶mAb.
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人类RecQ解旋酶在DNA损伤修复通路中的作用
人类RecQ解旋酶是一种多功能DNA解旋酶,在DNA损伤修复及维护基因组稳定性中起着重要作用.本文综合介绍了RecQ解旋酶的结构与生物学特性及其在多条DNA损伤修复通路中的作用,以及RecQ解旋酶在疾病治疗中的应用前景和人类RcCQ解旋酶缺陷与肿瘤、遗传性疾病、环境相关疾病的关系.
