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应用生物膜干涉技术测定治疗性单抗与新生儿Fc受体的亲和力
目的:建立基于生物膜干涉(Biolayer interferometry,BLI)技术检测治疗性单抗与新生儿Fc受体(neonatal Fc receptor,FcRn)亲和力的方法.方法:链霉亲和素(streptavidin,SA)偶联传感器结合生物素标记FcRn后,使用稀释液(0.1％ BSA/0.05％ Tween20/PBS,pH 6.0)封闭传感器后采用BLI方法检测,以稀释液1∶2系列稀释样品(浓度范围为125 ～ 16 000 nmol·L-1),空白对照采用未结合FcRn的传感器检测上述系列稀释样品.结果采用Steady state analysis方式拟合,计算样品平衡常数(KD)值,计算样品各自的95％可信区间(confidence interval,CI),对不同抗体与FcRn的亲和力进行比较.结果:IgG-FcRn结合曲线呈现明显的快结合-快解离形态.应用建立的方法检测不同单抗与FcRn的亲和力结果:bevacizumab与FcRn的亲和力较trastuzumab高95％,存在显著性差异;bevacizumab生物类似药(similar biotherapeutic products,SBP)-1与FcRn亲和力较原研药(reference biotherapeutic products,RBP)有32％的升高,且有显著性差异.其他Cys-偶联药物前后、Lys-偶联药物前后、表达细胞系由SP2/0更换为CHO均未对IgG-FcRn亲和力产生影响.结论:建立了优化的基于生物膜干涉技术检测IgG抗体与FcRn亲和力测定方法,可用于单抗及抗体偶联药物与FcRn亲和力的评价.
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生物膜干涉技术、HPLC及ELISA在抗体定量检测中的比较分析
目的 比较3种方法定量检测抗体样品的异同,为抗体药物研发和生产过程中不同类型的样品定量检测选择合适的方法提供依据.方法 分别利用生物膜干涉技术、Protein G-HPLC以及双抗体夹心ELISA法建立定量检测抗体样品的方法,比较其检测的准确度、精密度及其检测特点.结果 3种方法检测同一抗体样品的含量基本一致,生物膜干涉技术检测值相对标准偏差小(CV＜5％),HPLC次之(CV＜8％),ELISA法的CV值为5％～15％.结论 生物膜干涉技术检测快速,结果精确,通量高,无需样品前处理,适合于样品筛选以及发酵原液、中间品等检测;Protein G-HPLC检测准确,线性范围宽,回收率高,认可度高,适合于样品含量的确证;ELISA法低检测限值小,操作简单,仪器要求低,适合于微量样品的检测.
