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高效阴离子交换色谱法测定依诺肝素钠1,6-脱水衍生物含量
目的 建立依诺肝素钠特异性末端结构1,6-脱水衍生物结构的含量测定方法.方法 肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位,水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子交换色谱法方法进行分析.采用Waters Spherisorb S5 SAX(4.0 mm x250 mm,5μm)色谱柱,以0.28 gL·-1磷酸二氢钠溶液为流动相A含0.28 g.L-1磷酸二氢钠及140 g·L-1高氯酸钠的溶液为流动相B进行梯度洗脱(0 ～ 20 min,3％～35％B;20-50 min,35％～100％B;50 ～ 60 min,100％B;60～61 min,100％～ 3％B,61～79 min,3％B),流速0.8 mL·min-1,柱温为50℃;检测波长为234 nm,并用归一化面积百分比法计算摩尔百分含量.结果 筛选出了酶解效果达标的国产肝素酶并优化了酶解条件,酶解后1,6-脱水△ⅠS-ⅠS与1,6-脱水△ⅠS峰面积比＜1.15;优化色谱条件后△ⅠA和1,6.脱水△ⅠS的分离度＞1.5;硼氢化钠还原后的溶液色谱图中,△ⅠS和还原△ⅠS的峰面积比均小于0.02;两家国产依诺肝素钠生产企业样品结果均在15％～25％内.结论 方法可对依诺肝素钠特征还原末端结构进行分离和定量,作为对低分子肝素进行微观结构分析的首个鉴别项目,已收载入新修订依诺肝素钠国家标准草案中.
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高效阴离子交换色谱法分离不对称PCR产物
目的为分离制备高纯度的DNA单双链提供新的技术方法.方法利用SOURCE15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链,并测定回收率.结果SOURCE 15Q柱在紫外检测波长为260nm,流速为1ml/min,流动相为pH9.0时,以20mmol/L Tris-HCl缓冲液+2.0mol/LNaCl,线性浓度梯度洗脱的分离条件下,能很好地对85个碱基长度不对称PCR产物的单双链进行分离;对24mer单链样品进行回收率测试,回收率为92.46%.结论利用SOURCE 15Q强阴离子交换柱分离纯化DNA单双链的方法简便、快捷、稳定、分辨率高、纯度高,适合核酸单链和双链样品的分离、纯化、鉴定和制备.
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离子色谱法测定肝素及其类似物中游离和结合硫酸根
目的:测定肝素及其类似物中游离和结合硫酸根含量.方法:高效阴离子交换色谱法,采用酸水解法或氧瓶燃烧法对样品进行有机破坏后,测定样品中总硫酸根含量,样品直接溶解后测定样品中游离硫酸根含量,通过计算得到样品中结合硫酸根含量.结果:对多批肝素钠、硫酸皮肤素、硫酸软骨素、多硫酸软骨素进行了测定.结论:本文实验方法可以用于肝素类样品游离和结合硫酸根的测定.
关键词： 肝素 肝素类似物 游离硫酸根 结合硫酸根 高效阴离子交换色谱法
